Direct cloning and reassembly of se

Direct cloning and reassembly of secondary metabolite biosynthetic gene clusters. (A) To capture a long cluster, a linear cloning vector flanked with homology arms is
prepared and then co-transferred with the cluster-harboring genomic DNA into yeast (TAR) or engineered Escherichia coli (LLHR). Catalyzed by the native recombination
mechanism in yeast or expressed Red/ET in E. coli, the homologous recombination between the cluster ends and the vector homology arms yields a circular replicable
construct. (B) For reassembly of a cluster, genes are isolated individually by PCR, subcloning, or chemical synthesis, and are modified by the addition of homology ends, ends
with restriction sites, or specific recombination sites. Strong or inducible promoters can be introduced in front of genes. Next, the gene fragments are assembled in a vector by in
vivo homologous recombination in yeast, or by in vitro site-specific recombination or ligation. Assembled products can be further amplified in E. coli.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โดยตรงและนำมารวมกันกลุ่มยีน biosynthetic รอง metabolite ที่เป็นโคลน (A) การจับภาพคลัสเตอร์ยาว เป็นเวกเตอร์ cloning เส้นขนาบข้างกับแขน homologyเตรียมพร้อมแล้วโอนร่วมกับการคลัสเตอร์ harboring genomic DNA เป็นยีสต์ (TAR) หรือวิศวกรรม Escherichia coli (LLHR) กระบวน โดย recombination ดั้งเดิมกลไกในยีสต์หรือแดงแสดง ET ใน E. coli, recombination homologous ระหว่างปลายคลัสเตอร์และแผ่นดิน homology เวกเตอร์ทำให้วงการจำลองแบบสร้าง (ข) สำหรับนำมารวมกันของคลัสเตอร์ ยีนที่แยกต่างหากแต่ละ โดย PCR, subcloning หรือสารเคมีสังเคราะห์ และปรับเปลี่ยน โดยการเพิ่ม homology จบ สิ้นสุดจำกัดเว็บไซต์ หรือ recombination เฉพาะไซต์ แข็งแรง หรือ inducible ก่อสามารถนำหน้ายีน ถัดไป ประกอบชิ้นส่วนยีนในเวกเตอร์โดยในvivo homologous recombination ยีสต์ หรือโดยเฉพาะ recombination ในไข่ ประกอบผลิตภัณฑ์สามารถเพิ่มเติมขยายใน E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคลนโดยตรงและ reassembly ของกลุ่มยีนสังเคราะห์ metabolite รอง (A) ในการจับกระจุกยาวเวกเตอร์โคลนเชิงเส้นขนาบข้างด้วยอาวุธที่คล้ายคลึงกันคือการ
เตรียมความพร้อมและจากนั้นร่วมถ่ายโอนที่คลัสเตอร์เยิ้มดีเอ็นเอเป็นยีสต์ (TAR) หรือวิศวกรรมเชื้อ Escherichia coli (LLHR) เร่งปฏิกิริยาด้วยการรวมตัวกันพื้นเมือง
กลไกในยีสต์หรือแสดงความแดง / ET ในเชื้อ E. coli, รวมตัวกันอีกคล้ายคลึงกันระหว่างกลุ่มลงท้ายและแขนที่คล้ายคลึงกันเวกเตอร์ผลตอบแทนถัวเฉลี่ยจำลองแบบวงกลม
สร้าง (B) สำหรับ reassembly ของกลุ่มยีนจะแยกเป็นรายบุคคลโดยวิธี PCR, subcloning หรือสังเคราะห์สารเคมีและมีการแก้ไขโดยการเพิ่มของปลายคล้ายคลึงกันจบ
กับเว็บไซต์ข้อ จำกัด หรือเว็บไซต์ที่เฉพาะเจาะจงรวมตัวกันอีก โปรโมเตอร์แข็งแกร่งหรือ inducible สามารถนำมาใช้ในด้านหน้าของยีน ถัดไปชิ้นส่วนของยีนที่มีการประกอบในเวกเตอร์โดยใน
ร่างกายรวมตัวกันอีกคล้ายคลึงกันในยีสต์หรือในหลอดทดลองรวมตัวกันอีกเว็บไซต์ที่เฉพาะเจาะจงหรือ ligation ผลิตภัณฑ์ประกอบสามารถขยายต่อไปใน E. coli

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนยีนและระดับมัธยมศึกษาโดยตรง ครั้งการยีนกลุ่ม ( 1 ) จับกลุ่มยาวเวกเตอร์โคลนเส้นขนาบข้างด้วยตัวแขน
เตรียมแล้ว Co โอนกับ genomic DNA กลุ่มที่เข้าสู่ยีสต์ ( TAR ) หรือวิศวกรรม Escherichia coli ( llhr ) กลไกการเร่งปฏิกิริยาด้วย
พื้นเมืองในยีสต์ หรือมีสีแดง / ET ใน E . coli ,ในการเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มและสิ้นสุดเวกเตอร์แขนผลผลิตเป็นวงกลมสามารถจําลองแบบ

. ( ข ) สำหรับครั้งของกลุ่มยีนจะแยกเป็นรายบุคคล โดย PCR ของยีน หรือการสังเคราะห์ทางเคมี และมีการเพิ่มของตัวสิ้นสุด สิ้นสุด
กับเว็บไซต์ข้อ จำกัด หรือเฉพาะการเว็บไซต์แข็งแรงหรือ inducible โปรโมเตอร์สามารถแนะนำในส่วนหน้าของยีน ถัดไป , ยีน ชิ้นส่วนประกอบในเวกเตอร์โดยการเปรียบเทียบใน
ซึ่งในยีสต์ หรือโดยเฉพาะในหลอดทดลองหรือการ Ligation . ผลิตภัณฑ์ประกอบ สามารถต่อขยายใน E . coli