For each time point/treatment,four

For each time point/treatment,four biological replicates, consisting of four individuals each, were
analysed. All reactions were prepared as triplicates and a no-template
control was included for each primer pair. The expression of
three putative reference genes was examined and two with stable
expression in the investigated samples were selected for normalization:
actin and cyclophilin. The PCR program consisted of: 95 C
for 5 min, 45 cycles of 95 C for 10 s, 58 C for 20 s and 72 C for
30 s. A melting curve was performed starting at 95 C for 5 s,
65 C for 5 min and continuously increasing by 0, 11 C/s until the
temperature reached 97 C. To calculate the relative transcript ratio
between a sample and a control, a formula by Pfaffl was used: [(Etarget)DCt,target(controlsample)]  [(Eref)DCt,ref(controlsample)], where E is the primer efficiency in the reaction, target is the gene of
interest, ref is the reference gene and DCt is the difference in cycle
number between control and sample when they pass a certain fluorescence
threshold. A standard curve was made for each primer pair
to calculate the efficiency of the primer in the reaction. All primer
sequences are shown in Table S2.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับแต่ละการจุด/รักษา สี่ชีวภาพสามารถจำลอง ประกอบด้วยสี่บุคคลละ ถูกanalysed ปฏิกิริยาทั้งหมดเตรียมไว้เป็น triplicates และแบบไม่มีควบคุมให้แต่ละคู่รองพื้นได้ ค่าของมีการตรวจสอบยีน putative อ้างอิงสาม และสองมีมั่นคงนิพจน์ในตัวอย่าง investigated ถูกเลือกสำหรับการฟื้นฟู:แอกตินและ cyclophilin โปรแกรม PCR ประกอบด้วย: 95 Cสำหรับ 5 นาที 95 C รอบ 45 10 s, 58 C s และ C 72 สำหรับ 2030 s ทำเส้นโค้งละลายเริ่มต้นที่ 95 C สำหรับ 5 sC 65 5 นาทีและเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่อง โดย 0, C 11 s จนถึงการอุณหภูมิถึงค. 97 การคำนวณอัตราส่วนของเสียงบรรยายญาติระหว่างตัวอย่างและตัวควบคุม ใช้สูตร โดย Pfaffl: [DCt (Etarget) เป้าหมาย (ตัวอย่างควบคุม)] [(Eref) DCt อ้างอิง (ตัวอย่างควบคุม)], E เป็น ประสิทธิภาพรองพื้นในปฏิกิริยา เป้าหมายคือ ยีนของดอกเบี้ย ยีนอ้างอิงเป็นการอ้างอิง และ DCt เป็นความแตกต่างของวงจรจำนวนระหว่างตัวควบคุมและตัวอย่างเมื่อพวกเขาผ่าน fluorescence บางขีดจำกัดการ ทำเส้นโค้งมาตรฐานสำหรับแต่ละคู่รองพื้นการคำนวณประสิทธิภาพของรองพื้นในปฏิกิริยา สีรองพื้นทั้งหมดลำดับที่แสดงในตาราง S2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับทุกครั้งที่จุด / รักษาสี่ซ้ำชีวภาพประกอบด้วยสี่แต่ละบุคคลได้รับการ
วิเคราะห์ ปฏิกิริยาทั้งหมดถูกจัดทำขึ้นเป็น triplicates และไม่มีแม่แบบ
การควบคุมรวมสำหรับแต่ละคู่ไพรเมอร์ การแสดงออกของ
ยีนที่สามอ้างอิงสมมุติถูกตรวจสอบและสองที่มีเสถียรภาพ
การแสดงออกในตัวอย่างการตรวจสอบได้รับการคัดเลือกสำหรับการฟื้นฟู:
โปรตีนและ cyclophilin โปรแกรม PCR ประกอบด้วย: 95 C
เป็นเวลา 5 นาที 45 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วินาที 58 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา?
30 วินาที โค้งละลายได้ดำเนินการเริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาที,
65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและต่อเนื่องเพิ่มขึ้นจาก 0, 11? C / s จน
อุณหภูมิถึง 97 องศาเซลเซียส ในการคำนวณอัตราส่วนหลักฐานญาติ
ระหว่างตัวอย่างและการควบคุมสูตรโดย Pfaffl ถูกใช้: [(Etarget) DCT เป้าหมาย (ตัวอย่างการควบคุม?)] [(Eref) DCT อ้างอิง (การควบคุม? ตัวอย่าง)] ที่ E เป็นไพรเมอร์ที่มีประสิทธิภาพในการตอบสนองเป้าหมายคือยีนของ
ดอกเบี้ยอ้างอิงเป็นยีนอ้างอิงและ DCT คือความแตกต่างในวงจร
ตัวเลขระหว่างการควบคุมและตัวอย่างเมื่อพวกเขา ผ่านการเรืองแสงบาง
เกณฑ์ กราฟมาตรฐานที่ถูกสร้างขึ้นสำหรับแต่ละคู่ไพรเมอร์
ในการคำนวณประสิทธิภาพของไพรเมอร์ในการทำปฏิกิริยา ไพรเมอร์ทุก
ลำดับแสดงในตารางที่ S2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับแต่ละจุดเวลา / การรักษา , สี่ทางชีวภาพ ได้แก่ ประกอบด้วยสี่บุคคลแต่ละคนถูก
วิเคราะห์ เกิดปฏิกิริยาเตรียมเป็น 3 ซ้ำและไม่มีแม่แบบ
ควบคุมรวมสำหรับแต่ละคู่คู่ การแสดงออกของยีนอ้างอิง
3 ซึ่งได้ตรวจสอบและสองมี
การแสดงออกในสอบสวนศึกษาสำหรับการฟื้นฟู :
actin และ cyclophilin .โปรแกรมซึ่งประกอบด้วย : 95  C
5 นาที , 45 รอบ 95  C 10 , 58  C 20 และ 72  C
30 S . หลอมเส้นโค้งแสดงเริ่มต้นที่ 95  C 5 S ,
65  C เป็นเวลา 5 นาทีและต่อเนื่องเพิ่มขึ้น 0 11  c / s จนถึง
อุณหภูมิถึง 97  C เพื่อคำนวณหาอัตราส่วนระหว่างญาติ .
ตัวอย่างและควบคุมสูตรโดย pfaffl ใช้ : [ ( etarget ) ครบกำหนดเป้าหมาย ( ควบคุม  ตัวอย่าง  ) ] [ ( eref ) DCT กรรมการ ( คุม  ตัวอย่าง ) ] , E เป็นไพรเมอร์ ประสิทธิภาพในการเกิดปฏิกิริยา เป้าหมายคือยีนของ
ดอกเบี้ยอ้างอิงเป็นข้อมูลอ้างอิงของยีนและ DCT คือความแตกต่างในรอบ
เลขระหว่างการควบคุมและตัวอย่างเมื่อพวกเขาผ่านเกณฑ์เรือง
แน่นอน เส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นสำหรับแต่ละ primer คู่
หาประสิทธิภาพของแนวทางในการรองพื้น
ทั้งหมดจะแสดงในลำดับตาราง S2 .