- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
For example, hemolymph contains a l
For example, hemolymph contains a large number
of abundant proteins including haemocyanin, cryptocyanin,
plasma coagulogen, heteroagglutinins, and
vitellogenins, among others [15, 16]. These proteins can
degrade into small fragments under natural conditions
or during sample processing, which not only suppresses
the detection of low-abundance peptide hormones
but also complicates data analysis of the hemolymph
peptidome. Furthermore, the circulating peptide
hormones are present at extremely low concentrations
(pM-nM) [17], which is in contrast with the high salt
concentrations (500 mM) inherent to marine organisms
that interferes with mass spectrometric analysis of
neuropeptides. Therefore, developing advanced sample
preparation method is a key to improve the sensitivity
and selectivity for detection of putative neuropeptides
in hemolymph.
Recently, Fastner and coworkers detected preecdysis
triggering hormone (PETH) with concentration
of 30 to 45 nM during pre-ecdysis in insect hemolymph
using heat-induced abundant protein depletion, ultrafiltration,
and reversed-phase high-performance liquid
chromatography (RP-HPLC) [17]. In our previous study,
using acidified methanol as extraction buffer, Cancer borealis
tachykinin-related peptide (CabTRP) Ia was detected
in hemolymph of Cancer productus under starvation with
accurate mass measurement via MALDI-FTMS [18]. However,
no MS/MS data were available to confirm the
identity of the peptide due to its low concentration in the
sample.
This article provides the first description of an effective
sample preparation methods for peptidomic profiling
and neuropeptide detection in crustacean hemolymph
using MS. In this study, we have developed a
hybrid sample preparation approach combining ultracentrifugation
to remove the high molecular weight
species and micro-scale solid-phase extraction to extract
and concentrate neuropeptides upon desalting, which
enables effective detection of peptide hormones in the
hemolymph. We systematically investigated three different
buffer solutions and two types of protein depletion
methods including heat-induced and acid-induced
protein denaturation/precipitation. With the effective
removal of highly abundant proteins, acidified methanol
spiked with EDTA and protease inhibitors produced
the best recovery of spiked neuropeptide standards
and yielded sensitive detection of neuropeptides
from hemolymph samples. CabTRP Ia (m/z 934.5) was
detected as a circulating peptide hormone from hemolymph
in starved animal with supporting MS/MS information,
suggesting a potential role of this peptide in
feeding regulation. Several additional neuropeptides
were also detected based on accurate mass matching
with previously reported neuropeptides. We also de
novo sequenced a peptide with C-terminal KFamide,
which could be a novel family of neuropeptide(s)
whose function remains to be determined. Some common
protein degradation products present in hemolymph
were also identified with de novo sequencing
assisted by Mascot database searching and BLAST.
of abundant proteins including haemocyanin, cryptocyanin,
plasma coagulogen, heteroagglutinins, and
vitellogenins, among others [15, 16]. These proteins can
degrade into small fragments under natural conditions
or during sample processing, which not only suppresses
the detection of low-abundance peptide hormones
but also complicates data analysis of the hemolymph
peptidome. Furthermore, the circulating peptide
hormones are present at extremely low concentrations
(pM-nM) [17], which is in contrast with the high salt
concentrations (500 mM) inherent to marine organisms
that interferes with mass spectrometric analysis of
neuropeptides. Therefore, developing advanced sample
preparation method is a key to improve the sensitivity
and selectivity for detection of putative neuropeptides
in hemolymph.
Recently, Fastner and coworkers detected preecdysis
triggering hormone (PETH) with concentration
of 30 to 45 nM during pre-ecdysis in insect hemolymph
using heat-induced abundant protein depletion, ultrafiltration,
and reversed-phase high-performance liquid
chromatography (RP-HPLC) [17]. In our previous study,
using acidified methanol as extraction buffer, Cancer borealis
tachykinin-related peptide (CabTRP) Ia was detected
in hemolymph of Cancer productus under starvation with
accurate mass measurement via MALDI-FTMS [18]. However,
no MS/MS data were available to confirm the
identity of the peptide due to its low concentration in the
sample.
This article provides the first description of an effective
sample preparation methods for peptidomic profiling
and neuropeptide detection in crustacean hemolymph
using MS. In this study, we have developed a
hybrid sample preparation approach combining ultracentrifugation
to remove the high molecular weight
species and micro-scale solid-phase extraction to extract
and concentrate neuropeptides upon desalting, which
enables effective detection of peptide hormones in the
hemolymph. We systematically investigated three different
buffer solutions and two types of protein depletion
methods including heat-induced and acid-induced
protein denaturation/precipitation. With the effective
removal of highly abundant proteins, acidified methanol
spiked with EDTA and protease inhibitors produced
the best recovery of spiked neuropeptide standards
and yielded sensitive detection of neuropeptides
from hemolymph samples. CabTRP Ia (m/z 934.5) was
detected as a circulating peptide hormone from hemolymph
in starved animal with supporting MS/MS information,
suggesting a potential role of this peptide in
feeding regulation. Several additional neuropeptides
were also detected based on accurate mass matching
with previously reported neuropeptides. We also de
novo sequenced a peptide with C-terminal KFamide,
which could be a novel family of neuropeptide(s)
whose function remains to be determined. Some common
protein degradation products present in hemolymph
were also identified with de novo sequencing
assisted by Mascot database searching and BLAST.
0/5000
ตัวอย่าง hemolymph ประกอบด้วยจำนวนมากของโปรตีนมากมายรวมถึง haemocyanin, cryptocyaninพลา coagulogen, heteroagglutinins และvitellogenins หมู่คนอื่น ๆ [15, 16] โปรตีนเหล่านี้สามารถย่อยสลายเป็นชิ้น ๆ เล็ก ๆ ภายใต้เงื่อนไขของธรรมชาติหรือในระหว่างการประมวลผลตัวอย่าง ซึ่งไม่เพียงแต่ไม่ใส่การตรวจพบฮอร์โมนเพปไทด์ความอุดมสมบูรณ์ต่ำแต่ยัง complicates hemolymph การวิเคราะห์ข้อมูลpeptidome นอกจากนี้ เพปไทด์หมุนเวียนฮอร์โมนอยู่ที่ความเข้มข้นต่ำมาก(น.-nM) [17], ซึ่งเป็น in contrast with เกลือสูงความเข้มข้น (500 mM) โดยธรรมชาติกับสิ่งมีชีวิตทางทะเลที่รบกวนการวิเคราะห์โดยรวม spectrometricneuropeptides ดังนั้น การพัฒนาตัวอย่างขั้นสูงวิธีการเตรียมคือ คีย์การปรับปรุงระดับความลับและวิธีตรวจ putative neuropeptidesใน hemolymphล่าสุด Fastner และเพื่อนร่วมงานพบ preecdysisเรียกฮอร์โมน (ร้าน) กับความเข้มข้นของ 30-45 nM ระหว่าง ecdysis ก่อนใน hemolymph แมลงใช้ความร้อนที่เกิดจากโปรตีนมากมายจนหมด ultrafiltrationและกลับเฟสของเหลวประสิทธิภาพสูงchromatography (RP-HPLC) [17] ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเราโดยใช้เมทานอล acidified แยกบัฟเฟอร์ มะเร็งเหนือพบเปป tachykinin ที่เกี่ยวข้อง (CabTRP) Iaใน hemolymph productus มะเร็งภายใต้ความอดอยากด้วยประเมินโดยรวมถูกต้องผ่าน MALDI FTMS [18] อย่างไรก็ตามข้อมูล MS/MS ไม่มีการยืนยันการidentity of the peptide due to its low concentration in thesample.This article provides the first description of an effectivesample preparation methods for peptidomic profilingand neuropeptide detection in crustacean hemolymphusing MS. In this study, we have developed ahybrid sample preparation approach combining ultracentrifugationto remove the high molecular weightspecies and micro-scale solid-phase extraction to extractand concentrate neuropeptides upon desalting, whichenables effective detection of peptide hormones in thehemolymph. We systematically investigated three differentbuffer solutions and two types of protein depletionmethods including heat-induced and acid-inducedprotein denaturation/precipitation. With the effectiveremoval of highly abundant proteins, acidified methanolspiked with EDTA and protease inhibitors producedthe best recovery of spiked neuropeptide standardsand yielded sensitive detection of neuropeptidesfrom hemolymph samples. CabTRP Ia (m/z 934.5) wasdetected as a circulating peptide hormone from hemolymphin starved animal with supporting MS/MS information,suggesting a potential role of this peptide infeeding regulation. Several additional neuropeptideswere also detected based on accurate mass matchingwith previously reported neuropeptides. We also denovo sequenced a peptide with C-terminal KFamide,which could be a novel family of neuropeptide(s)whose function remains to be determined. Some commonผลิตภัณฑ์ย่อยสลายโปรตีนใน hemolymphยังระบุ ด้วย de novo ลำดับช่วยค้นหาฐานข้อมูลมาสค็อทและระเบิด
การแปล กรุณารอสักครู่..
For example, hemolymph contains a large number
of abundant proteins including haemocyanin, cryptocyanin,
plasma coagulogen, heteroagglutinins, and
vitellogenins, among others [15, 16]. These proteins can
degrade into small fragments under natural conditions
or during sample processing, which not only suppresses
the detection of low-abundance peptide hormones
but also complicates data analysis of the hemolymph
peptidome. Furthermore, the circulating peptide
hormones are present at extremely low concentrations
(pM-nM) [17], which is in contrast with the high salt
concentrations (500 mM) inherent to marine organisms
that interferes with mass spectrometric analysis of
neuropeptides. Therefore, developing advanced sample
preparation method is a key to improve the sensitivity
and selectivity for detection of putative neuropeptides
in hemolymph.
Recently, Fastner and coworkers detected preecdysis
triggering hormone (PETH) with concentration
of 30 to 45 nM during pre-ecdysis in insect hemolymph
using heat-induced abundant protein depletion, ultrafiltration,
and reversed-phase high-performance liquid
chromatography (RP-HPLC) [17]. In our previous study,
using acidified methanol as extraction buffer, Cancer borealis
tachykinin-related peptide (CabTRP) Ia was detected
in hemolymph of Cancer productus under starvation with
accurate mass measurement via MALDI-FTMS [18]. However,
no MS/MS data were available to confirm the
identity of the peptide due to its low concentration in the
sample.
This article provides the first description of an effective
sample preparation methods for peptidomic profiling
and neuropeptide detection in crustacean hemolymph
using MS. In this study, we have developed a
hybrid sample preparation approach combining ultracentrifugation
to remove the high molecular weight
species and micro-scale solid-phase extraction to extract
and concentrate neuropeptides upon desalting, which
enables effective detection of peptide hormones in the
hemolymph. We systematically investigated three different
buffer solutions and two types of protein depletion
methods including heat-induced and acid-induced
protein denaturation/precipitation. With the effective
removal of highly abundant proteins, acidified methanol
spiked with EDTA and protease inhibitors produced
the best recovery of spiked neuropeptide standards
and yielded sensitive detection of neuropeptides
from hemolymph samples. CabTRP Ia (m/z 934.5) was
detected as a circulating peptide hormone from hemolymph
in starved animal with supporting MS/MS information,
suggesting a potential role of this peptide in
feeding regulation. Several additional neuropeptides
were also detected based on accurate mass matching
with previously reported neuropeptides. We also de
novo sequenced a peptide with C-terminal KFamide,
which could be a novel family of neuropeptide(s)
whose function remains to be determined. Some common
protein degradation products present in hemolymph
were also identified with de novo sequencing
assisted by Mascot database searching and BLAST.
of abundant proteins including haemocyanin, cryptocyanin,
plasma coagulogen, heteroagglutinins, and
vitellogenins, among others [15, 16]. These proteins can
degrade into small fragments under natural conditions
or during sample processing, which not only suppresses
the detection of low-abundance peptide hormones
but also complicates data analysis of the hemolymph
peptidome. Furthermore, the circulating peptide
hormones are present at extremely low concentrations
(pM-nM) [17], which is in contrast with the high salt
concentrations (500 mM) inherent to marine organisms
that interferes with mass spectrometric analysis of
neuropeptides. Therefore, developing advanced sample
preparation method is a key to improve the sensitivity
and selectivity for detection of putative neuropeptides
in hemolymph.
Recently, Fastner and coworkers detected preecdysis
triggering hormone (PETH) with concentration
of 30 to 45 nM during pre-ecdysis in insect hemolymph
using heat-induced abundant protein depletion, ultrafiltration,
and reversed-phase high-performance liquid
chromatography (RP-HPLC) [17]. In our previous study,
using acidified methanol as extraction buffer, Cancer borealis
tachykinin-related peptide (CabTRP) Ia was detected
in hemolymph of Cancer productus under starvation with
accurate mass measurement via MALDI-FTMS [18]. However,
no MS/MS data were available to confirm the
identity of the peptide due to its low concentration in the
sample.
This article provides the first description of an effective
sample preparation methods for peptidomic profiling
and neuropeptide detection in crustacean hemolymph
using MS. In this study, we have developed a
hybrid sample preparation approach combining ultracentrifugation
to remove the high molecular weight
species and micro-scale solid-phase extraction to extract
and concentrate neuropeptides upon desalting, which
enables effective detection of peptide hormones in the
hemolymph. We systematically investigated three different
buffer solutions and two types of protein depletion
methods including heat-induced and acid-induced
protein denaturation/precipitation. With the effective
removal of highly abundant proteins, acidified methanol
spiked with EDTA and protease inhibitors produced
the best recovery of spiked neuropeptide standards
and yielded sensitive detection of neuropeptides
from hemolymph samples. CabTRP Ia (m/z 934.5) was
detected as a circulating peptide hormone from hemolymph
in starved animal with supporting MS/MS information,
suggesting a potential role of this peptide in
feeding regulation. Several additional neuropeptides
were also detected based on accurate mass matching
with previously reported neuropeptides. We also de
novo sequenced a peptide with C-terminal KFamide,
which could be a novel family of neuropeptide(s)
whose function remains to be determined. Some common
protein degradation products present in hemolymph
were also identified with de novo sequencing
assisted by Mascot database searching and BLAST.
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตัวอย่างเช่น สามารถมีจำนวนมากของโปรตีนมากมาย
cryptocyanin รวมทั้งฮีโมไซยานิน , พลาสมา , coagulogen heteroagglutinins , ,
vitellogenins , หมู่คนอื่น ๆ [ 15 , 16 ) โปรตีนเหล่านี้สามารถ
ลดลงเป็นสะเก็ดเล็กๆ ภายใต้เงื่อนไข
หรือในระหว่างการประมวลผลตัวอย่างธรรมชาติ ซึ่งไม่เพียง แต่ทำให้ตรวจหาต่ำมากมาย
เปปไทด์ฮอร์โมนแต่ก็มีความซับซ้อนของการวิเคราะห์ข้อมูล ของ เลือด peptidome
. นอกจากนี้ การไหลเวียนของเปปไทด์ฮอร์โมนที่มีอยู่น้อยมาก
( ความเข้มข้น PM nm ) [ 17 ] ซึ่งเป็นในทางตรงกันข้ามกับความเข้มข้นเกลือ
สูง ( 500 มม. ) ในสิ่งมีชีวิตในทะเล
ที่คาบเกี่ยวกับมวลความวิเคราะห์
นิวโรเพ็พไทด์ . ดังนั้น การพัฒนา
ตัวอย่างขั้นสูงวิธีการเตรียมเป็นคีย์เพื่อปรับปรุงความไว
และ การตรวจหานิวโรเพ็พไทด์กรดอะมิโนในเลือด .
เมื่อเร็วๆ นี้ fastner และเพื่อนร่วมงานพบ preecdysis
กระตุ้นฮอร์โมน ( สิ่ง ) ที่ความเข้มข้น 30 ถึง 45 nm ใน
ก่อนรอช้าในเลือดโดยใช้ความร้อนเหนี่ยวนำแมลงมากมายโปรตีนพร่องกรอง ,
reversed-phase ประสิทธิภาพสูงของเหลวและ
โครมาโตกราฟี ( ๆ ) [ 17 ] ในการศึกษาของเราที่ใช้เมทานอลเป็นสารสกัดปรับ
,
borealis มะเร็ง tachykinin เกี่ยวข้องเปปไทด์ ( cabtrp ) iA ที่ตรวจพบในเลือดของ productus มะเร็ง
ถูกต้องมวลภายใต้ความหิวโหยโดยการวัดทาง maldi-ftms [ 18 ] อย่างไรก็ตาม ไม่มี MS / MS
ข้อมูลที่มีอยู่เพื่อยืนยันตัวตนของเปปไทด์ เนื่องจากมีความเข้มข้นต่ำใน
ตัวอย่างบทความนี้ให้คำอธิบายแรกของการเตรียมตัวอย่างวิธีที่มีประสิทธิภาพสำหรับ peptidomic
นิวโรเพปไทด์ตรวจหาในโปรไฟล์และสามารถใช้คุณแตกต่างกันในการศึกษาครั้งนี้จึงได้พัฒนาแนวทางการเตรียมตัว
ไฮบริดรวม ultracentrifugation
เอาสูงน้ำหนักโมเลกุลชนิดไมโครสเกลส่วนการสกัดแยก
และสมาธินิวโรเพ็พไทด์เมื่อ desalting ซึ่ง
ช่วยให้การตรวจจับของเปปไทด์ฮอร์โมนใน
เลือดมีประสิทธิภาพ เรามีระบบสืบสวน 3 สารละลายบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันสองชนิดของโปรตีนและค่า
วิธีการรวมทั้งความร้อนเกิดและ acid-induced
( / โปรตีนที่ตกตะกอน กับการกำจัดที่มีประสิทธิภาพของโปรตีนสูงมากมาย
ปรับเมทานอล ,ถูกแทงด้วย EDTA และ protease inhibitors ผลิต
การกู้คืนที่ดีที่สุดของนิวโรเปปไทด์จากมาตรฐาน และจากการตรวจสอบของนิวโรเพ็พไทด์
จากตัวอย่างเลือด อ่อนไหว cabtrp IA ( M / Z 934.5 ) คือ
ตรวจพบเป็นเปปไทด์ฮอร์โมนจากเลือดหมุนเวียนในสัตว์อดอยาก สนับสนุน
แนะนำข้อมูล MS / MS , บทบาทศักยภาพของเปปไทด์ใน
ให้อาหารระเบียบเพิ่มเติมหลายนิวโรเพ็พไทด์
ยังตรวจจับจากมวล
ถูกต้องตรงกันกับรายงานก่อนหน้านี้นิวโรเพ็พไทด์ . เรายัง เดอโนโวนี้เป็นเปปไทด์ด้วย
kfamide ซึ่ง , ซึ่งอาจเป็นครอบครัวใหม่ของนิวโรเปปไทด์ ( s )
ที่มีฟังก์ชันยังคงที่จะตัดสินใจ ทั่วไปผลิตภัณฑ์ที่มีอยู่ในเลือด โปรตีนย่อย
ยังระบุด้วยอีกครั้งจัดลำดับ
ช่วยโดยมิ่งขวัญการค้นหาฐานข้อมูลและระเบิด
cryptocyanin รวมทั้งฮีโมไซยานิน , พลาสมา , coagulogen heteroagglutinins , ,
vitellogenins , หมู่คนอื่น ๆ [ 15 , 16 ) โปรตีนเหล่านี้สามารถ
ลดลงเป็นสะเก็ดเล็กๆ ภายใต้เงื่อนไข
หรือในระหว่างการประมวลผลตัวอย่างธรรมชาติ ซึ่งไม่เพียง แต่ทำให้ตรวจหาต่ำมากมาย
เปปไทด์ฮอร์โมนแต่ก็มีความซับซ้อนของการวิเคราะห์ข้อมูล ของ เลือด peptidome
. นอกจากนี้ การไหลเวียนของเปปไทด์ฮอร์โมนที่มีอยู่น้อยมาก
( ความเข้มข้น PM nm ) [ 17 ] ซึ่งเป็นในทางตรงกันข้ามกับความเข้มข้นเกลือ
สูง ( 500 มม. ) ในสิ่งมีชีวิตในทะเล
ที่คาบเกี่ยวกับมวลความวิเคราะห์
นิวโรเพ็พไทด์ . ดังนั้น การพัฒนา
ตัวอย่างขั้นสูงวิธีการเตรียมเป็นคีย์เพื่อปรับปรุงความไว
และ การตรวจหานิวโรเพ็พไทด์กรดอะมิโนในเลือด .
เมื่อเร็วๆ นี้ fastner และเพื่อนร่วมงานพบ preecdysis
กระตุ้นฮอร์โมน ( สิ่ง ) ที่ความเข้มข้น 30 ถึง 45 nm ใน
ก่อนรอช้าในเลือดโดยใช้ความร้อนเหนี่ยวนำแมลงมากมายโปรตีนพร่องกรอง ,
reversed-phase ประสิทธิภาพสูงของเหลวและ
โครมาโตกราฟี ( ๆ ) [ 17 ] ในการศึกษาของเราที่ใช้เมทานอลเป็นสารสกัดปรับ
,
borealis มะเร็ง tachykinin เกี่ยวข้องเปปไทด์ ( cabtrp ) iA ที่ตรวจพบในเลือดของ productus มะเร็ง
ถูกต้องมวลภายใต้ความหิวโหยโดยการวัดทาง maldi-ftms [ 18 ] อย่างไรก็ตาม ไม่มี MS / MS
ข้อมูลที่มีอยู่เพื่อยืนยันตัวตนของเปปไทด์ เนื่องจากมีความเข้มข้นต่ำใน
ตัวอย่างบทความนี้ให้คำอธิบายแรกของการเตรียมตัวอย่างวิธีที่มีประสิทธิภาพสำหรับ peptidomic
นิวโรเพปไทด์ตรวจหาในโปรไฟล์และสามารถใช้คุณแตกต่างกันในการศึกษาครั้งนี้จึงได้พัฒนาแนวทางการเตรียมตัว
ไฮบริดรวม ultracentrifugation
เอาสูงน้ำหนักโมเลกุลชนิดไมโครสเกลส่วนการสกัดแยก
และสมาธินิวโรเพ็พไทด์เมื่อ desalting ซึ่ง
ช่วยให้การตรวจจับของเปปไทด์ฮอร์โมนใน
เลือดมีประสิทธิภาพ เรามีระบบสืบสวน 3 สารละลายบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันสองชนิดของโปรตีนและค่า
วิธีการรวมทั้งความร้อนเกิดและ acid-induced
( / โปรตีนที่ตกตะกอน กับการกำจัดที่มีประสิทธิภาพของโปรตีนสูงมากมาย
ปรับเมทานอล ,ถูกแทงด้วย EDTA และ protease inhibitors ผลิต
การกู้คืนที่ดีที่สุดของนิวโรเปปไทด์จากมาตรฐาน และจากการตรวจสอบของนิวโรเพ็พไทด์
จากตัวอย่างเลือด อ่อนไหว cabtrp IA ( M / Z 934.5 ) คือ
ตรวจพบเป็นเปปไทด์ฮอร์โมนจากเลือดหมุนเวียนในสัตว์อดอยาก สนับสนุน
แนะนำข้อมูล MS / MS , บทบาทศักยภาพของเปปไทด์ใน
ให้อาหารระเบียบเพิ่มเติมหลายนิวโรเพ็พไทด์
ยังตรวจจับจากมวล
ถูกต้องตรงกันกับรายงานก่อนหน้านี้นิวโรเพ็พไทด์ . เรายัง เดอโนโวนี้เป็นเปปไทด์ด้วย
kfamide ซึ่ง , ซึ่งอาจเป็นครอบครัวใหม่ของนิวโรเปปไทด์ ( s )
ที่มีฟังก์ชันยังคงที่จะตัดสินใจ ทั่วไปผลิตภัณฑ์ที่มีอยู่ในเลือด โปรตีนย่อย
ยังระบุด้วยอีกครั้งจัดลำดับ
ช่วยโดยมิ่งขวัญการค้นหาฐานข้อมูลและระเบิด
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- I will have a Avalon
- ผมกลัวเค้าใจผิด
- why did king narai the great move his tr
- คุณควรเดินลงหาฉัน ฉันรอคุณอยู่แล้วที่โรง
- แม่
- this girl, absolutely nowhere..."Next co
- โอ้ที่มีประสิทธิภาพมาก
- กฎหมาย
- พฤติกรรม
- ฉันยืนอยู่ข้างบนฐานซึ่งสูง
- ้how i can get there
- โรงงาน
- พรุ้งนี้
- ได้เข้าร่วมโครงการกับทางมหาวิทยาลัย
- this girl, absolutely nowhere..."Next co
- I will make it as simple as I could
- ถ้าคุณมีเวลาว่างที่จะสอนฉัน
- คุณน่ารักจริงๆ
- yeah but most people speak in informal e
- คุณชอบวิชาอะไรที่สุด
- War. Our study confirms the usefulness a
- และต่อมาในวันที่ 3 ตุลาคม 1990 ก็มีการรว
- ภูเก็ตคือสถานทีท่องเที่ยวในฝันของฉัน
- Osteoporosis is a disease in which the b
