3.4. Valuation of isotope-based qua

3.4. Valuation of isotope-based quantification
Stable isotope-coded strategy for relative quantification by
HPLC–MS/MS has been verified according to reported works with
a little modification (Dai et al., 2012). On one hand, three fixed concentration
of BAs standards (0.025 mM, 0.05 mM and 0.1 mM)
were derivatized by d0-MASC, respectively. Meanwhile, three aquilots
of BAs standards (0.05 mM) were derivatized by d3-MASC. The
equal volume of d0-MASC labeled BAs (light form) and d3-MASC
labeled BAs (heavy form) were mixed to obtain the mixtures containing
d0-/d3-MASC labeled BAs at the ratio of 1:2, 1:1, 2:1,
respectively. The mixtures were analyzed by the HPLC–MS/MS
individually to study the signal intensity ratios of light/heavy form
derivatives; on the other hand, d0-MASC and d3-MASC were
applied to label the BAs standards (0.05 mM), respectively. After
the derivatization, the d0-/d3-MASC labeled solutions were mingled
at a series of volume ratios (10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5, and
1:10) and the mixtures were analyzed by HPLC–MS/MS.
With TYR as representative, the valuation of stable
isotope-coded strategy for relative quantification is described in
Fig. 2. Fig. 2A shows that the main MS/MS fragment ion of
d0-MASC and d3-MASC labeled TYR derivatives are at m/z 208
and m/z 211.2, respectively. As can be seen in Fig. 2B, the MRM signals
of the d0-MASC and d3-MASC labeled TYR are found in one
HPLC–MS/MS run, and there is no other difference except minor
difference of elution time between heavy and light form. Fig. 2C
reveals that the EIC signal intensity ratio of light/heavy ion pairs
is approximately 0.49 (ranging from 0.48 to 0.50, average = 0.49),
1.02 (ranging from 1.01 to 1.05, average = 1.02) and 2.00 (ranging
from 1.97 to 2.03, average 2.00) for BA derivatives when the
H/D = 0.5, H/D = 1 and H/D = 2. The calibration curve plotted by
the signal ratios of the light/heavy ion pairs versus the ratios of volume
(H/D = 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1) exhibits excellent linearity with
slope approximated to 1.0 (See Fig 2D). The valuation data for other
BAs are shown in Supplementary Material Figs. S3 and S4. These
results indicated that the isotope-coded derivatization is adequate
for accurate quantification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4
การประเมินมูลค่าของปริมาณไอโซโทปที่ใช้กลยุทธ์ไอโซโทปรหัสมีเสถียรภาพสำหรับปริมาณญาติโดย
HPLC-MS / MS
ได้รับการยืนยันตามการกระทำของรายงานที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กๆ น้อย ๆ (Dai et al., 2012) หนึ่งในมือสามคงความเข้มข้นของมาตรฐาน BAs (0.025 มิลลิ, 0.05 และ 0.1 มิลลิมิลลิ) ถูก derivatized โดย d0-masc ตามลำดับ ในขณะที่สาม aquilots มาตรฐาน BAs (0.05 มม) ได้รับการ derivatized โดย d3-masc ปริมาณที่เท่ากันของ d0-masc ติดป้าย BAs (แบบอ่อน) และ d3-masc ติดป้าย BAs (แบบหนัก) ได้รับการผสมจะได้รับการผสมที่มีd0- / d3-masc ติดป้าย BAs ในอัตราส่วน 1: 2, 1: 1, 2: 1 ตามลำดับ ผสมถูกวิเคราะห์โดยวิธี HPLC-MS / MS เป็นรายบุคคลเพื่อศึกษาอัตราส่วนความเข้มของสัญญาณของแสง / รูปแบบหนักสัญญาซื้อขายล่วงหน้า บนมืออื่น ๆ , d0-masc และ d3-masc ถูกนำไปใช้กับฉลากมาตรฐานBAs (0.05 มม) ตามลำดับ หลังจากอนุพันธ์ที่ d0- / d3-masc การแก้ปัญหาที่มีข้อความถูกผสมในชุดของปริมาณอัตราส่วน(10: 1, 5: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 5 และ1:10 ) และผสมมาวิเคราะห์โดยวิธี HPLC-MS / MS. ด้วยเทอร์เป็นตัวแทนของการประเมินมูลค่าที่มั่นคงกลยุทธ์ไอโซโทปรหัสสำหรับปริมาณญาติอธิบายไว้ในรูป 2. รูป 2A แสดงให้เห็นว่าหลัก MS / MS ไอออนส่วนของd0-masc และ d3-masc ติดป้ายอนุพันธ์เทอร์อยู่ที่ม. / z 208 และ m / z 211.2 ตามลำดับ ที่สามารถเห็นได้ในรูป 2B, สัญญาณ MRM ของ d0-masc และ d3-masc เทอร์ที่มีข้อความที่พบในหนึ่งHPLC-MS / MS ทำงานและไม่มีความแตกต่างเล็ก ๆ น้อย ๆ อื่น ๆ ยกเว้นความแตกต่างของเวลาระหว่างชะรูปแบบหนักและเบา มะเดื่อ. 2C เผยให้เห็นว่าอัตราส่วนความเข้มของสัญญาณ EIC ของแสง / คู่ไอออนหนักจะอยู่ที่ประมาณ0.49 (ตั้งแต่ 0.48-0.50 ค่าเฉลี่ย = 0.49) 1.02 (ตั้งแต่ 1.01-1.05 ค่าเฉลี่ย = 1.02) และ 2.00 (ตั้งแต่1.97-2.03, ค่าเฉลี่ย 2.00) สำหรับสัญญาซื้อขายล่วงหน้าปริญญาตรีเมื่อH / D = 0.5, H / D = 1 และ H / D = 2 กราฟมาตรฐานวางแผนโดยอัตราส่วนสัญญาณของแสง/ คู่ไอออนหนักเมื่อเทียบกับอัตราส่วนของปริมาณ(H / D = 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1) การจัดแสดงนิทรรศการเชิงเส้นที่ดีกับความลาดชันประมาณ1.0 (ดูรูปที่ 2 มิติ) ข้อมูลการประเมินค่าอื่น ๆBAs ที่แสดงอยู่ในวัสดุเสริมมะเดื่อ S3 และ S4 เหล่านี้พบว่าอนุพันธ์ไอโซโทปรหัสจะเพียงพอสำหรับปริมาณที่ถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.4；isotope-based quantification）。相对稳定的战略，通过isotope-coded quantificationHPLC—MS / MS的作品已被根据与reported超时改一点，2012（傣族等。另一方面，三个）。在固定浓度标准的BAs 0.025 0.05毫米）（毫米）和0.1是通过衍生化的同时，respectively d0-MASC，三aquilots。BAs（毫米）的标准是由d3-MASC 0.05）酯。d0-MASC labeled等体积的形式）和d3-MASC BAs光对重金属（labeled BAs和混合的混合物，是一个containing获得d0 - / d3-MASC labeled BAs 1:2院，在1:1比值，2:1，分析了respectively）的混合物。是通过HPLC / MS）。的信号强度来研究individually）对重金属和轻ratios /另一方面，在derivatives；d0-MASC和d3-MASC是应用到标签的标准BAs（毫米）后，respectively 0.05。最后，d0 derivatization d3-MASC labeled是mingled /解决方案。在一系列的结果，5:1 ratios（10:1，2:1，1:1 1:2 1:5，，，和分析了1:10）和混合物是通过HPLC - MS / MS。有条件的，TYR为代表以稳定isotope-coded战略，是在相对quantification describedFig凝集。2。Fig。2a的片段主要是离子的MS / MS分析d0-MASC和d3-MASC labeled TYR derivatives是在m / z 208和m / z 211.2，可以看到在respectively。作为Fig是2B，MRM signals。的d0-MASC和d3-MASC labeled TYR是发现在一个HPLC—MS / MS运行不同的是，除了没有其他小调之间的差异的时间和elution对重金属和轻。Fig 2C。显示信号强度比值的EIC是对重金属离子的光pairs /是一个广泛approximately 0.49（平均= 0.50，从0.48 0.49）从一个广泛1.02 1.05，1.01（平均= 1.02（中）和2从1.97），平均到2.03 2 BA的derivatives时0.5 h / D = 1，H / D = h / D = 2和校准曲线plotted）通过。的光信号的ratios对重金属离子的ratios pairs /体积的测量10,5,2,1 =（H / D），0.5，0.2 exhibits优良，与0.1 linearity对边坡approximated 1（见Fig 2D数据）为其他条件）。在BAs是shown S3和S4 Supplementary材料These无花果。这是一个结果的indicated isotope-coded derivatization adequate为准确quantification。