A strain of T. maritimum (89/4762)

A strain of T. maritimum (89/4762) isolated from diseased Atlantic salmon was grown in an aerated 10-l carboy using Shieh's medium formulated with filtered (0.22 μm), sterilised natural seawater (35 ppt). The medium was heat sterilised at 121 °C for 40 min to achieve adequate heat penetration in the volume of medium. The bacteria were grown in 5-l of broth at room temperature (20 °C) with aeration (120 l/h) and harvested after 48 h incubation. Cell con- centration reached a mean of 1.27 × 109 cells/ml as determined by direct counts using a Helber counting chamber. The bacteria were inactivated by the addition of formalin (37–38% w/w formaldehyde) to a final concentration of 5 ml/l. After 48 h refrigeration, the cells were collected by centrifugation at 3000 ×g for 30 min and washed three times using phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4). Cells were resuspended in PBS to a final concentration of 1.08 × 1010 cells/ml and formalin (37–38% w/w formaldehyde) added to a final concentration of 0.1% v/v as a preservative. A vaccine preparation containing Freund's incomplete adjuvant (FIA) (Sigma) was also prepared. The adjuvant was mixed 50:50 with the vaccine suspension just prior to use. A 2 ml syringe with a 23 gauge needle was used to aspirate the preparation until a stable emulsion had been formed. Both vaccine preparations used for this study contained approximately 1.79 × 109 cells/0.1 ml inoculum.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้ของต. maritimum (89/4762) แยกต่างหากจากปลาแซลมอนแอตแลนติกเส้นถูกปลูกในการ aerated 10 l carboy ใช้สื่อของ Shieh สูตรพร้อมกรอง (0.22 μm), sterilised ทะเลธรรมชาติ (35 ppt) สื่อที่ถูกความร้อน sterilised ที่ 121 ° C สำหรับ 40 นาทีให้เจาะความร้อนเพียงพอในระดับปานกลาง แบคทีเรียถูกปลูกใน 5 l ของซุปที่อุณหภูมิห้อง (20 ° C) กับ aeration (120 l/h) และเก็บเกี่ยวผลผลิตหลังจากฟักตัว 48 h เซลล์คอน centration ถึงค่าเฉลี่ยของ 1.27 × 109 เซลล์/มล.ตรวจนับโดยตรงโดยใช้ Helber นับหอการค้า แบคทีเรียถูกยกเลิก โดยการเพิ่ม formalin (37-38% w/w ฟอร์มาลดีไฮด์) กับความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 ml/l หลังจากแช่แข็ง 48 h เซลล์ถูกรวบรวม โดย centrifugation ที่ 3000 × g ใน 30 นาที และล้าง 3 ครั้งใช้ฟอสเฟต buffered (PBS ค่า pH 7.4) น้ำเกลือ เซลล์ที่ถูก resuspended ใน PBS จะเข้มข้นสุดท้าย× 1010 เซลล์/มล.และ formalin (37-38% w/w ฟอร์มาลดีไฮด์) เพิ่มเข้มข้นสุดท้ายของ 0.1% v/v เป็น preservative เป็น 1.08 กก นอกจากนี้ยังมีเตรียมการเตรียมวัคซีนที่ประกอบด้วยการประเมินไม่สมบูรณ์ของ Freund (FIA) (ซิกมา) การประเมินที่ผสมคนละครึ่งกับการระงับวัคซีนก่อนใช้ เข็ม 2 ml กับเข็มวัด 23 ที่ใช้ aspirate เตรียมการจนกระทั่งมีการเกิดอิมัลชันมีเสถียรภาพ ทั้งเตรียมวัคซีนที่ใช้ในการศึกษานี้มีอยู่ประมาณ 1.79 × 109 เซลล์/0.1 ml inoculum

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความเครียดจาก T. maritimum (89/4762) ที่แยกได้จากปลาแซลมอนแอตแลนติกที่เป็นโรคถูกปลูกในน้ำอัดลมขวดใส่กรด 10 ลิตรโดยใช้สื่อ Shieh ของสูตรที่มีการกรอง (0.22 ไมครอน), ฆ่าเชื้อน้ำทะเลธรรมชาติ (35 พีพีที) กลางความร้อนได้รับการฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาทีเพื่อให้บรรลุการเจาะความร้อนที่เพียงพอในปริมาณปานกลาง แบคทีเรียที่ถูกปลูกใน 5 ลิตรของน้ำซุปที่อุณหภูมิห้อง (20 ° C) ที่มีการเติมอากาศ (120 ลิตร / ชั่วโมง) และเก็บเกี่ยวหลังจากบ่ม 48 ชั่วโมง เซลล์ centration con- ถึงค่าเฉลี่ย 1.27 × 109 เซลล์ / มล. ตามที่กำหนดโดยนับโดยตรงโดยใช้ Helber นับห้อง แบคทีเรียที่ถูกยกเลิกโดยนอกเหนือจากฟอร์มาล​​ิน (37-38% w / W ฟอร์มาล​​ดีไฮด์) จะมีความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 มิลลิลิตร / ลิตร หลังจาก 48 ชั่วโมงเครื่องทำความเย็น, เซลล์ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 3000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีและล้างสามครั้งโดยใช้ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอสพีเอช 7.4) เซลล์ที่ถูก resuspended ในพีบีเอสจะมีความเข้มข้นสุดท้ายของ 1.08 × 1,010 เซลล์ / มล. และฟอร์มาล​​ิน (37-38% w / W ฟอร์มาล​​ดีไฮด์) เข้ามาอยู่ในความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.1% v / v เป็นสารกันบูด เตรียมวัคซีนที่มีเสริมที่ไม่สมบูรณ์ของ Freund (FIA) (Sigma) นอกจากนี้ยังได้จัดทำขึ้น เสริมผสม 50:50 พร้อมระบบกันสะเทือนวัคซีนเพียงแค่ก่อนที่จะใช้ เข็มฉีดยามล 2 ด้วยเข็มวัด 23 ถูกใช้ในการดูดเตรียมจนกว่าอิมัลชันที่มีเสถียรภาพได้มีการก่อตั้ง การเตรียมการทั้งวัคซีนที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีอยู่ประมาณ 1.79 × 109 เซลล์ / 0.1 มลเชื้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สายพันธุ์ของ maritimum ( 89 / ยังไม่มี ) ที่แยกจากโรคปลาแซลมอนแอตแลนติก ปลูกในบ่อ 10-l ขวดใส่กรดโดยใช้ shieh ปานกลางสูตรกรอง ( 0.22 μ M ) sterilised น้ำทะเลธรรมชาติ ( 35 ppt ) กลางคือความร้อนที่ 121 ° C sterilised 40 นาทีเพื่อให้บรรลุส่งผ่านความร้อนเพียงพอใน ปริมาณปานกลางแบคทีเรียที่เติบโตในอาหารเหลวของน้ำที่อุณหภูมิห้อง ( 20 ° C ) กับอากาศ ( 120 ลิตร / ชั่วโมง ) และเก็บเกี่ยวหลังจาก 48 ชั่วโมงการบ่ม เซลล์คอน - centration ถึงหมายถึง 1.27 × 109 เซลล์ / มิลลิลิตร ตามที่กำหนดโดยนับโดยตรงโดยใช้ helber นับห้อง . แบคทีเรียถูกยับยั้งโดยการเพิ่มของฟอร์มาลิน ( 37 - 38 % w / w ฟอร์มาลดีไฮด์ ) ความเข้มข้นสุดท้าย 5 มล. / ล. หลังจาก 48 ชั่วโมงแช่แข็งเซลล์มีจำนวน 3 ที่ 3000 × G สำหรับ 30 นาทีและล้าง 3 ครั้ง โดยใช้เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS pH 7.4 ) เซลล์มี resuspended ใน PBS เพื่อความเข้มข้นสุดท้าย 1.08 × 1010 เซลล์ / มิลลิลิตรและฟอร์มาลิน ( 37 - 38 % w / w ฟอร์มาลดีไฮด์ ) เพิ่มสุดท้ายความเข้มข้น 0.1 % v / v เป็นสารกันบูด .วัคซีนการเตรียมที่มีไม่สมบูรณ์ ฟรันท์ ( FIA ) ( Sigma ) ถูกเตรียมไว้ เสริมผสม 50 : 50 กับวัคซีนช่วงล่างเพียงก่อนที่จะใช้ เข็มฉีดยา 2 เข็มมาตรวัด 23 ml พร้อมใช้ หรือ การเตรียมอิมัลชันที่มีเสถียรภาพ จนกระทั่งได้รับการก่อตั้งขึ้น ทั้งการเตรียมวัคซีนที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ประกอบด้วยประมาณ 1.79 × 109 เซลล์ / 0.1 มล. 3 .