2.5. Preparation of human tissue sa

2.5. Preparation of human tissue samples
Human breast tissue samples (cancerous: n=9 and non-cancerous: n=1) were obtained from the archives of Government Hospitals at Tiruchirappalli and Thanjavur, Tamil Nadu state, India. Tissuewas sliced finely using a sterile blade and ground well. One gramof the tissue was homogenized and treated as mentioned in earlier sections for extraction, clean up and derivatization in the optimized conditions of 20 μL MSTFA, 30min reaction time at 70 °C.
3. Result and discussion
The extraction with n-hexane:acetone (1:1 v/v) solvent mixture and clean up using silica gel (60–120 mesh) were good (data not shown). Ethyl acetate was used for both column conditioning and elution.
3.1. Effect of MSTFA volume on derivatization
In order to know the influence of parameters on derivatization process, the effect of the changes in the volume of MSTFA and the derivatization reaction time were studied. Fig. 1 shows that derivatization of spiked parabens with 10–50 μL of MSTFA, in which 20 μL (at 30 min for 70 °C) gave better derivatization and good recovery (n=3), ranged between 92±0.7 and 101±6.3 ng mL−1 for all compounds. Low recovery (79±16–90±13 ng mL−1) was attained with 10 μL, but higher amount of MSTFA (i.e. 30, 40 and 50 μL) showed more than 100% recovery with wide deviations (110±3.9–148±13.4 ng mL−1). Therefore, 20 μL could be considered sufficient for complete derivatization of parabens (~100%). This is in
contrast to Basheer et al. [19] who reported that the amount of MSTFA did not have any impact on derivatization of estrogens in water samples. Canosa et al. [8] used 20 μL of MTBSTFA for 15 min at room temperature for on-fiber derivatization of parabens from surface and sewage water samples.
3.2. Effect of reaction time on derivatization
The reaction time is also crucial in derivatization, and so we investigated by spiking 100 ng mL−1 concentration of parabens and checked the extent of derivatization at 15, 30, 45, 60, 75, and 90 min with 20 μL MSTFA at 70 °C. The findings (Fig. 2) revealed that the lowest reaction time (15 min) gave less recovery (from 96±2.6 to 99.6±3.5 ng mL−1) than the higher reaction times (i.e. 30 to 90 min). However, at 30 and 45 min reaction times the recoveries were almost same at around 100% (102±8–106±6.7 ng mL−1 and 101±9.4–106±6 ng mL−1, respectively). However, higher reaction
times (60, 75 and 90 min) gave greater recoveries with greater deviations, (ranged between 107±11 and 136±48 ng mL−1). Since there was not much variation between 30 and 45 min, the lower reaction time of 30 min was chosen as an optimal reaction time for sufficient recovery. The reaction temperature was maintained at 70 °C, since MSTFA's boiling point is 70 °C and at this temperature it reacts with compounds to replace labile hydrogen with a –Si(CH3)3 group. Bowden et al. [15] stated that steriod derivatization beyond 60 min and above 70 °C do not provide any additional benefit in the RRFs (relative response factors) obtained. In addition, they reported that temperatures below 40 °C are not adequate for efficient derivatization with the reaction times tested in their study. Basheer et al. [19] reported complete derivatization of estrogens in water samples at a derivatization time of 30 min at 60 °C with 50 μL of
MSTFA. Fig. 3 shows the effect of derivatization on resolution (in terms of peak intensity and peak tailing) of paraben standards. From comparing the representative chromatograms of paraben standards in scan mode without (Fig. 3a) and with (Fig. 3b) MSTFA derivatization, it is obvious that prior to derivatization (Fig. 3a) the peak intensity was very low and moreover not sharp but tailing. However, after derivatization (Fig. 3b) the peaks were well resolved (i.e. sharp peaks with many fold greater intensity and without tailing).
3.3. Quality control (recovery and detection limit)
Recoveries of parabens were investigated in triplicate using noncancerous tissue sample spiked with known standards. The mean recoveries of MeP, EtP, PrP and BuP were 99.8±5.1, 96±4.4, 107±17 and 113±13%, respectively. Quantitative linearity was investigated by elucidating the calibration curves for the four parabens over the concentration range 50–300 ng mL−1. The line of best fit for the relationship between the peak intensity (area) and concentration of each analyte in the standard solution was determined by linear regression. The relationship is acceptably linear for all the four
analytes over the full range of concentrations. The calibration curves are shown in Fig. 4 and correlation coefficients are presented in Table 1, together with the method precision, quantification, and detection limits. The limits of detection and limits of quantification
Fig. 1. Effect of MSTFA volume in the derivatization efficiency of parabens. Fig. 2. Effect of reaction time in MSTFA derivatization efficiency of parabens.
Table 1
Summary of the GC–MS method showing correlation coefficient (R2), precision, LODs,
LOQs and recovery of tissue spiked parabens.
Analyte Mass ions R2a Precision
(% RSD; n=3)
LOD
ng g−1
LOQ
ng g−1
Recovery (%)
(n=3)
MP 209, 224, 135 0.989 5.1 2.02 6.75 99.8±5.1
EP 223, 193, 238 0.998 4.6 1.05 3.49 96±4.4
PP 193, 210, 195 0.998 15.6 1.71 5.68 107±17
BP 210, 195, 193 0.996 13 3.75 12.5 113±13
a Linear range 50–300 ng mL−1.
G. Shanmugam et al. / Microchemical Journal 96 (2010) 391–396 393

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การเตรียมตัวอย่างเนื้อเยื่อมนุษย์ตัวอย่างเนื้อเยื่อเต้านมมนุษย์ (มะเร็ง: n = 9 และไม่ใช่มะเร็ง: n = 1) ได้รับจากคลังข้อมูลของโรงพยาบาลรัฐบาลที่ Tiruchirappalli และธานจาวูร์ รัฐทมิฬนาดูล อินเดีย Tissuewas หั่นประณีตใช้ใบมีดที่ผ่านการฆ่าเชื้อและดินดี หนึ่ง gramof เนื้อเยื่อ homogenized เป็นกลุ่ม และถือว่าเป็นที่กล่าวถึงในส่วนก่อนหน้านี้สำหรับสกัด ล้างและ derivatization ในการเพิ่มประสิทธิภาพของ μL 20 MSTFA เวลาปฏิกิริยา 30 นาทีที่ 70 องศาเซลเซียส3. ผล และการสนทนาสกัด ด้วยเอ็น-ผสมตัวทำละลายเฮกเซน: อะซิโตน (1:1 v/v) และล้างโดยใช้ซิลิก้าเจล (60 – 120 ตาข่าย) ได้ดี (ข้อมูลไม่แสดง) ใช้เอทิล acetate สำหรับปรับคอลัมน์และ elution3.1. ผลของ MSTFA ปริมาตร derivatizationเพื่อทราบอิทธิพลของพารามิเตอร์ในกระบวนการ derivatization มีศึกษาผลของการเปลี่ยนแปลงในปริมาตรของ MSTFA และเวลาตอบสนอง derivatization Fig. 1 แสดงที่ derivatization parabens ถูกแทง ด้วย μL 10 – 50 ของ MSTFA ที่ μL 20 (ที่ 30 นาทีสำหรับ 70 ° C) ให้ derivatization ดีกว่าและขอคืนดี (n = 3), แสก ๆ ระหว่าง 92±0.7 และ 101±6.3 mL−1 ng สำหรับสารทั้งหมด กู้คืนต่ำ (79±16 – 90±13 ng mL−1) ได้บรรลุ 10 μL แต่จำนวนสูงกว่า MSTFA (เช่น 30, 40 และ 50 μL) พบมากกว่ากู้ 100% มีความแตกต่างหลากหลาย (110±3.9 – 148±13.4 ng mL−1) ดังนั้น 20 μL อาจถือว่าเพียงพอสำหรับ derivatization สมบูรณ์ของ parabens (~ 100%) นี้เป็นความคมชัดจะบะชีรร้อยเอ็ด al. [19] ที่รายงานว่า จำนวน MSTFA ไม่มีผลกระทบใด ๆ บน derivatization ของ estrogens ในตัวอย่างน้ำ Canosa et al. [8] ใช้ μL 20 ของ MTBSTFA ใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องสำหรับ derivatization บนเส้นใยของ parabens จากตัวอย่างน้ำผิวและน้ำเสีย3.2. ผลของเวลาปฏิกิริยา derivatizationเวลาปฏิกิริยาก็สำคัญใน derivatization และเพื่อให้ เราตรวจสอบโดย spiking 100 ng mL−1 สมาธิของ parabens และตรวจสอบขอบเขตของ derivatization ที่ 15, 30, 45, 60, 75 และ 90 นาทีกับ 20 μL MSTFA ที่ 70 องศาเซลเซียส ผลการศึกษา (Fig. 2) เปิดเผยว่า ต่ำปฏิกิริยาเวลา (15 นาที) ให้กู้น้อยลง (จาก 96±2.6 เพื่อ 99.6±3.5 ng mL−1) กว่าเวลาปฏิกิริยาสูง (เช่น 30-90 นาที) อย่างไรก็ตาม 30 และ 45 นาทีปฏิกิริยาเวลา recoveries เดียวเกือบประมาณ 100% (102±8 – 106±6.7 ng mL−1 และ 101±9.4-106±6 ng mL−1 ตามลำดับ) อย่างไรก็ตาม ปฏิกิริยาสูงขึ้นเวลา (60, 75 และ 90 นาที) ให้ recoveries มากกว่า มีความแตกต่างมากขึ้น, (อยู่ในช่วงระหว่าง 107±11 และ 136±48 mL−1 ng) เนื่องจากไม่มีการเปลี่ยนแปลงมากระหว่าง 30 และ 45 นาที 30 นาทีเวลาปฏิกิริยาต่ำกว่าถูกเลือกเป็นเวลาปฏิกิริยาเหมาะสมที่สุดสำหรับการกู้คืนเพียงพอ อุณหภูมิปฏิกิริยามีรักษาที่ 70 ° C เนื่องจากจุดเดือดของ MSTFA เป็น 70 ° C และอุณหภูมินี้ จะทำปฏิกิริยากับสารประกอบไฮโดรเจน labile แทน – ศรี (CH3) กลุ่ม 3 Bowden et al. [15] กล่าวว่า derivatization steriod เกิน 60 นาที และเหนือ 70 ° C ไม่มีสวัสดิการใด ๆ เพิ่มเติมใน RRFs (ปัจจัยตอบสนองญาติ) ที่ได้รับ นอกจากนี้ พวกเขารายงานว่า อุณหภูมิต่ำกว่า 40 ° C มีไม่เพียงพอสำหรับ derivatization มีประสิทธิภาพเวลาปฏิกิริยาทดสอบในการศึกษา Derivatization สมบูรณ์ของ estrogens ในตัวอย่างน้ำที่ใช้ derivatization เวลา 30 นาทีที่ 60 ° C กับ μL 50 ของรายงานของ al. et บะชีร [19]MSTFA Fig. 3 แสดงผลของ derivatization บนความละเอียด (ในความเข้มสูงสุดและสูงสุด tailing) มาตรฐาน paraben จากการเปรียบเทียบ chromatograms พนักงานมาตรฐาน paraben ในโหมดการสแกนโดย (Fig. 3a) และ derivatization (Fig. 3b) MSTFA จึงเป็นว่า ก่อน derivatization (Fig. 3a) ความเข้มสูงไม่มากต่ำ และนอกจากนี้ tailing แต่คมชัด อย่างไรก็ตาม หลัง derivatization (Fig. 3b) แห่งถูกแก้ไขด้วย (เช่นคมยอด มีหลายพับความเข้มมากขึ้น และไม่ มี tailing)3.3 การควบคุมคุณภาพ (วงเงินกู้คืนและตรวจพบ)Recoveries parabens ถูกสอบสวนใน triplicate โดยใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อ noncancerous spiked รู้จักมาตรฐาน Recoveries หมายถึง MeP, EtP, PrP และ BuP ได้ 99.8±5.1, 96±4.4, 107±17 และ 113±13% ตามลำดับ แบบดอกไม้เชิงปริมาณถูกตรวจสอบ โดย elucidating เทียบเส้นโค้งสำหรับ parabens สี่ผ่านสมาธิช่วง 50 – 300 ng mL−1 สายเหมาะสมที่สุดสำหรับความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มสูง (พื้นที่) และความเข้มข้นของ analyte แต่ละในการแก้ปัญหามาตรฐานที่ถูกกำหนด โดยการถดถอยเชิงเส้น ความสัมพันธ์เป็นเชิง acceptably สำหรับ 4 ทั้งหมดanalytes ที่ช่วงความเข้มข้นเต็ม แสดงเส้นโค้งเทียบ Fig. 4 และสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์จะแสดงในตารางที่ 1 กับความแม่นยำของวิธีการ นับ และตรวจสอบข้อจำกัด ขีดจำกัดของการตรวจสอบและข้อจำกัดของการนับFig. 1 ผลของ MSTFA ปริมาตรในประสิทธิภาพ derivatization parabens Fig. 2 ผลของเวลาปฏิกิริยา MSTFA derivatization ประสิทธิภาพของ parabensตารางที่ 1สรุปวิธี GC – MS แสดงสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2), ความแม่นยำ LODsLOQs และการฟื้นตัวของเนื้อเยื่อ spiked parabensAnalyte มวลประจุความแม่นยำ R2a(% RSD; n = 3)ลอดng g−1LOQng g−1กู้ (%)(n = 3)MP 209, 224, 135 0.989 5.1 2.02 6.75 99.8±5.1EP 223, 193, 238 0.998 4.6 1.05 3.49 96±4.4PP 193, 210, 195 0.998 15.6 1.71 5.68 107±17BP 210, 195, 193 0.996 13 3.75 12.5 113±13เชิงเส้นเป็นช่วง 50 – 300 ng mL−1Al. และ Shanmugam กรัม / Microchemical สมุด 96 (2010) 391-396 393

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การเตรียมความพร้อมของกลุ่มตัวอย่างเนื้อเยื่อของมนุษย์
ตัวอย่างเนื้อเยื่อเต้านมมนุษย์ (มะเร็ง: n = 9 และไม่ใช่มะเร็ง: n = 1) ที่ได้รับจากจดหมายเหตุของโรงพยาบาลของรัฐที่ Tiruchirappalli และ Thanjavur รัฐทมิฬนาฑูอินเดีย Tissuewas หั่นละเอียดโดยใช้ใบผ่านการฆ่าเชื้อและพื้นดินที่ดี หนึ่ง gramof เนื้อเยื่อก็หดหายและถือว่าเป็นที่กล่าวถึงในส่วนก่อนหน้านี้สำหรับการสกัดทำความสะอาดและอนุพันธ์ในสภาพที่ดีที่สุดจาก 20 ไมโครลิตร MSTFA, 30 นาทีเวลาการเกิดปฏิกิริยาที่ 70 ° C.
3 ผลการอภิปรายและ
การสกัดด้วยเฮกเซน: อะซิโตน (1: 1 v / v) ส่วนผสมตัวทำละลายและทำความสะอาดโดยใช้ซิลิกาเจล (60-120 ตาข่าย) ได้ดี (ไม่ได้แสดงข้อมูล) เอทิลอะซิเตถูกนำมาใช้สำหรับทั้งเครื่องและคอลัมน์ชะ.
3.1 ผลกระทบของปริมาณ MSTFA บนอนุพันธ์
เพื่อที่จะทราบถึงอิทธิพลของพารามิเตอร์ในกระบวนการอนุพันธ์, ผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงในปริมาณของ MSTFA และเวลาการเกิดปฏิกิริยาอนุพันธ์มีการศึกษา มะเดื่อ 1 แสดงให้เห็นว่าอนุพันธ์ของพาราเบนถูกแทงด้วย 10-50 ไมโครลิตรของ MSTFA ซึ่งในวันที่ 20 ไมโครลิตร (ณ วันที่ 30 นาที 70 ° C) อนุพันธ์ให้ดีขึ้นและการกู้คืนที่ดี (n = 3) อยู่ระหว่าง 92 ± 0.7 และ 101 ± 6.3 ศึกษา ML-1 สำหรับสารประกอบทั้งหมด การกู้คืนต่ำ (79 ± 16-90 ± 13 ศึกษา ML-1) บรรลุกับ 10 ไมโครลิตร แต่ปริมาณที่สูงขึ้นของ MSTFA (เช่น 30, 40 และ 50 ไมโครลิตร) แสดงให้เห็นมากกว่าการกู้คืน 100% ที่มีการเบี่ยงเบนกว้าง (110 ± 3.9-148 ± 13.4 ศึกษา ML-1) ดังนั้น 20 ไมโครลิตรอาจจะถือว่าเพียงพอสำหรับอนุพันธ์ที่สมบูรณ์ของพาราเบน (~ 100%) นี้อยู่ใน
ทางตรงกันข้ามกับแบชเชียร์และคณะ [19] ที่รายงานว่าปริมาณของ MSTFA ไม่ได้มีผลกระทบใด ๆ เกี่ยวกับอนุพันธ์ของ estrogens ในตัวอย่างน้ำ Canosa และคณะ [8] ใช้ 20 ไมโครลิตรของ MTBSTFA นาน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องอนุพันธ์บนเส้นใยของพาราเบนจากพื้นผิวและตัวอย่างน้ำน้ำเสีย.
3.2 ผลของเวลาการเกิดปฏิกิริยาในอนุพันธ์
เวลาการเกิดปฏิกิริยายังเป็นสิ่งสำคัญในการสังเคราะห์อนุพันธ์และเพื่อให้เราตรวจสอบโดย 100 องศาศึกษา ML-1 ความเข้มข้นของพาราเบนและการตรวจสอบขอบเขตของอนุพันธ์ที่ 15, 30, 45, 60, 75, และ 90 นาทีด้วย 20 ไมโครลิตร MSTFA ที่ 70 ° C ผลการวิจัย (รูปที่ 2). เปิดเผยว่าเวลาตอบสนองต่ำสุด (15 นาที) ให้การกู้คืนน้อยลง (จาก 96 ± 2.6-99.6 ± 3.5 ศึกษา mL-1) กว่าครั้งสูงปฏิกิริยา (เช่น 30-90 นาที) อย่างไรก็ตามวันที่ 30 และ 45 นาทีปฏิกิริยาครั้งกลับคืนเกือบเดียวกันที่ประมาณ 100% (102 ± 8-106 ± 6.7 ศึกษา mL-1 และ 101 ± 9.4-106 ± 6 ศึกษา mL-1 ตามลำดับ) อย่างไรก็ตามการเกิดปฏิกิริยาสูงกว่า
ครั้ง (60, 75 และ 90 นาที) ให้กลับคืนมากขึ้นด้วยการเบี่ยงเบนมากขึ้น (อยู่ระหว่าง 107 ± 11 และ 136 ± 48 ศึกษา ML-1) เนื่องจากไม่มีการเปลี่ยนแปลงมากระหว่าง 30 และ 45 นาที, เวลาการเกิดปฏิกิริยาล่างของ 30 นาทีได้รับเลือกเป็นปฏิกิริยาเวลาที่ดีที่สุดสำหรับการกู้คืนเพียงพอ อุณหภูมิของปฏิกิริยาถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียสตั้งแต่จุดเดือด MSTFA คือ 70 องศาเซลเซียสและที่อุณหภูมินี้จะทำปฏิกิริยากับสารที่จะมาแทนที่ labile ไฮโดรเจนกับ -SI (CH3) 3 กลุ่ม โบว์และคณะ [15] ระบุว่าอนุพันธ์ steriod เกิน 60 นาทีและสูงกว่า 70 องศาเซลเซียสไม่ได้ให้ผลประโยชน์ใด ๆ เพิ่มเติมใน RRFs (ปัจจัยการตอบสนองญาติ) ที่ได้รับ นอกจากนี้พวกเขารายงานว่าอุณหภูมิต่ำกว่า 40 องศาเซลเซียสจะไม่เพียงพอสำหรับอนุพันธ์ที่มีประสิทธิภาพกับเวลาปฏิกิริยาการทดสอบในการศึกษาของพวกเขา แบชเชียร์และคณะ [19] รายงานอนุพันธ์ที่สมบูรณ์ของ estrogens ในตัวอย่างน้ำในเวลาอนุพันธ์ของ 30 นาทีที่ 60 ° C 50 ไมโครลิตรของ
MSTFA มะเดื่อ 3 แสดงให้เห็นถึงผลกระทบของอนุพันธ์กับความละเอียด (ในแง่ของความเข้มสูงสุดและ tailing ยอด) ของมาตรฐานพาราเบน จากการเปรียบเทียบ chromatograms ตัวแทนของพาราเบนมาตรฐานในโหมดการสแกนโดยไม่ต้อง (รูป. 3a) และ (รูป. 3b) MSTFA อนุพันธ์จึงเป็นที่ชัดเจนว่าก่อนที่จะอนุพันธ์ (รูป. 3a) จุดสูงสุดอยู่ในระดับต่ำมากและยิ่งกว่านั้นไม่คม แต่ tailing อย่างไรก็ตามหลังจากอนุพันธ์ (รูป. 3b) ยอดเขาที่ได้รับการแก้ไขอย่างดี (เช่นยอดเขาที่คมชัดและมีหลายพับความรุนแรงมากขึ้นและไม่มี tailing).
3.3 การควบคุมคุณภาพ (กู้คืนและการตรวจสอบวงเงิน)
กลับคืนพาราเบนถูกตรวจสอบในเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อมะเร็งที่ได้ถูกแทงด้วยมาตรฐานที่เป็นที่รู้จักกัน กลับคืนเฉลี่ยของ MEP, ETP, PrP และ BUP เป็น 99.8 ± 5.1, 96 ± 4.4, 107 ± 17 และ 113 ± 13% ตามลำดับ เส้นตรงเชิงปริมาณได้รับการตรวจสอบโดยแจ่มชัดเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับสี่พาราเบนในช่วงความเข้มข้น 50-300 ศึกษา ML-1 สายของแบบที่ดีที่สุดสำหรับความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มสูงสุด (พื้นที่) และความเข้มข้นของแต่ละวิเคราะห์ในสารละลายมาตรฐานถูกกำหนดโดยการถดถอยเชิงเส้น ความสัมพันธ์เป็นเชิงเส้นที่ยอมรับสำหรับทุกสี่
วิเคราะห์ในช่วงที่เต็มไปด้วยความเข้มข้น เส้นโค้งการสอบเทียบจะแสดงในรูป 4 และค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ถูกแสดงไว้ในตารางที่ 1 ร่วมกับวิธีการที่มีความแม่นยำ, ปริมาณและข้อ จำกัด การตรวจสอบ ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบและข้อ จำกัด ของปริมาณ
รูป 1. ผลกระทบของปริมาณ MSTFA ในประสิทธิภาพอนุพันธ์ของพาราเบน มะเดื่อ . 2. ผลของเวลาการเกิดปฏิกิริยาในประสิทธิภาพ MSTFA อนุพันธ์ของพาราเบน
ตารางที่ 1
สรุปวิธี GC-MS แสดงค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2), ความแม่นยำ LODs,
LOQs และการฟื้นตัวของเนื้อเยื่อถูกแทง parabens.
Analyte ไอออนมวล R2a แม่นยำ
(% RSD; n = 3)
LOD
ศึกษากรัม-1
LOQ
ศึกษากรัม-1
คืน (%)
(n = 3)
MP 209, 224, 135 .989 5.1 2.02 6.75 99.8 ± 5.1
EP 223, 193, 238 .998 4.6 1.05 3.49 96 ± 4.4
พีพี 193, 210, 195 .998 15.6 1.71 5.68 107 ± 17
BP 210, 195, 193 .996 13 3.75 12.5 113 ± 13
ช่วงเชิงเส้น 50-300 ศึกษา mL-1.
G. Shanmugam และคณะ / Microchemical วารสาร 96 (2010) 391-396 393

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การเตรียมเนื้อเยื่อมนุษย์ตัวอย่าง
เต้านมเนื้อเยื่อมนุษย์ตัวอย่าง ( n = 9 และไม่ใช่มะเร็ง : มะเร็ง : n = 1 ) ที่ได้รับจากคลังของโรงพยาบาลของรัฐใน Tiruchirappalli Thanjavur ทมิฬนาฑูและ , รัฐ , อินเดีย tissuewas หั่นละเอียดโดยใช้ใบมีดฆ่าเชื้อและดินดี หนึ่ง gramof เนื้อเยื่อที่เป็นโฮโม และถือว่าเป็นที่กล่าวถึงก่อนหน้านี้ส่วนการสกัดทำความสะอาดและปรับสภาพกับใน mstfa L 20 μ 30 นาที , เวลาปฏิกิริยาที่ 70 องศา C .
3 ผลและการอภิปราย
บีบสกัดด้วยอะซีโตน ( 1 : 1 v / v ) และตัวทำละลายผสมที่สะอาดขึ้นโดยใช้ซิลิกาเจล 60 - 120 ตาข่าย ) ดี ( ข้อมูลไม่แสดง ) เอทิลอะซิเตท คือใช้ทั้งปรับอากาศและคอลัมน์ ( .
1 . ผลของปริมาณ mstfa บนกับ
เพื่อที่จะได้รู้ อิทธิพลของพารามิเตอร์ในกระบวนการกับ ผลของการเปลี่ยนแปลงปริมาณของ mstfa และกับปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน รูปที่ 1 แสดงให้เห็นกับของถูกแทง parabens 10 – 50 μ l mstfa ซึ่งใน 20 μ L ( ที่ 30 นาที 70 ° C ) ให้กับดีและดีกู้คืน ( n = 3 ) อยู่ระหว่าง 92 ± 0.7 และ 101 ± 63 − 1 ng ml สำหรับสารประกอบ การกู้คืนต่ำ ( 79 ± 16 – 90 ± 13 ของมล − 1 ) บรรลุ 10 μ L แต่ปริมาณ mstfa ( เช่น 30 , 40 และ 50 μ L ) มีมากกว่า 100% กู้คืนกับส่วนกว้าง ( 110 ± 3.9 ( 148 ± 13.4 ของมล − 1 ) ดังนั้น , 20 μผมอาจจะถือว่าเพียงพอกับสมบูรณ์ของ parabens ( ~ 100 % ) นี่คือในความคมชัด
basheer et al .[ 19 ] ที่รายงานว่าปริมาณ mstfa ไม่ได้มีผลกระทบใด ๆ กับกับของเอสโตรเจนในตัวอย่างน้ำ canosa et al . [ 8 ] μใช้ 20 ลิตร mtbstfa 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องกับเส้นใยของ parabens และตัวอย่างจากพื้นผิวน้ำสิ่งปฏิกูล .
2 . ผลของเวลาปฏิกิริยากับ
เวลาปฏิกิริยากับยังเป็นสําคัญใน ,และเพื่อให้เราตรวจสอบด้วยแอลกอฮอล์ 100 มิลลิลิตร− 1 ของความเข้มข้นของ parabens และการตรวจสอบขอบเขตของกับที่เวลา 15 , 30 , 45 , 60 , 75 และ 90 นาที mstfa L 20 μที่ 70 องศา ผล ( รูปที่ 2 ) พบว่าเวลาตอบสนองต่ำสุด ( 15 นาที ) ให้น้อยลง ( จากการกู้คืน 96 ± 2.6 เพื่อติ± 3.5 ของมล − 1 ) กว่าครั้งปฏิกิริยาที่สูงขึ้น ( เช่น 30 ถึง 90 นาที ) อย่างไรก็ตาม30 และ 45 นาที ปฏิกิริยาครั้งกลับคืนเป็นเกือบเดียวกันในรอบ 100 % ( 102 ± 8 – 106 ± 6.7 ของมล − 1 และ 101 ± 9.4 – 106 ± 6 ของ− 1 มิลลิลิตร ตามลำดับ ) อย่างไรก็ตาม ที่สูงปฏิกิริยา
ครั้ง ( 60 , 75 และ 90 นาที ) ให้มากขึ้นกับค่าต่ำสุดสูงกว่า ( อยู่ระหว่าง 107 ± 11 136 ± 48 ของมล − 1 ) เนื่องจากไม่มีการเปลี่ยนแปลงมากระหว่าง 30 และ 45 นาทีลดเวลาปฏิกิริยาของ 30 นาที ได้รับเลือกเป็นเวลาที่เหมาะสมเพียงพอในการกู้คืน อุณหภูมิไว้ที่ 70 องศา C ตั้งแต่ mstfa เป็น 70 ° C และจุดเดือดที่อุณหภูมินี้มันทำปฏิกิริยากับสารประกอบไฮโดรเจนแทนที่ด้วย ) ศรี ( CH3 ) 3 กลุ่ม โบว์ et al .[ 15 ] ระบุว่า steriod กับเกิน 60 นาทีขึ้นไป 70 ° C ไม่ได้ให้ประโยชน์ใด ๆ เพิ่มเติมใน rrfs ( ปัจจัยตอบสนองที่ญาติได้รับ นอกจากนี้ ยังได้รายงานว่า อุณหภูมิต่ำกว่า 40 องศา C ไม่เพียงพอสำหรับใช้กับที่มีประสิทธิภาพกับปฏิกิริยาเวลาทดสอบในการศึกษาของพวกเขา basheer et al .[ 19 ] รายงานกับสมบูรณ์ของเอสโตรเจนในตัวอย่างน้ำที่ใช้กับเวลา 30 นาทีที่ 60 ° C 50 μ l
mstfa . รูปที่ 3 แสดงให้เห็นถึงผลกระทบของกับในความละเอียด ( ในแง่ของความเข้มสูงสุดตามมาตรฐานสูงสุดของ paraben . จากการเปรียบเทียบกลิ่นของตัวแทนมาตรฐาน Paraben ในโหมดการสแกนโดย ( รูปที่ 3A ) และด้วย ( รูปที่ 3B ) กับ mstfa ,มันชัดเจนว่า ก่อนการใช้กับ ( รูปที่ 3A ) ความเข้มสูงสุดคือต่ำมากนอกจากนี้ยังไม่คม แต่ติดตาม . อย่างไรก็ตาม หลังจากซัล ( รูปที่ 3B ) ยอดได้รับการแก้ไข ( เช่นคมยอดกับหลายพับมากขึ้นความรุนแรงและไม่มีตาม )
3 . การควบคุมคุณภาพ ( การกู้คืนและจำกัดการค้นหา )
เมื่อพบว่าทั้งสามใบ noncancerous parabens ใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อจากมาตรฐานที่รู้จักกัน ค่าเฉลี่ยต่ำสุดของ MEP , ETP , ช่วยให้± 99.8% และมี 5.1 , 96 ± 4.4 , 107 ± 113 ± 17 และ 13 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ ถูกตรวจสอบโดยการศึกษาเชิงเส้นตรงเส้นโค้งสอบเทียบสำหรับสี่ parabens กว่าสมาธิช่วง 50 – 300 ng ml − 1เส้นพอดีกับที่ดีที่สุดสำหรับความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มสูงสุด ( พื้นที่ ) และความเข้มข้นของแต่ละครูในการแก้ปัญหามาตรฐานถูกกำหนดโดยการถดถอยเชิงเส้น ความสัมพันธ์เชิงเส้นสำหรับรับได้ทั้ง 4
สารผ่านช่วงเต็มของความเข้มข้น เส้นโค้งสอบเทียบแสดงในรูปที่ 4 และสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ที่แสดงในตารางที่ 1ด้วยกัน ด้วยวิธีการ แม่นยำ ปริมาณและขอบเขตการตรวจสอบ ขอบเขตของการตรวจสอบและจำกัดปริมาณ
รูปที่ 1 ผลของปริมาณ mstfa ในกับประสิทธิภาพของ parabens . รูปที่ 2 ผลของเวลาปฏิกิริยาใน mstfa กับประสิทธิภาพของ parabens .

สรุปตารางที่ 1 ของ GC ( MS ) แสดงสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ( R )
, ล็อดส์ความเที่ยงตรงloqs และฟื้นฟูเนื้อเยื่อ spiked parabens .
ครูมวลไอออน r2a ความแม่นยำ
( % RSD ; n = 3 )

ng G − 1 โลด

ng G − 1
loq การกู้คืน ( % )
( n = 3 )
MP 209 , 224 , 135 0.989 5.1 2.02 6.75 99.8% ± 5.1
สอี 223 , 193 , 238 0.998 4.6 1.05 3.49 96 ± 4.4
PP 193 , 210 , 195 0.998 15.6 1.71 5.68 107 ± 17
BP 210 , 195 , 193 โดย 13 3.75 12.5 113 ± 13
ช่วงเชิงเส้น 50 – 300 ng ml − 1 .
G Shanmugam et al .