3.9. Fluorescence microscopic exami

3.9. Fluorescence microscopic examination
Acridine orange and propidium iodide staining was used to study the morphological characterisation of the cells. HT-29 cells were incubated, for 8, 16 and 24 h (corresponding to the times of high caspase activity) with the IC50 concentration of WTE and viewed under a fluorescent microscope to analyse the viable cells, early apoptosis and late apoptosis (Fig. 3).
Acridine orange (AO) and propidium iodide (PI) stains the DNA within the nuclei. AO can only cross the plasma membrane of viable and early apoptotic cells. AO exhibits viable cells with green nuclei and an intact structure and early apoptotic cells with bright-green nuclei showing condensation of chromatin in the nucleus. PI penetrates the nuclear matter when the cell membrane integrity is disturbed and produces orange fluorescence. Apoptotic cells are stained green with nuclei stained orange, and contain multiple yellow/green dots of condensed nuclei. PI stained necrotic cells appear as bright-red colour and dead cells with red nuclei .
The results showed that the untreated cells showed normal configuration with green nuclei and an intact structure, without prominent apoptosis (Fig. 3A). As shown in Fig. 3B and C, early apoptosis features, such as cell shrinkage, membrane blebbing and chromatin condensation were observed after 8 h and more cells showed apoptotic features at 16 h which represent intercalated acridine orange (bright green) amongst the fragmented DNA and nuclear fragmentation. In Fig. 3D, the presence of reddish-orange colour was observed after 24 h of incubation. AO/PI staining of HT-29 cells treated with WTE showed that the cells had undergone remarkable morphological changes in apoptotic bodies.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.9 การ fluorescence ตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์Acridine ส้มและย้อมสีของ propidium ไอโอไดด์ใช้ศึกษาตรวจลักษณะเฉพาะของของเซลล์ เซลล์เอชที-29 ถูก incubated สำหรับ 8, 16 และ 24 h (ตรงกับเวลาของกิจกรรมสูง caspase) กับความเข้มข้น IC50 ของ WTE และดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสการวิเคราะห์เซลล์ทำงานได้ apoptosis ช่วงต้น และปลาย apoptosis (Fig. 3) ส้ม acridine (อ่าว) และ propidium คราบไอโอไดด์ (PI) ดีเอ็นเอภายในแบบแอลฟา อ่าวเท่านั้นสามารถข้ามเยื่อพลาสมาของเซลล์ได้ และต้น apoptotic อ่าวจัดแสดงสีเขียวแอลฟาเซลล์ทำงานได้ และมีโครงสร้างเหมือนเดิม และช่วงเซลล์ apoptotic แอลฟาสีเขียวสดใสแสดงสรุปโครมาตินในนิวเคลียส PI แทรกซึมเรื่องนิวเคลียร์ความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์เป็น disturbed และสร้าง fluorescence สีส้ม Apoptotic เซลล์มีสีเขียวกับสีส้มแอลฟา และประกอบด้วยจุดสีเหลือง/สีเขียวหลายของแอลฟาบีบ PI สี necrotic เซลล์ปรากฏเป็นสีแดงสดใสและแดงแอลฟาเซลล์ตายผลพบว่า เซลล์ไม่ถูกรักษาพบว่าค่าปกติ มีสีเขียวแอลฟาและมีโครงสร้างเหมือนเดิม ไม่เด่น apoptosis (Fig. 3A) ตามที่แสดงใน Fig. 3B และ C ต้น apoptosis คุณลักษณะ เช่นการหดตัวของเซลล์ เมมเบรน blebbing และโครมาตินมีหยดน้ำเกาะที่สังเกตหลัง 8 h และเซลล์เพิ่มเติมพบว่า apoptotic ห้อง 16 h ซึ่งแสดง intercalated acridine ส้ม (เขียวอ่อน) ท่ามกลางดีเอ็นเอที่มีการกระจายตัวและการกระจายตัวของนิวเคลียร์ ใน Fig. 3D แสดงสีน้ำตาล-ส้มถูกพบหลังจาก 24 ชมของคณะทันตแพทยศาสตร์ รับ อ่าว/PI ย้อมสีเซลล์เอชที-29 แสดงให้เห็นว่า เซลล์มีเปลี่ยนแปลงสัณฐานเด่นในร่างกายของ apoptotic WTE ออก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.9 กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์
เรือโว้ย propidium ไอโอไดด์และวิธีการที่ใช้ในการศึกษาทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ ht-29 cells ) , 8 , 16 และ 24 ชั่วโมง ( ตรงกับเวลาของกิจกรรมแคสเปสสูง ) กับ ic50 ความเข้มข้นของ wte และดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบฟลูออเรสเซนต์เพื่อวิเคราะห์เซลล์วางอนาคตเกิดเร็วและช้า ( ( รูปที่ 3 )
เรือโว้ย ( อ่าว ) และ propidium ไอโอไดด์ ( PI ) คราบดีเอ็นเอในนิวเคลียส . อ่าวเท่านั้นที่สามารถผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ของเซลล์ในกลุ่มที่มีการวางอนาคต และเร็ว อ่าว จัดแสดงได้เซลล์ที่มีนิวเคลียสสีเขียวและโครงสร้างเหมือนเดิมและต้นเนื้อเยื่อกับนิวเคลียสสีเขียวสดใสแสดงการควบแน่นของโครมาตินในนิวเคลียสปี่แทรกซึมเรื่องนิวเคลียร์ เมื่อเยื่อหุ้มเซลล์ที่สมบูรณ์ถูกรบกวนและสร้างเรืองแสงสีส้ม เนื้อเยื่อเป็นคราบสีเขียวกับสีส้มของนิวเคลียส และมีสีเหลือง / เขียวหลายจุดบีบนิวเคลียส . พี่คราบเซลล์ที่ปรากฏเป็นสีแดงสีและเซลล์ที่ตายแล้วกับนิวเคลียสแดง
พบว่าเซลล์ดิบพบการกำหนดค่าปกติกับนิวเคลียสสีเขียวและโครงสร้างเหมือนเดิม ไม่เด่น ( ( รูปที่ 3 ) ดังแสดงในรูปที่ 3 บี และซี คุณสมบัติแรก ( เช่นเซลล์หดตัวและพบเซลล์เยื่อ blebbing / หลัง 8 H และเซลล์มากขึ้น พบในกลุ่มที่มีคุณสมบัติที่ 16 ชั่วโมง ซึ่งเป็นตัวแทนอธิกมาสเรือโว้ย ( สีเขียว ) ท่ามกลางการแยกส่วนและนิวเคลียร์ DNA fragmentation . ในรูป 3 มิติ มีสีส้มแดง พบหลังจาก 24 ชั่วโมงของการบ่มอ่าว / PI staining ht-29 เซลล์พบว่าเซลล์ที่ได้รับการรักษาด้วย wte มีระดับโดดเด่นในกลุ่มที่มีการเปลี่ยนแปลงทางร่างกาย .