The laboratory S. cerevisiae strain

The laboratory
S. cerevisiae strain FY5 (Mat a and α, S288C background)
was used as the background strain for constructing mutants.

The mutants in this study were made by first PCR-amplifying an antibiotic
resistance marker surrounded by Lox sites, followed by transformation
of the construct into the yeast to delete the targeted gene in the
genome following the protocol from Gietz and Woods (2006).

Two different
antibiotic resistance markers (Kanamycin A and HygromycinB) were used in this study to be able to select double mutants on selective media containing both antibiotics.

The single deletions with each different marker were mated to obtain diploid yeasts with double deletion.
The diploid cells were then sporulated to obtain haploid cells with both deletions and antibiotic resistance markers.
Primer sequences used in this study are listed in Table A in Appendix A. Deletions were con- firmed by PCR using the primers listed in Table B in Appendix A.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ห้องปฏิบัติการ S. cerevisiae ต้องใช้ FY5 (พรมมี และด้วยกองทัพ พื้นหลัง S288C)ใช้เป็นสายพันธุ์พื้นหลังสำหรับการสร้างสายพันธุ์สายพันธุ์ในการศึกษานี้ทำ โดยแรก PCR-มือเป็นยาปฏิชีวนะรายล้อม ด้วย Lox ตาม ด้วยการแปลงเครื่องต้านทานของโครงสร้างในยีสต์เพื่อลบยีนเป้าหมายในการกลุ่มตามโพรโทคอลจาก Gietz และไม้ (2006) สองแตกต่างกันเครื่องหมายของความต้านทานยาปฏิชีวนะ (กานามัยซิน A และ HygromycinB) ถูกใช้ในการศึกษานี้สามารถเลือกสายพันธุ์คู่บนสื่อที่ใช้ประกอบด้วยทั้งยาปฏิชีวนะ ลบเดียวกับแต่ละเครื่องหมายต่าง ๆ ถูก mated รับ yeasts diploid กับคู่ลบเซลล์ diploid ถูกแล้ว sporulated รับเซลล์ haploid ลบและเครื่องหมายของความต้านทานยาปฏิชีวนะ ลำดับรองพื้นที่ใช้ในการศึกษานี้อยู่ในตาราง A ในภาคผนวก A. ลบถูกยืนยัน โดย PCR ที่ใช้ไพรเมอร์ที่แสดงอยู่ในตาราง B ในภาคผนวก A. คอน-

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ห้องปฏิบัติการเอส cerevisiae สายพันธุ์ FY5 (จ้าและαพื้นหลัง S288C)
ถูกใช้เป็นสายพันธุ์พื้นหลังในการสร้างการกลายพันธุ์. กลายพันธุ์ในการศึกษานี้ถูกสร้างขึ้นครั้งแรกโดยการขยาย-PCR ยาปฏิชีวนะเครื่องหมายต้านทานล้อมรอบด้วยสถานที่Lox ตามด้วยการเปลี่ยนแปลงของโครงสร้างลงยีสต์ลบยีนที่กำหนดเป้าหมายในจีโนมต่อไปนี้โปรโตคอลจาก Gietz และวูดส์ (2006). สองแตกต่างกันเครื่องหมายต้านทานยาปฏิชีวนะ (กานามัยซินและ HygromycinB) ถูกนำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้จะสามารถเลือกการกลายพันธุ์คู่ในสื่อเลือกที่มีส่วนผสมของยาปฏิชีวนะทั้งสอง . ลบเดียวกับแต่ละเครื่องหมายที่แตกต่างกันแต่งงานแล้วจะได้รับยีสต์ซ้ำกับการลบคู่. เซลล์ซ้ำถูกแล้ว sporulated เพื่อให้ได้เซลล์เดี่ยวที่มีการลบและเครื่องหมายความต้านทานยาปฏิชีวนะ. ลำดับไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีการระบุไว้ในตารางในภาคผนวก A . ยืนยันการลบถูกทำาโดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่ระบุไว้ในตาราง B ในภาคผนวก A

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ห้องปฏิบัติการ
S . cerevisiae สายพันธุ์ fy5 ( เสื่อและα s288c , พื้นหลัง )
ถูกใช้เป็นสายพันธุ์พื้นหลังสำหรับการสร้างสายพันธุ์

พวกกลายพันธุ์ ในการศึกษานี้ สร้างโดยแรก PCR amplifying ยาปฏิชีวนะ
ความต้านทานเครื่องหมายล้อมรอบเว็บไซต์ปลาแซลมอนรมควัน , ตามด้วยการเปลี่ยนแปลง
ของสร้างในยีสต์ เพื่อลบเป้าหมาย ยีนใน
จีโนมดังต่อไปนี้โปรโตคอลจาก gietz และป่า ( 2006 )


ที่ต้านทานยาปฏิชีวนะที่แตกต่างกันสองเครื่องหมาย ( kanamycin และ hygromycinb ) สถิติที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ จะสามารถเลือกพันธ์คู่บนสื่อเลือกที่มีทั้งยาปฏิชีวนะ

ลบเดียวกับที่แตกต่างกันในแต่ละเครื่องหมายถูกผสมพันธุ์เพื่อให้ได้ยีสต์กับคู่
ซ้ำลบเซลล์ดิพลอยด์โครโมโซมเซลล์แล้วสร้างสปอร์มากขอรับ มีทั้งลบและเครื่องหมายความต้านทานยาปฏิชีวนะ
รองพื้นลำดับที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ มีการระบุไว้ในตารางในภาคผนวก A ลบเป็น con - ยืนยันโดยวิธี PCR โดยใช้ primers ที่ระบุไว้ในตาราง B ในภาคผนวก A