3.4 Genotoxicity of Mn on Acanthamo

3.4 Genotoxicity of Mn on Acanthamoeba sp. assessed by Comet Assay
Alkaline Comet assay was used to determine the genotoxicity of Acanthamoeba cell after exposed to Mn for 2
hours at 30oC in IC25 value of Mn which was 12 ppm (half of IC50 value). The DNA damage was evaluated based on
the degree of the DNA damage produced by the cells which were denoted by the scoring of 0,1,2,3 and 4. The
scoring was done as shown in Fig. 4.
Fig 4. Image of comet produced by DNA of Acanthamoeba sp. after being exposed to IC25 concentration of Mn. The scoring was done based on
the tail produced by the comet from the score of 0, 1, 2, 3 and 4. Score 0 indicate intact DNA with no tail (a), Score 1 indicate 25 % of DNA at
the tail (b), Score 2 indicate 25% to 50% of DNA at the tail (c), Score 3 indicate 50% to 75% of DNA at the tail (d), Score 4 indicate more than
75% of DNA at tail (e) (Collins, 2004). These cells were stained with Ethidium Bromide and viewed under fluorescence microscope.
(Magnification: 400ൈ).
A total of 50 cells were randomly chose and scored at IC25 concentration of Mn. After the scoring was done, the
percentages of cells with their respective scores were calculated (Fig. 4). 44% of the DNA damage were at score 0
and 6% of DNA damage were at score 4. Alkaline comet assay are one of the method developed to detect DNA
damage in cell. DNA strand breakages (double, single, alkali-labile sites expressed as single strand breaks) are able
to be detected by this comet assay which is also known as single-cell gel electrophoresis test [17]. According to
Collins [10], contamination of the environment with genotoxins can be assesed via alkaline comet assay with the
suitable organism that can be used as biosensors. In this study, genotoxicity of Mn on Acanthamoeba sp. was being
evaluated via comet assay. To assess the genotoxicity of this compound, the value of IC25 which is 12 ppm (half of
IC50 value) was used to treat the Acanthamoeba sp. cells for 2 hours at 30oC. IC25 value was used instead of IC50 to
determine whether Mn compound is able to induce genotoxic even at low concentration. The damage of the DNA
was evaluated according to five types of score which were 0, 1, 2, 3 and 4 (Fig. 4). They are categorized based on
a b
a b c d e
n v
n
20 Fatimah Hashim et al. / Procedia Environmental Sciences 30 ( 2015 ) 15 – 20
the DNA migration during electrophoresis step. Table 1 shows the percentage of DNA damage with their respective
score at the IC25 value of Mn.
Table 1 Percentage (%) type of comet of Acanthamoeba cells after treatment with Mn for 2h at IC25 value.
Score 0 1 2 3 4
% type of comet 43.59+0.333 22.05+1.201 18.46+1.155 10.26+0.882 5.64+0.667
* Data was obtained from three replicates and significantly different among group (p< 0.05 in Kruskal-Wallis test).
Score 0 have the highest percentage of damage which are 44%, followed by second highest which are score 1
with 22%. 18% of the DNA damage are at score 2 while score 3 and 4 showed lower percentage of DNA damage
which are 10% and 6% respectively. Generally, more than 80% of the comet has noted the score of 0, 1 and 2. Less
than 20% of the comet noted the score of 3 and 4. This has shown that Mn are able to induce mild genotoxicity to
the Acanthamoeba sp. since there are a low percentage of score with 3 and 4 which are considered severe in DNA
damage. This is supported by Nakisah et al. [7] by stating that Score 3 and 4 are considered severe and irreversible,
compared with score 2, 1 and 0. DNA fragmentation related with necrotic and apoptotic cell death may be featured
in increased migration of DNA fragment (comet tail) from the head (nucleus) in comet assay [18]. Though some
metal induces cytotoxicity, they do not necessarily induce genotoxicity. In this study, Mn was found to induce both
cytotoxicity and also mild genotoxicity even at low concentration.
4. Conclusion
Techniques used in this study proved the toxicity of Mn on Acanthamoeba sp. as shown by low IC50 value (24
ppm), while the morphological observation on Mn treated-Acanthamoeba sp. showed damage in its morphological
structure and also has the potential to induce genotoxicity towards Acanthamoeba sp. cell.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4 Genotoxicity ของ Mn ใน Acanthamoeba sp.ที่ประเมิน โดยการวิเคราะห์ดาวหางวิเคราะห์ดาวหางด่างถูกใช้เพื่อกำหนด genotoxicity ของ Acanthamoeba เซลล์หลังจากสัมผัสกับ Mn 2ชั่วโมงที่ 30oC ค่า IC25 ของ Mn ซึ่ง 12 ppm (ครึ่งหนึ่งของค่า IC50) ความเสียหายของดีเอ็นเอถูกประเมินตามระดับความเสียหายของดีเอ็นเอที่ผลิต โดยเซลล์ที่ถูกสามารถบุจากคะแนน 0,1,2,3 และ 4 ที่คะแนนถูกแล้วตามที่แสดงใน Fig. 4ฟิก 4 ภาพของดาวหางที่ผลิต โดยดีเอ็นเอของ Acanthamoeba sp.หลังจากการสัมผัสกับ IC25 ความเข้มข้นของ Mn คะแนนได้ทำตามหางที่ผลิต โดยดาวหางจากคะแนน 0, 1, 2, 3 และ 4 คะแนน 0 บ่งชี้ว่า ดีเอ็นเอที่เหมือนเดิมกับไม่มีหาง (a) 25% ของดีเอ็นเอที่บ่งชี้ 1 คะแนนหาง (b), คะแนน 2 ระบุ 25% ถึง 50% ของดีเอ็นเอที่หาง (c), 50% ถึง 75% ของดีเอ็นเอที่หาง (d) บ่งชี้ 3 คะแนน 4 คะแนนบ่งชี้เพิ่มเติมกว่า75% ของดีเอ็นเอที่หาง (e) (คอลลินส์ 2004) เซลล์เหล่านี้มีสีกับโบรไมด์ Ethidium และดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์ fluorescence(ขยาย: 400ൈ)จำนวน 50 เซลล์ถูกเลือกแบบสุ่ม และคะแนนที่ IC25 ความเข้มข้นของ Mn หลังจากคะแนนการทำ การมีคำนวณเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่มีคะแนนของพวกเขาเกี่ยวข้อง (Fig. 4) 44% ของความเสียหายของดีเอ็นเอได้ที่คะแนน 0และ 6% ของความเสียหายของดีเอ็นเอได้ที่คะแนน 4 วิเคราะห์ดาวหางด่างเป็นหนึ่งวิธีที่พัฒนาขึ้นเพื่อตรวจหาดีเอ็นเอความเสียหายในเซลล์ มีดีเอ็นเอเดอะ breakages (คู่ เดียว อัลคาไล labile ไซต์แสดงเป็นสาระเดียวแบ่ง)การตรวจพบ โดยการทดสอบนี้ดาวหางที่เรียกว่าเซลล์เดียวเจ electrophoresis ทดสอบ [17] ตามที่[10] คอลลินส์ ปนเปื้อนของสิ่งแวดล้อมกับ genotoxins จะ assesed ผ่านดาวหางด่างวิเคราะห์ด้วยการชีวิตที่เหมาะสมที่สามารถใช้เป็น biosensors ในการศึกษานี้ genotoxicity ของ Mn ใน Acanthamoeba sp.อยู่ประเมินผ่านวิเคราะห์ดาวหาง หา genotoxicity นี้ผสม ค่าของ IC25 ซึ่งเป็น 12 ppm (ครึ่งหนึ่งของค่า IC50) ถูกใช้ในการรักษาเซลล์ Acanthamoeba sp. 2 ชั่วโมงที่ 30oC มีใช้ค่า IC25 แทน IC50 กับตรวจสอบว่า Mn ผสมสามารถชวน genotoxic แม้ที่ความเข้มข้นต่ำ ความเสียหายของดีเอ็นเอมีประเมินตามคะแนนที่ได้ 0, 1, 2, 3 และ 4 (Fig. 4) ห้าชนิด พวกเขาจะแบ่งตามแบบ bมี b c d en vn20 ฟาฏิมะฮ์ฮาชิม et al. / วิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อม Procedia 30 (2015) 15 – 20การย้ายดีเอ็นเอระหว่างขั้นตอนการ electrophoresis ตารางที่ 1 แสดงเปอร์เซ็นต์ของความเสียหายของดีเอ็นเอมีความเกี่ยวข้องคะแนนค่า IC25 ของ Mnตารางที่ 1 เปอร์เซ็นต์ (%) ชนิดดาวหางของ Acanthamoeba เซลล์หลังการรักษาด้วย Mn 2h IC25 ค่าคะแนน 0 1 2 3 4ชนิด%ของดาวหาง 43.59 0.333 22.05 + 1.201 18.46 + 1.155 10.26 + 0.882 5.64 + 0.667* ข้อมูลได้รับจากการคัดลอกตัวเองสาม และแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่ม (p < 0.05 ในทดสอบ Kruskal วาลลิ)คะแนน 0 มีเปอร์เซ็นต์สูงสุดของความเสียหายซึ่งเป็น 44% ตามที่สองสูงที่สุดจากที่มีคะแนน 122% 18% ความเสียหายของดีเอ็นเอเป็นที่คะแนนขณะที่คะแนน 2 3 และ 4 แสดงให้เห็นเปอร์เซ็นต์ต่ำกว่าความเสียหายของดีเอ็นเอที่อยู่ 10% และ 6% ตามลำดับ ทั่วไป มากกว่า 80% ของดาวหางมีบันทึกการให้คะแนน 0, 1 และ 2 น้อยกว่า 20% ของดาวหางที่สังเกตคะแนนของ 3 และ 4 นี้ได้แสดงว่า จะชวน genotoxicity อ่อนกับ Mnsp. Acanthamoeba เนื่องจากมีเปอร์เซ็นต์ต่ำสุดของคะแนน 3 และ 4 ซึ่งถือว่ารุนแรงในดีเอ็นเอความเสียหาย นี้สนับสนุนโดย Nakisah et al. [7] โดยระบุว่า คะแนน 3 และ 4 ถือว่ารุนแรง และ ควมเปรียบเทียบกับคะแนน 2, 1 และ 0 การกระจายตัวของดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องกับ necrotic และ apoptotic เซลล์ตายอาจจะแนะนำในการโยกย้ายเพิ่มของดีเอ็นเอแยกส่วน (ดาวหางหาง) จากหัว (นิวเคลียส) ในการวิเคราะห์ดาวหาง [18] แม้ว่าบางโลหะก่อให้เกิด cytotoxicity พวกเขาไม่จำเป็นต้องก่อให้เกิด genotoxicity ในการศึกษานี้ Mn พบชวนทั้งสองcytotoxicity และ genotoxicity อ่อนแม้ที่ความเข้มข้นต่ำ4. บทสรุปเทคนิคที่ใช้ในการศึกษานี้ได้พิสูจน์ความเป็นพิษของ Mn ใน Acanthamoeba sp.แสดง โดยค่า IC50 ต่ำ (24ppm), ในขณะที่สังเกตสัณฐานบน Mn ถือว่า Acanthamoeba sp.พบว่าความเสียหายในของของโครงสร้าง และมีศักยภาพในการก่อให้เกิด genotoxicity ต่อเซลล์ Acanthamoeba sp

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 พิษต่อระบบพันธุกรรมของ Mn ใน Acanthamoeba SP ประเมินโดยดาวหาง Assay
ทดสอบอัลคาไลน์ดาวหางถูกใช้ในการตรวจสอบพันธุกรรมของเซลล์ Acanthamoeba หลังจากที่สัมผัสกับ Mn 2
ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสค่า IC25 ของ Mn ซึ่งเป็น 12 ppm (ครึ่งหนึ่งของค่า IC50) ความเสียหายของดีเอ็นเอถูกประเมินขึ้นอยู่กับระดับของความเสียหายของดีเอ็นเอที่ผลิตโดยเซลล์ที่ถูกแสดงโดยการให้คะแนนของ 0,1,2,3 และ 4 ที่ให้คะแนนคือทำตามที่แสดงในรูป 4. รูปที่ 4 ภาพของดาวหางที่ผลิตโดยดีเอ็นเอของ Acanthamoeba SP หลังจากการสัมผัสกับความเข้มข้นของ IC25 Mn เกณฑ์การให้คะแนนที่ได้กระทำขึ้นอยู่กับหางที่ผลิตโดยดาวหางจากคะแนนของ 0, 1, 2, 3 และ 4 คะแนน 0 บ่งชี้ดีเอ็นเอเหมือนเดิมกับหางไม่มี (a) 1 คะแนนบ่งชี้ว่า 25% ของดีเอ็นเอที่หาง(ข ) คะแนน 2 บ่งชี้ว่า 25% ถึง 50% ของดีเอ็นเอที่หาง (ค) คะแนน 3 บ่งชี้ว่า 50% ถึง 75% ของดีเอ็นเอที่หาง (ง) คะแนน 4 บ่งชี้ว่ามากกว่า75% ของดีเอ็นเอที่หาง (จ) (คอลลิน, 2004) เซลล์เหล่านี้ถูกย้อมด้วยสี Ethidium Bromide และดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง. (ขยาย: 400 ൈ). รวม 50 เซลล์ที่ถูกสุ่มเลือกและคะแนนที่มีความเข้มข้นของ IC25 Mn หลังจากที่การให้คะแนนที่ได้กระทำในอัตราร้อยละของเซลล์ที่มีคะแนนของตนจะถูกคำนวณ (รูปที่. 4) 44% ของความเสียหายของดีเอ็นเอที่มีคะแนน 0 และ 6% ของความเสียหายของดีเอ็นเอที่มีคะแนนการทดสอบอัลคาไลน์ 4. ดาวหางเป็นหนึ่งในวิธีการที่พัฒนาขึ้นมาเพื่อตรวจสอบดีเอ็นเอของความเสียหายในเซลล์ แตกหักดีเอ็นเอ (คู่เดียวเว็บไซต์ด่าง labile แสดงเป็นตัวแบ่งฝั่งเดียว) สามารถที่จะได้รับการตรวจพบโดยการทดสอบดาวหางซึ่งเป็นที่รู้จักกันทดสอบข่าวคราวเซลล์เดียว[17] ตามที่คอลลิน [10] การปนเปื้อนของสภาพแวดล้อมที่มี genotoxins สามารถผ่านการทดสอบ assesed ดาวหางอัลคาไลน์ที่มีสิ่งมีชีวิตที่เหมาะสมที่สามารถใช้เป็นไบโอเซนเซอร์ ในการศึกษานี้ genotoxicity ของ Mn ใน Acanthamoeba SP ถูกประเมินผ่านการทดสอบดาวหาง เพื่อประเมินพันธุกรรมของสารนี้ค่าของ IC25 ซึ่งเป็น 12 ppm (ครึ่งหนึ่งของค่าIC50) ถูกนำมาใช้ในการรักษา Acanthamoeba SP เซลล์เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส ค่า IC25 ถูกนำมาใช้แทนการ IC50 เพื่อตรวจสอบว่าสารแมงกานีสสามารถที่จะทำให้เกิดการgenotoxic แม้ในความเข้มข้นต่ำ ความเสียหายของดีเอ็นเอที่ถูกประเมินตามห้าประเภทของคะแนนซึ่งเป็น 0, 1, 2, 3 และ 4 (รูปที่. 4) พวกเขามีการแบ่งประเภทขึ้นอยู่กับAB BCDE NV n 20 Fatimah ฮิมอัลเอต / Procedia วิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อม 30 (2015) 15-20 การโยกย้ายดีเอ็นเอในระหว่างขั้นตอนอิ ตารางที่ 1 แสดงค่าร้อยละของความเสียหายของดีเอ็นเอที่มีตนคะแนนที่ค่าIC25 ของ Mn. ตารางที่ 1 ร้อยละ (%) ชนิดของดาวหางของเซลล์ Acanthamoeba หลังการรักษาด้วย Mn สำหรับ 2h ที่ค่า IC25. คะแนน 0 1 2 3 4% ชนิดของ ดาวหาง 43.59 + 0.333 22.05 + 1.201 18.46 + 1.155 10.26 + 0.882 5.64 + 0.667 * ข้อมูลที่ได้รับจากสามซ้ำและมีความหมายที่แตกต่างกันในกลุ่ม (p <0.05 ในการทดสอบ Kruskal-Wallis). คะแนน 0 มีเปอร์เซ็นต์สูงสุดของความเสียหายที่ 44 % ตามด้วยสองสูงสุดที่มีคะแนน 1 กับ 22% 18% ของความเสียหายของดีเอ็นเออยู่ที่ 2 คะแนนขณะที่คะแนน 3 และ 4 แสดงให้เห็นว่าร้อยละของการเสียหายของดีเอ็นเอที่ต่ำกว่าที่10% และ 6% ตามลำดับ โดยทั่วไปกว่า 80% ของดาวหางได้ตั้งข้อสังเกตคะแนนของ 0, 1 และ 2 น้อยกว่า20% ของการตั้งข้อสังเกตดาวหางคะแนนที่ 3 และ 4 นี้ได้แสดงให้เห็นว่า Mn สามารถที่จะทำให้เกิดการ genotoxicity อ่อนถึงAcanthamoeba SP . เนื่องจากมีอัตราร้อยละต่ำของคะแนนกับ 3 และ 4 ซึ่งถือว่ารุนแรงในดีเอ็นเอของความเสียหาย นี้ได้รับการสนับสนุนโดย Nakisah et al, [7] โดยระบุว่าคะแนนที่ 3 และ 4 ได้รับการพิจารณาอย่างรุนแรงและกลับไม่ได้เมื่อเทียบกับคะแนน2, 1 และการกระจายตัวของดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้อง 0. กับการตายของเซลล์ตายและเกิด apoptosis อาจจะให้ความสำคัญในการโยกย้ายที่เพิ่มขึ้นของชิ้นดีเอ็นเอ(หางของดาวหาง) จากหัว (นิวเคลียส) ในการทดสอบดาวหาง [18] แม้ว่าบางโลหะก่อให้เกิดพิษพวกเขาไม่จำเป็นต้องทำให้เกิด genotoxicity ในการศึกษานี้ Mn ก็พบว่าทั้งสองที่จะทำให้เกิดความเป็นพิษและgenotoxicity อ่อนแม้ในความเข้มข้นต่ำ. 4 สรุปเทคนิคที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการพิสูจน์ความเป็นพิษของ Mn ใน Acanthamoeba เอสพี ที่แสดงโดยค่า IC50 ต่ำ (24 ppm) ในขณะที่การสังเกตลักษณะทางสัณฐานวิทยาใน Mn รับการรักษา Acanthamoeba SP แสดงให้เห็นความเสียหายในลักษณะทางสัณฐานวิทยาของโครงสร้างและยังมีศักยภาพที่จะก่อให้เกิดการต่อพันธุกรรม Acanthamoeba เอสพี เซลล์