2.7. ELISA The reactivity of McAb

2.7. ELISA
The reactivity of McAb was determined by direct ELISA. A 96-well immunoplate (Thermo Scientific, USA) coated with 100μL of the indicated concentration of synthetic peptides was treated with 300μLBSA for 1 h to reduce non-specific adsorption. After the blocking, the plate was washed with PBS containing 0.05% Tween 20 (PBST) and incubated with 100μL of the prepared anti-α-TTP McAb for 1 h. The plate was then washed with PBST again and reacted with 100μL of 5000-fold-diluted HRP conjugated goat anti-mouse IgG (MBL, Japan) for 1 h. After five washes with PBST, substrate 3, 3′, 5, 5′-tetramethylbenzidine (TMB, Amresco, USA) was added to each well for visualization. Twenty minutes later the reaction was stopped by adding 50μL/well of 2 M sulphuric acid. The optical densities were read at 450 nm in a microtiter plate reader (Tecan, Switzerland)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 ELISA
เกิดปฏิกิริยาของ McAb ถูกกำหนด โดย ELISA โดยตรง มี 96-ดี immunoplate (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา) เคลือบ ด้วย 100μL ระบุความเข้มข้นของเปปไทด์สังเคราะห์ถูกรักษา ด้วย 300μLBSA สำหรับ h 1 เพื่อลดการดูดซับไม่ใช่เฉพาะ หลังจากบล็อก จานที่ล้าง ด้วย PBS ประกอบด้วย 005% Tween 20 (PBST) และ incubated กับ 100μL ของ McAb ต่อต้าน-α-TTP เตรียมสำหรับ 1 h จาน แล้วไม่ล้าง ด้วย PBST อีกครั้ง และปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับ 100μL ทำให้เจือจาง 5000 fold HRP แพะกลวงป้องกันเมาส์ IgG (MBL ญี่ปุ่น) สำหรับ 1 h หลังจากห้า washes PBST พื้นผิว 3, 3′, 5, 5′-tetramethylbenzidine (ทหารไทย Amresco สหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละอย่างดีสำหรับการแสดงภาพประกอบเพลง 20 นาทีภายหลังปฏิกิริยาถูกหยุด โดยการเพิ่ม 50μL/ดี ของ 2 M กรดซัลฟุริก ความหนาแน่นออปติคัลได้อ่านที่ 450 nm ใน microtiter จานอ่าน (Tecan สวิตเซอร์แลนด์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 ELISA
ปฏิกิริยาของ McAb ถูกกำหนดโดยวิธี ELISA โดยตรง 96 ดี immunoplate (เทอร์โมวิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) เคลือบด้วย100μLของความเข้มข้นที่ระบุเปปไทด์สังเคราะห์ได้รับการรักษาด้วย300μLBSAเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อลดการดูดซับที่ไม่เฉพาะเจาะจง หลังจากการปิดกั้นจานถูกล้างด้วยพีบีเอสที่มี 0.05% Tween 20 (PBST) และบ่มกับ100μLของที่เตรียมไว้ป้องกันα--TTP McAb เวลา 1 ชั่วโมง จานถูกล้างแล้วด้วย PBST อีกครั้งและปฏิกิริยากับ100μL 5000 เท่าปรับลด HRP แพะผันต่อต้านเมาส์ IgG (MBL, ญี่ปุ่น) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากห้าล้างด้วย PBST สารตั้งต้น 3, 3 ', 5, 5'-Tetramethylbenzidine (ทีเอ็มบี, AMRESCO สหรัฐอเมริกา) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละที่ดีสำหรับการแสดง ยี่สิบนาทีต่อมาเกิดปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม50μL / ดีถึง 2 กรดซัลฟูริก M ความหนาแน่นของแสงอ่านที่ 450 นาโนเมตรในการอ่านแผ่นไมโคร (Tecan วิตเซอร์แลนด์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . +
ปฏิกิริยาของ mcab ถูกกําหนดโดยตรงวิธีอีไลซ่า เป็น 96 ดี immunoplate ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , USA ) เคลือบด้วย 100 μ L ของพบความเข้มข้นของเปปไทด์สังเคราะห์ได้รับ 300 μ lbsa เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เพื่อลดการดูดซับที่ไม่เฉพาะเจาะจง . หลังจากการปิดกั้นจานล้างด้วย pbs ที่มี 005 tween 20 ( pbst ) และบ่มด้วย 100 μล. เตรียมต่อต้าน - แอลฟา TTP mcab เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แล้วล้างด้วย pbst จานอีกครั้ง และทำปฏิกิริยากับ 100 μผม 5000 พับ HRP เจือจางและ IgG anti เมาส์แพะ ( mbl , ญี่ปุ่น ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจาก 5 ล้างด้วย pbst ตั้งต้น 3 , 3 ได้รับ 5 , 5 ’ - tetramethylbenzidine ( ธนาคาร amresco , USA ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละสำหรับการสร้างภาพยี่สิบนาทีต่อมา ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 50 μ L / ดี 2 M sulphuric กรด . หนาแน่นที่แสงอ่าน 450 nm ในไมโครเพลทอ่าน ( TECAN , สวิตเซอร์แลนด์ )