Tomato plants were treated with EAW

Tomato plants were treated with EAWP for 7 days and inoculated with B. cinerea. Quantitative RT-PCR analysis was performed at 1, 3,and 6 h post-inoculation (hpi). Leaves were frozen in liquid nitrogenandstoreduntiluse. TotalRNAwaspreparedwithSepasol-RNAI Super G (Nacalai Tesque, Kyoto, Japan). The total RNA concentration was
determined using a Biospec-nano (Shimadzu, Kyoto, Japan). Samples containing 1 mg of RNA were used for the RT, using the ReverTra Ace qPCR RTMaster Mix with gDNA Remover (Toyobo, Osaka, Japan), according to themanufacturer's instructions, in a final volume of 20 mL. For the quantitative real-time PCR reactions, 1 mL of the 1:1 diluted
cDNA was amplified in a 20-mL reaction in an optical 96-well plate,with three technical replicates for each sample, using THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix (Toyobo, Osaka, Japan). The gene-specific primers designed to amplify 70e150-bp fragments from each gene were:
glutathione peroxidase (GPx, Y14762), thioredoxinperoxidase 1 (TPx1,
AY281152), thioredoxin (Trx, AF261142), nitrate reductase (NR,
HQ616893), nitric oxide synthase 1 (NOS1, DQ539436), chitinase 3
(CHI3, Z15141), chitinase 9 (CHI9, Z15140), b-1,3-glucanase A (GLUA,
M80604), b-1,3-glucanase B (GLUB,M80608), and the reference gene
Actin (FJ532351). The following sequences were tested

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พืชมะเขือเทศได้รับ 7 วัน EAWP และ inoculated กับ cinerea เกิด เชิงปริมาณวิเคราะห์ RT-PCR ที่ดำเนินการที่ 1, 3 และ 6 h หลัง inoculation (hpi) ใบไม้ถูกแช่แข็งในของเหลว nitrogenandstoreduntiluse TotalRNAwaspreparedwithSepasol-RNAI ซูเปอร์กรัม (Nacalai Tesque เกียวโต ญี่ปุ่น) มีความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอทั้งหมดกำหนดโดยใช้การ Biospec-นาโน (Shimadzu เกียวโต ญี่ปุ่น) ตัวอย่าง 1 มิลลิกรัมของอาร์เอ็นเอที่ประกอบด้วยใช้สำหรับอาร์ที ใช้ qPCR ReverTra Ace RTMaster ผสมกับ gDNA Remover (Toyobo โอซาก้า ญี่ปุ่น), ตามคำแนะนำของ themanufacturer ในปริมาตรสุดท้ายของ 20 mL สำหรับที่เชิงปริมาณแบบ real-time PCR ปฏิกิริยา mL 1 1:1 ผสมcDNA ถูกขยายในปฏิกิริยา 20 มล.ในจานดี 96 การแสง มีสามเทคนิคเหมือนกับในตัวอย่างแต่ละ ใช้ SYBR ธันเดอร์เบิร์ด qPCR ผสม (Toyobo โอซาก้า ญี่ปุ่น) ไพรเมอร์ของยีนเฉพาะที่ออกแบบขยายชิ้นส่วน 70e150 bp จากแต่ละยีนมี:กลูตาไธโอน peroxidase (GPx, Y14762), thioredoxinperoxidase (TPx1, 1AY281152), thioredoxin (Trx, AF261142), ไนเตรต reductase (NRHQ616893), ไนตริกออกไซด์ synthase 1 (NOS1, DQ539436), chitinase 3(CHI3, Z15141), chitinase 9 (CHI9, Z15140), บี-1,3-คัด (GLUAM80604), B b-1,3-คัด (GLUB, M80608), และยีนอ้างอิงแอกติน (FJ532351) ทดสอบลำดับต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มะเขือเทศได้รับการรักษาด้วย EAWP เป็นเวลา 7 วันและเชื้อด้วยซีเนเรียบี ปริมาณการวิเคราะห์ RT-PCR ได้ดำเนินการวันที่ 1, 3 และ 6 ชั่วโมงหลังการฉีดวัคซีน (HPI) ใบถูกแช่แข็งใน nitrogenandstoreduntiluse ของเหลว TotalRNAwaspreparedwithSepasol-RNAI ซุปเปอร์จี (Nacalai Tesque, เกียวโต, ญี่ปุ่น) ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูก
กำหนดโดยใช้ Biospec นาโน (Shimadzu, เกียวโต, ญี่ปุ่น) ตัวอย่างที่มี 1 มิลลิกรัมของอาร์เอ็นเอที่ใช้ใน RT ใช้ ReverTra Ace qPCR RTMaster ผสม gDNA Remover (Toyobo, โอซาก้า, ญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของ themanufacturer ในเล่มสุดท้ายของ 20 มิลลิลิตร สำหรับแบบ real-time PCR ปฏิกิริยาเชิงปริมาณ 1 มิลลิลิตร 1: 1 เจือจาง
cDNA ถูกขยายในปฏิกิริยา 20 มิลลิลิตรในแสงแผ่น 96 ดีกับสามซ้ำทางเทคนิคสำหรับแต่ละตัวอย่างโดยใช้ THUNDERBIRD SYBR qPCR ผสม (Toyobo, โอซาก้า, ญี่ปุ่น) ไพรเมอร์ยีนเฉพาะออกแบบมาเพื่อขยายเศษ 70e150-bp จากแต่ละยีนคือ
กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเด (GPx, Y14762) thioredoxinperoxidase 1 (TPx1,
AY281152) thioredoxin (รคเตอร์, AF261142) reductase ไนเตรต (NR,
HQ616893) ไนตริกออกไซด์ เทสที่ 1 (NOS1, DQ539436), ไคติเนส 3
(CHI3, Z15141), ไคติเนส 9 (CHI9, Z15140), B-1,3-glucanase (กลัว,
M80604), B-1,3-glucanase B (Glub, M80608 ) และยีนอ้างอิง
โปรตีน (FJ532351) ลำดับต่อไปนี้ได้รับการทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พืชมะเขือเทศได้รับการรักษาด้วย eawp เป็นเวลา 7 วัน และที่ใส่บีขาว . การวิเคราะห์เชิงปริมาณนี้กระทำที่ 1 , 3 และการโพสต์ 6 H ( HPI ) ใบที่ถูกแช่แข็งใน nitrogenandstoreduntiluse ของเหลว หา totalrnawaspreparedwithsepasol Super G ( nacalai tesque , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) ปริมาณอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกกำหนดด้วย
biospec นาโน ( Shimadzu , เกียวโต , ญี่ปุ่น )ตัวอย่างที่ 1 มิลลิกรัม ซึ่งใช้สำหรับ RT โดยใช้ revertra เอซ qpcr rtmaster ผสมกับ gdna remover ( toyobo , โอซาก้า , ญี่ปุ่น ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในสุดท้ายปริมาณ 20 มล. สำหรับปริมาณเรียลไทม์พีซีอาร์ปฏิกิริยา 1 มิลลิลิตรของ cDNA ถูกเจือจาง 1 : 1
ได้มา 20 มล. ปฏิกิริยาในแสง 96 ดีจาน 3 ซ้ำเทคนิคสำหรับแต่ละตัวอย่างใช้ Thunderbird SYBR qpcr ผสม ( toyobo , โอซาก้า , ญี่ปุ่น ยีนที่เฉพาะเจาะจงโดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบเพื่อขยาย 70e150 BP เศษจากแต่ละยีนกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส ( GPX :
, , y14762 ) thioredoxinperoxidase 1 ( tpx1
ay281152 , thioredoxin ( โทรศัพท์ ) , , , af261142 ) ไนเตรตรีดักเทส ( NR ,
hq616893 ) , ไนตริกออกไซด์ซินเทส ( nos1 dq539436 1 , 3
( chi3 ) , ไคติเนส z15141 ) , 9 ( chi9 เนส , B1 z15140 )เนส ( กลัว
m80604 , ) , b-1,3-glucanase B ( โบ๊กกุม m80608 ) และยีนอ้างอิง
actin ( fj532351 ) ลำดับต่อไปนี้ ทดสอบ