Disulfide formation in newly synthe

Disulfide formation in newly synthesized proteins entering the mammalian endoplasmic reticulum is catalyzed by protein disulfide isomerase (PDI), which is itself thought to be directly oxidized by Ero1α. The activity of Ero1α is tightly regulated by the formation of noncatalytic disulfides, which need to be broken to activate the enzyme. Here, we have developed a novel PDI oxidation assay, which is able to simultaneously determine the redox status of the individual active sites of PDI. We have used this assay to confirm that when PDI is incubated with Ero1α, only one of the active sites of PDI becomes directly oxidized with a slow turnover rate. In contrast, a deregulated mutant of Ero1α was able to oxidize both PDI active sites at an equivalent rate to the wild type enzyme. When the active sites of PDI were mutated to decrease their reduction potential, both were now oxidized by wild type Ero1α with a 12-fold increase in activity. These results demonstrate that the specificity of Ero1α toward the active sites of PDI requires the presence of the regulatory disulfides. In addition, the rate of PDI oxidation is limited by the reduction potential of the PDI active site disulfide. The inability of Ero1α to oxidize PDI efficiently likely reflects the requirement for PDI to act as both an oxidase and an isomerase during the formation of native disulfides in proteins entering the secretory pathway.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ซัลไฟด์เกิดจากโปรตีนที่สังเคราะห์ใหม่ป้อนลัม endoplasmic การเลี้ยงลูกด้วยนมเป็นกระบวน โดยโปรตีนซัลไฟด์ isomerase (PDI), ซึ่งตัวเองเป็นความคิดที่จะออกซิไดซ์โดยตรง โดย Ero1α กิจกรรมของ Ero1α แน่นภายใต้ควบคุมการก่อตัวของ disulfides noncatalytic ซึ่งจำเป็นต้องใช้งานเพื่อเปิดใช้งานการทำงานของเอนไซม์ ที่นี่ เราได้พัฒนานวนิยายพีออกซิเดชันทดสอบ ซึ่งสามารถที่จะพร้อมตรวจสอบสถานะรีดอกซ์ของแต่ละไซต์งานของพีดีไอ เราได้ใช้การทดสอบนี้ยืนยันว่า เมื่อได้รับการกกพีกับ Ero1α เพียงหนึ่งในสถานที่ทำงานของพีดีไอจะตรงออกซิไดซ์กับอัตราการหมุนเวียนช้า ตรงกันข้าม mutant deregulated ของ Ero1α ก็สามารถออกซิไดซ์ทั้งไซต์งานพีดีไอที่มีอัตราเทียบเท่ากับเอนไซม์ชนิดป่า เมื่อใช้งานไซต์ของพีดีไอได้กลายพันธุ์เพื่อลดการลดศักยภาพ ทั้งถูกตอนนี้ออกซิไดซ์ชนิดป่า Ero1α กับการเพิ่มขึ้น 12-fold ในกิจกรรม ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า ความจำเพาะของ Ero1α ต่อการใช้งานเว็บไซต์ของบริษัทฯ ต้องการปรากฏตัวของ disulfides กำกับดูแล นอกจากนี้ อัตราการเกิดออกซิเดชันพีถูกจำกัด โดยการลดศักยภาพของซัลไฟด์ไซต์ใช้งานพีดีไอ ไม่ของ Ero1α เพื่อออกซิไดซ์ PDI ได้อย่างมีประสิทธิภาพมักสะท้อนถึงความต้องการสำหรับบริษัทฯ จะทำหน้าที่เป็นตัว oxidase และ isomerase ในระหว่างการก่อตัวของ disulfides ดั้งเดิมในโปรตีนเข้าสู่ทางเดิน secretory

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การก่อตัวของซัลไฟด์ในโปรตีนสังเคราะห์ใหม่เข้าสู่ endoplasmic reticulum เลี้ยงลูกด้วยนมมีการเร่งปฏิกิริยาด้วยโปรตีนซัลไฟด์ isomerase (PDI) ซึ่งเป็นตัวความคิดที่จะออกซิไดซ์ได้โดยตรงโดยEro1α กิจกรรมของEro1αถูกควบคุมอย่างแน่นหนาโดยการก่อตัวของ disulfides noncatalytic ซึ่งจะต้องมีการเสียเพื่อเปิดใช้เอนไซม์ ที่นี่เราได้มีการพัฒนานวนิยาย PDI ทดสอบการเกิดออกซิเดชันซึ่งสามารถไปพร้อม ๆ กันการตรวจสอบสถานะอกซ์ของเว็บไซต์ที่ใช้งานส่วนบุคคลของ PDI เราได้ใช้การทดสอบนี้เพื่อยืนยันว่าเมื่อ PDI ถูกบ่มกับEro1αเพียงหนึ่งในเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI กลายเป็นออกซิไดซ์โดยตรงกับอัตราการหมุนเวียนช้า ในทางตรงกันข้ามการกลายพันธุ์ของ deregulated Ero1αก็สามารถที่จะออกซิไดซ์ทั้งเว็บไซต์ที่ใช้งาน PDI ในอัตราที่เทียบเท่ากับเอนไซม์ชนิดป่า เมื่อเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI ถูกกลายพันธุ์ที่มีศักยภาพที่จะลดลงลดลงของพวกเขาทั้งสองถูกออกซิไดซ์ในขณะนี้โดยแบ่งตามชนิดป่าEro1αกับการเพิ่มขึ้น 12 เท่าในกิจกรรม ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าความจำเพาะของEro1αไปยังเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI ต้องมีการปรากฏตัวของ disulfides กฎระเบียบ นอกจากนี้อัตราการเกิดออกซิเดชัน PDI ถูก จำกัด ด้วยศักยภาพการลดลงของซัลไฟด์ที่ใช้งานเว็บไซต์ PDI การไร้ความสามารถของEro1αออกซิไดซ์ PDI ได้อย่างมีประสิทธิภาพน่าจะสะท้อนให้เห็นถึงความต้องการสำหรับ PDI จะทำหน้าที่เป็นทั้ง oxidase และ isomerase ในช่วงการก่อตัวของ disulfides พื้นเมืองในโปรตีนเข้าสู่ทางเดินหลั่ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสร้างซัลไฟด์ในสังเคราะห์โปรตีนใหม่เข้า endoplasmic reticulum ) เป็นโปรตีนที่เร่งปฏิกิริยาด้วยไดไอโซเมอเรส ( PDI ) ที่ตัวเองคิดว่าจะถูกออกซิไดซ์โดยตรง ero1 α . กิจกรรมของ ero1 αจะแน่นควบคุมโดยการก่อตัวของ noncatalytic ไดซัลไฟต์ ซึ่งจะต้องถูกหักเพื่อกระตุ้นเอนไซม์ ที่นี่ เราได้พัฒนาวิธีใหม่ PDI ออกซิเดชันซึ่งสามารถที่จะพร้อมกันตรวจสอบ 1 สถานะของแต่ละเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI . เราเคยใช้วิธีนี้เพื่อยืนยันว่า เมื่อแยก ero1 α PDI เป็นเพียงหนึ่งในเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI จะถูกออกซิไดซ์โดยตรงด้วยอัตราการหมุนเวียนช้า ในทางตรงกันข้าม , โดย ero1 กลายพันธุ์αสามารถออกซิไดซ์ทั้งชิ้นใช้งานเว็บไซต์ที่เทียบเท่า ซึ่งเอนไซม์ชนิดป่า เมื่อเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI ก็กลายพันธุ์เพื่อลดศักยภาพการลดของพวกเขา ทั้งยังถูกออกซิไดซ์โดยป่าประเภท ero1 αกับ 12 พับเพิ่มในกิจกรรม ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า ความจำเพาะของα ero1 ไปยังเว็บไซต์ที่ใช้งานของ PDI มีการปรากฏตัวของ ไดซัลไฟต์บังคับ นอกจากนี้ อัตราของ PDI ออกซิเดชันจะถูก จำกัด โดยการลดศักยภาพของ PDI ทีฟไซต์ได . การ ero1 α PDI ในการออกซิไดซ์ได้อย่างมีประสิทธิภาพอาจสะท้อนให้เห็นถึงความต้องการชิ้นเป็นทั้ง oxidase และไอโซเมอเรสในการก่อตัวของ ไดซัลไฟต์พื้นเมืองในโปรตีนเข้าสู่ทางเดินบางๆ .