2.4. Analyses2.4.1. ATPase activity

2.4. Analyses
2.4.1. ATPase activity
Ca2þ-ATPase activity was determined according to the method
of Benjakul, Seymour, Morrissey, and An (1997). Natural actomyosin
(NAM) from the claw of soft shell crab could not be precipitated
using distilled water. As a result, NAM pellet could not be
recovered for further analyses.
NAM from all crab muscles, except from clawmuscle of soft shell
crab, was prepared as described by Benjakul et al. (1997). To
determine Ca2þ-ATPase activity, NAM was diluted to 2.5–6 mg/ml
with 0.6 M KCl, pH 7.0. Diluted NAM solution (1 ml) was added to
0.6 ml of 0.5 M Tris-maleate, pH 7.0. CaCl2 was added to obtain
a final concentration of 10 mM CaCl2 with a total volume of 9.5 ml.
To each assay solution, 0.5 ml of 20 mM ATP was added to initiate
the reaction. The reaction was conducted for 8 min at 25 C and
terminated by adding 5 ml of chilled 15% (w/v) trichloroacetic acid.
The reaction mixture was centrifuged at 3500 g (Hettich Micro
20, Tuttlingen, Germany) for 5 min and the inorganic phosphate
liberated in the supernatant was measured by the method of Fiske
and Subbarow (1925). Specific activity was expressed as mmol
inorganic phosphate released/mg protein/min. A blank solution
was prepared by adding chilled trichloroacetic acid prior to addition
of ATP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การวิเคราะห์
2.4.1 ATPase
กิจกรรมกิจกรรมCa2þ-ATPase ถูกกำหนดตามวิธีการของเบญจกุล, มัวร์มอร์ริสและ (1997)
actomyosin ธรรมชาติ
(NAM)
จากกรงเล็บของปูนิ่มไม่สามารถเร่งให้เกิดการใช้น้ำกลั่น เป็นผลให้เม็ด NAM
ไม่สามารถกู้คืนสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป.
NAM จากกล้ามเนื้อปูยกเว้นจาก clawmuscle
ของนิ่มปูถูกจัดทำขึ้นตามที่อธิบายเบญจกุล, et al (1997) เพื่อตรวจสอบกิจกรรมCa2þ-ATPase, NAM ถูกลดลงเหลือ 2.5-6 mg / ml กับ 0.6 M KCl ค่า pH 7.0 ปรับลดการแก้ปัญหาน้ำ (1 มล.) ถูกบันทึกอยู่ใน0.6 มล. 0.5 M Tris-maleate ค่า pH 7.0 CaCl2 ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ10 มิลลิ CaCl2 ที่มีปริมาตรรวม 9.5 มล. การแก้ปัญหาการทดสอบแต่ละ 0.5 มล. 20 มิลลิเอทีพีถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อเริ่มต้นการเกิดปฏิกิริยา ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการเป็นเวลา 8 นาทีที่ 25 องศาเซลเซียสและสิ้นสุดลงโดยการเพิ่ม5 มิลลิลิตรแช่เย็น 15% (w / v) กรดไตรคลอโร. ผสมปฏิกิริยาถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3500? g (Hettich Micro 20 Tuttlingen, เยอรมนี) เป็นเวลา 5 นาที และฟอสเฟตนินทรีย์ที่มีอิสรเสรีในสารละลายที่ถูกวัดโดยวิธีการฟิสกี้และSubbarow (1925) กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงได้รับการแสดงเป็นมิลลิโมลฟอสเฟตนินทรีย์ที่ปล่อยออกมา / มก. โปรตีน / นาที ทางออกที่ว่างเปล่าถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่มกรดไตรคลอโรแช่เย็นก่อนนอกจากนี้ของเอทีพี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . วิเคราะห์
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . แคลเซียม ATPase กิจกรรม
þ - กิจกรรม ATPase ถูกกำหนดตามวิธีการ
ของกูล เซย์สีย์ , และการ ( 1997 )
ล้ธรรมชาติ ( น้ำ ) จากกรงเล็บของปูนิ่มจะไม่ตกตะกอน
ใช้น้ำกลั่น ผลคือ น้ำ เม็ด ไม่สามารถกู้คืนสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป
.
น้ำจากเนื้อปูทั้งหมด ยกเว้น clawmuscle ของปูนิ่ม
นุ่มได้เตรียม ตามที่อธิบายไว้โดยเฉพาะ et al . ( 1997 )

หาแคลเซียมþ - กิจกรรม ATPase , น้ำเจือจาง 2.5 – 6 มก. / มล.
กับ 0.6 M KCl , pH 7.0 . น้ำสารละลายเจือจาง ( 1 มล. ) เพิ่ม 0.6 มิลลิลิตร

0.5 m บริษัทมาลีเ , pH 7.0 . ผลิตเพิ่มเพื่อให้ได้
สุดท้าย ความเข้มข้นของสารละลาย CaCl2 10 มม. มีปริมาณ 9.5 มล.
แต่ละในสารละลาย 0.5 ml ATP 20 มิลลิเมตร เพิ่มเริ่ม
ปฏิกิริยาปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการสำหรับ 8 นาทีที่ 25  C
ยกเลิกโดยการเพิ่ม 5 ml แช่เย็น 15 % ( w / v ) กรดไตรคลอโรอะซิติก .
ปฏิกิริยาผสมไฟฟ้าที่ 3500  G ( Hettich ไมโคร
20 , Tuttlingen , เยอรมนี ) เป็นเวลา 5 นาที และอนินทรีย์ฟอสเฟต
อิสระในการวัดสูงโดยวิธีการและฟิกซ์
subbarow ( 1925 ) กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงจะแสดงเป็น mmol
ฟอสเฟตอนินทรีย์ออก / mg protein / มินโซลูชั่นว่าง
เตรียมเพิ่มสินค้ากรดไตรคลอโรอะซิติกก่อนนอกจากนี้
ATP .