Pathogen free-seed of P. radiata fr

Pathogen free-seed of P. radiata from New Zealand was used both in seed contamination and artificial inoculation assays. Seeds were surface disinfested by immersion and shaking in: (1) 10% commercial bleach plus 0.1% Tween 20 for 15 min; (2) purified water (RIOs Type 3 RO, Millipore, Madrid, Spain) for 5 min, twice; (3) hydrogen peroxide 33% for 10 min; (4) sterile distilled water for 10 min, three times; and (5) dried in an air flow cabinet for 2 h.
Fusarium circinatum (CECT20759) was isolated from a P. radiata seedling in Guipuzkoa, Spain. This isolate was identified to be in vegetative compatibility group (VCG) A and Mating type 2 (Mat-2), the only mating type present in the Basque Country [25]. This isolate is stored on small pieces of sterile filter paper (Whatman no.1) at −20 °C. For inoculation purposes, it was cultured for 10 days at 22 °C on Potato Dextrose Agar (PDA) (Pronadisa, Madrid, Spain). The inoculum suspension was prepared by adding 10 mL of sterile purified water on the surface of a PDA plate where F. circinatum has grown for about 10 days at 22 °C, scraping with a spatula, and then filtering with glass wool washed (Panreac Química, Barcelona, Spain). The spore concentration was determined using a haemocytometer and the suspension diluted to the desired concentration with sterile purified water. Inoculation was done by immersion and shaking at 150 rpm for 5 min in a spore suspension of F. circinatum. Seeds inoculated with water were used as control. Inoculated seeds were dried for 2 h in an air flow cabinet.
The viability of the inoculum was determined by plating dilution series onto PDA plates. The inoculum actually present in the seed after inoculation was estimated by grinding individually inoculated seeds (at various dose) in 1 mL sterile distilled water and plating on PDA plates. Also, when this estimate was below the detection limit, presence of inoculum was visualized growing the seeds on SFA (Selective Fusarium Agar) [26] plates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การศึกษาฟรีเมล็ดของ P. radiata จากนิวซีแลนด์มีใช้ ทั้งเมล็ดปนและ assays inoculation ประดิษฐ์ เมล็ดมีผิว disinfested โดยแช่ และเขย่าใน: ฟอกสี (1) 10% พาณิชย์บวก 0.1% Tween 20 สำหรับ 15 นาที (2) น้ำ (ริออสชนิด 3 RO มาก มาดริด สเปน) สำหรับ 5 นาที สอง (3) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 33% สำหรับ 10 นาที (4) กอซกลั่นน้ำ 10 นาที 3 ครั้ง และ (5) แห้งในตู้การไหลอากาศ 2 hFusarium circinatum (CECT20759) ถูกแยกต่างหากจากแหล่ง P. radiata ใน Guipuzkoa ประเทศสเปน แยกนี้ระบุอยู่ในกลุ่มผักเรื้อรังกันชนิด A (VCG) และ Mating 2 (2 แผ่น) ผสมพันธุ์เฉพาะพิมพ์ในประเทศบาสก์ [25] แยกนี้อยู่บนชิ้นเล็ก ๆ ใส่กระดาษกรอง (Whatman no.1) ที่ −20 องศาเซลเซียส ประสงค์ inoculation นั้นมีอ่างสำหรับ 10 วันที่ 22 ° C ในมันฝรั่งขึ้น Agar (PDA) (Pronadisa มาดริด สเปน) การระงับ inoculum ถูกเตรียม โดยการเพิ่ม 10 mL ใส่น้ำบนพื้นผิวของจาน PDA ที่ F. circinatum ได้เติบโตขึ้นประมาณ 10 วันที่ 22 ° C, scraping กับการพาย และจากนั้น กรอง ด้วยเส้นใยแก้วล้าง (Panreac Química บาร์เซโลนา สเปน) ความเข้มข้นของสปอร์ได้กำหนดใช้แบบ haemocytometer และระงับการทำให้เจือจางให้ความเข้มข้นต้องมีกระบอกน้ำ ทำ inoculation แช่และเขย่าที่ 150 rpm สำหรับ 5 นาทีในระบบกันสะเทือนแบบสปอร์ของ circinatum เอฟ Inoculated น้ำเมล็ดถูกใช้เป็นตัวควบคุม เมล็ด inoculated ไม่แห้งสำหรับ h 2 ในกระแสอากาศตู้ชีวิตของ inoculum ถูกกำหนด โดยชุบชุดเจือจางลงแผ่น PDA Inoculum จริงอยู่ในเมล็ดหลังจาก inoculation ถูกประเมิน โดยการบดเมล็ดพืชแต่ละ inoculated (ที่ปริมาณรังสีต่าง ๆ) ใน 1 mL ใส่กลั่นน้ำและชุบบนแผ่น PDA นอกจากนี้ เมื่อประเมินนี้ขีดจำกัดการตรวจสอบ ของ inoculum ถูก visualized เติบโตเมล็ดบน SFA (Selective Fusarium Agar) [26] แผ่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เชื้อโรคฟรีเมล็ดพี radiata จากนิวซีแลนด์ถูกนำมาใช้ทั้งในการปนเปื้อนของเมล็ดและการตรวจเชื้อเทียม เมล็ด disinfested พื้นผิวโดยการแช่และสั่นใน (1) 10% สารฟอกขาวในเชิงพาณิชย์บวก 0.1% Tween 20 สำหรับ 15 นาที; (2) น้ำบริสุทธิ์ (RiOS 3 ประเภท RO, ค, มาดริด, สเปน) เป็นเวลา 5 นาทีอีกสองครั้งแล้ว (3) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 33% เป็นเวลา 10 นาที; (4) น้ำกลั่นปลอดเชื้อเป็นเวลา 10 นาทีสามครั้ง; และ (5) การอบแห้งในตู้ไหลของอากาศเป็นเวลา 2 ชั่วโมง.
Fusarium circinatum (CECT20759) ที่แยกได้จากต้นกล้าพี radiata ใน Guipuzkoa, สเปน แยกนี้ถูกระบุว่าจะอยู่ในกลุ่มความเข้ากันได้ของพืช (VCG) และประเภทผสมพันธุ์ 2 (จ้า-2) ชนิดผสมพันธุ์เพียงอยู่ในบาสก์ประเทศ [25] แยกนี้ถูกเก็บไว้ในชิ้นเล็ก ๆ ของกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อ (เบอร์ 1) ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส เพื่อวัตถุประสงค์ในการฉีดวัคซีนก็คือการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 10 วันวันที่ 22 ° C ในมันฝรั่ง Dextrose Agar (PDA) (Pronadisa, มาดริด, สเปน) ระงับเชื้อถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 10 มิลลิลิตรของน้ำบริสุทธิ์ผ่านการฆ่าเชื้อบนพื้นผิวของแผ่นพีดีเอที่เอฟ circinatum มีการเติบโตประมาณ 10 วันวันที่ 22 ° C ที่ขูดด้วยไม้พายและจากนั้นกรองด้วยใยแก้วล้าง (Panreac Química บาร์เซโลนา, สเปน) ความเข้มข้นของสปอร์ที่ถูกกำหนดโดยใช้สไลด์นับเม็ดเลือดและระงับเจือจางความเข้มข้นที่ต้องการด้วยน้ำบริสุทธิ์ผ่านการฆ่าเชื้อ การฉีดวัคซีนที่ได้กระทำโดยการแช่และเขย่าที่ 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีในการระงับการสร้างสปอร์ของเอฟ circinatum เมล็ดเชื้อด้วยน้ำถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม เชื้อเมล็ดแห้งเป็นเวลา 2 ชั่วโมงในตู้ไหลของอากาศ.
ศักยภาพของเชื้อที่ถูกกำหนดโดยการชุบชุดเจือจางลงบนแผ่นพีดีเอ เชื้อจริงในปัจจุบันเมล็ดพันธุ์หลังจากการฉีดวัคซีนเป็นที่คาดกันโดยการบดเมล็ดเชื้อเป็นรายบุคคล (ในขนาดต่างๆ) ใน 1 มิลลิลิตรน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและชุบบนจานพีดีเอ นอกจากนี้เมื่อประมาณนี้อยู่ต่ำกว่าขีด จำกัด ของการตรวจสอบการปรากฏตัวของเชื้อได้รับการมองเห็นการเจริญเติบโตของเมล็ดใน SFA (Selective Fusarium วุ้น) [26] แผ่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เชื้อโรคฟรีเมล็ดพี radiata จากนิวซีแลนด์ถูกใช้ทั้งในการปนเปื้อนเชื้อ และใช้เมล็ดเทียม เมล็ดผิว disinfested โดยการแช่และสั่นใน ( 1 ) 10% บวก 0.1% Tween 20 พาณิชย์ Bleach 15 นาที ( 2 ) น้ำบริสุทธิ์ ( ออส ชนิด 3 รู มิลลิ , มาดริด , สเปน ) เป็นเวลา 5 นาที สองครั้ง ( 3 ) ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ร้อยละ 33 สำหรับ 10 นาที ; ( 4 ) ปลอดเชื้อ น้ำกลั่นสำหรับ 10 นาทีสามครั้ง และ ( 5 ) การไหลของอากาศอบแห้งในตู้ 2 H .
Fusarium circinatum ( cect20759 ) ที่แยกได้จากพี radiata ต้นกล้าใน guipuzkoa , สเปน นี้สามารถถูกระบุอยู่ในกลุ่มพืชที่เข้ากันได้ ( vcg ) และประเภทคู่ 2 ( mat-2 ) เฉพาะประเภทคู่ ปัจจุบันในประเทศ Basque [ 25 ] นี้สามารถถูกเก็บไว้ในชิ้นเล็ก ๆของกระดาษกรอง ฆ่าเชื้อ ( whatman ไม่( 1 ) − 20 องศา เพื่อวัตถุประสงค์การปลูกมันเลี้ยง 10 วันที่ 22 ° C ในอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) ( pronadisa , มาดริด , สเปน ) ระงับเชื้อได้เพิ่ม 10 มล. ของน้ำบริสุทธิ์ปราศจากเชื้อบนพื้นผิวของ PDA ที่ F . circinatum จานโตประมาณ 10 วันที่ 22 ° C , ขูดด้วยไม้พาย จากนั้นกรองด้วยขนสัตว์แก้วล้าง ( panreac คูเมืองแก้ว , บาร์เซโลนาสเปน ) การสร้างสปอร์ความเข้มข้นตั้งใจใช้ haemocytometer และช่วงล่างเจือจางความเข้มข้นด้วยบริสุทธิ์ที่ต้องการฆ่าเชื้อในน้ำ ที่ได้รับการทำโดยการแช่และสั่นที่ความเร็ว 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีในสปอร์ระงับ F . circinatum . เมล็ดพันธุ์ที่ปลูกด้วยน้ำที่ใช้ควบคุม ปลูกเมล็ดแห้ง 2 ชั่วโมงในการไหลของอากาศ
ตู้ .ความมีชีวิตของเชื้อถูกกำหนดโดยการชุบลงบน PDA ชุดจาน เชื้อจริง ๆ อยู่ในเมล็ดพันธุ์หลังจากการประมาณโดยการปลูกจากเมล็ด ( ที่ขนาดต่าง ๆ ) ใน 1 ml เป็นหมันน้ำกลั่นและชุบบน PDA แผ่น นอกจากนี้ เมื่อประมาณนี้คือด้านล่างตรวจสอบวงเงินตนได้มองเห็นการเติบโตของปริมาณเมล็ดใน SFA ( selective Fusarium วุ้น ) [ 26 ] แผ่น