2.3. SSR-PCR amplification and dete

2.3. SSR-PCR amplification and detection
The PCR reaction mixtures contained 10 mM Tris–HCl (pH 8.3), 50 mM KCl, 50 ng genomic DNA, 10 pmol of each primer, 1.5 mM MgCl2, 0.2 mM of each dNTP, and 0.5 units of Taq DNA polymerase (Takara Bio Inc.). Amplification was performed in 20 μL volumes using Eppendorf Mastercycler (Eppendorf Scientific, Inc.) with an initial denaturation at 94 °C for 150 s followed by 34 cycles of 30 s at 94 °C, 30 s at the specific annealing temperature, 30 s at 72 °C and a final extension step of 10 min at 72 °C. Primers used in PCR were developed for the genus Cymbidium previously ( Huang et al., 2010) (Table 2). The PCR products were separated on 6% denaturing polyacrylamide gels and analyzed using the silver staining procedure (Brant et al., 1991).
Table 2.
Detailed information of the 13 EST-SSR markers used in analysis of genetic diversity of spring orchid

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. สาธารณรัฐสังคมนิยมโซเวียตปลักและตรวจจับส่วนผสมของปฏิกิริยา PCR อยู่ 10 มม.ทริ – HCl (ค่า pH 8.3), 50 มม. KCl ดีเอ็นเอการฉบับที่ 50, 10 pmol รองพื้นแต่ละ 1.5 มม. MgCl2, dNTP แต่ละ 0.2 mM และหน่วย 0.5 ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (Takara ชีวภาพ Inc.) ขยายทำในปริมาณ μL 20 ใช้ Eppendorf Mastercycler (Eppendorf วิทยาศาสตร์ Inc.) กับ denaturation เป็นเริ่มต้นที่ 94 ° C สำหรับ 150 s ตาม ด้วยรอบ 34 30 s ที่ 94 ° C, 30 s ที่อุณหภูมิหลอมเฉพาะ 30 s 72 ° C และขั้นสุดท้ายส่วนขยายของ 10 นาทีที่อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส ไพรเมอร์ที่ใช้ใน PCR ได้มีพัฒนาพืชกำจัด Cymbidium ก่อนหน้า (Huang et al. 2010) (ตารางที่ 2) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกจากกันใน 6% denaturing polyacrylamide gels และวิเคราะห์โดยใช้กระบวนการ (Brant et al. 1991) การย้อมสีเงินตารางที่ 2ข้อมูลรายละเอียดของหมาย 13 EST ยังคงใช้ในการวิเคราะห์ของความหลากหลายทางพันธุกรรมของกล้วยไม้ฤดูใบไม้ผลิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 SSR-PCR การขยายและการตรวจสอบ
PCR ผสมปฏิกิริยาที่มีขนาด 10 MM Tris-HCl (pH 8.3) ขนาด 50 มม KCl 50 ng ดีเอ็นเอ 10 pmol ของแต่ละไพรเมอร์ 1.5 มิลลิ MgCl2 0.2 มิลลิเมตรแต่ละ dNTP และ 0.5 หน่วย Taq DNA Polymerase (Takara Bio อิงค์) ขยายได้ดำเนินการใน 20 เล่มไมโครลิตรใช้ Eppendorf Mastercycler (Eppendorf วิทยาศาสตร์, Inc) กับ denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 150 วินาทีตามด้วย 34 รอบของ 30 วินาทีที่ 94 ° C, 30 วินาทีที่อุณหภูมิการหลอมเฉพาะ 30 วินาที ที่ 72 องศาเซลเซียสและเป็นขั้นตอนสุดท้ายของการขยายเวลา 10 นาทีที่ 72 ° C ไพรเมอร์ที่ใช้ใน PCR ได้รับการพัฒนาสำหรับสกุล Cymbidium ก่อนหน้านี้ (Huang et al., 2010) (ตารางที่ 2) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกบน denaturing 6% เจลอะคริเลตและวิเคราะห์โดยใช้ขั้นตอนการย้อมสีเงิน (ตัวผู้ et al., 1991).
ตารางที่ 2
รายละเอียดข้อมูลของเครื่องหมาย 13 EST-SSR ใช้ในการวิเคราะห์ความหลากหลายทางพันธุกรรมของฤดูใบไม้ผลิดอกกล้วยไม้