Phylogenetic analysis: In vitro amp

Phylogenetic analysis: In vitro amplification of 16S rRNA
and direct sequencing of the amplified DNA fragments were
performed (KUSUKAWA et ai., 1990). Complete 16S rRNA sequences
were determined and compared with 165 rRNA sequences
in the NCBI database (ALTSCHUL et ai., 1990). Analyses
were performed using MacVector software (IBI, New Haven,
CT). Distance matrix trees were reconstructed using the neighbor-joining
method of SAITOU and NEI (1987) and software
from the PHYLIP package (FELSENSTEIN, 1993).
Gelatin non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis:
Extracellular proteases in the culture supernatant were characterized
by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE), without
SDS, in slab gels containing 1 % gelatin as a copolymerized substrate
(SARATH et ai., 1989). PAGE was carried out at 4°C for
one hour at 150 volts. Following electrophoresis, gels were incubated
in O.lM glycine buffer at pH 9.0 for one hour at 37°C.
Protease activity was recorded as positive when a visible zone of
clearing was noted after the gel was stained with 0.1%
Coomassie blue in 10% acetic acid, followed by destaining in
10% acetic acid.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ phylogenetic: ขยายการเพาะเลี้ยงของ 16S rRNAและจัดลำดับโดยตรงของชิ้นส่วนดีเอ็นเอเอาต์ดำเนินการ (KUSUKAWA et ai. 1990) สมบูรณ์ลำดับ 16S rRNAระบุ และเปรียบเทียบกับลำดับ rRNA 165ในฐานข้อมูล NCBI (ALTSCHUL et ai. 1990) วิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ MacVector (กรรมาธิการ นิวเฮCT) จากเมทริกซ์ต้นไม้ถูกเชิดใช้เพื่อนบ้านรวมวิธี SAITOU NEI (1987) และซอฟต์แวร์จากแพคเกจ PHYLIP (FELSENSTEIN, 1993)ตุ๋น denaturing ไม่เจล polyacrylamide electrophoresis:Extracellular proteases ใน supernatant มีลักษณะโดย polyacrylamide เจ electrophoresis (หน้า), ไม่มีSDS ในพื้นเจประกอบด้วยตุ๋น 1% เป็นพื้นผิว copolymerized(SARATH et ai. 1989) หน้าได้รับการดำเนินที่ 4° C สำหรับหนึ่งชั่วโมงที่ 150 โวลต์ ต่อ electrophoresis เจมี incubatedใน O.lM glycine บัฟเฟอร์ที่ pH 9.0 สำหรับหนึ่งชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียสบันทึกกิจกรรมรติเอสเป็นบวกเมื่อโซนมองเห็นได้ของหักบัญชีถูกบันทึกหลังจากที่เจมีสี ด้วย 0.1%บลู Coomassie ในกรดอะซิติก 10% ตาม destaining ในกรดอะซิติก 10%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์วิวัฒนาการในการขยายการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของ 16S rRNA
และหาลำดับเบสของดีเอ็นเอขยายถูก
ดำเนินการ (. KUSUKAWA และไอ 1990) สมบูรณ์ 16S rRNA ลำดับ
ได้รับการพิจารณาและเมื่อเทียบกับ 165 ลำดับ rRNA
ในฐานข้อมูล NCBI (ALTSCHUL และไอ., 1990) การวิเคราะห์
ถูกดำเนินการโดยใช้ซอฟแวร์ MacVector (IBI, นิวเฮเวน
CT) ต้นไม้เมทริกซ์ระยะทางที่ถูกสร้างขึ้นใหม่โดยใช้เพื่อนบ้านเข้าสู่
วิธีการ Saitou และเขตปกครองตนเอง (1987) และซอฟต์แวร์
จากแพคเกจ PHYLIP (Felsenstein, 1993).
เจลาตินที่ไม่ denaturing ใช้ polyacrylamide gel electrophoresis:
โปรตีเอส Extracellular ในสารละลายวัฒนธรรมมีลักษณะ
โดยใช้ polyacrylamide gel electrophoresis (หน้า) โดยไม่ต้อง
SDS ในเจลที่มีส่วนผสมของเจลาตินแผ่น 1% เป็นสารตั้งต้น copolymerized
(Sarath และไอ., 1989) หน้าได้ดำเนินการที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
หนึ่งชั่วโมงที่ 150 โวลต์ ต่อไปนี้ electrophoresis เจลถูกบ่ม
ในบัฟเฟอร์ไกลซีน O.lM ที่ 9.0 ค่าความเป็นกรดเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C.
กิจกรรมโปรติเอสได้รับการบันทึกเป็นบวกเมื่อโซนที่มองเห็นของ
สำนักหักบัญชีได้รับการตั้งข้อสังเกตหลังจากที่เจลที่ถูกย้อมด้วย 0.1%
Coomassie สีฟ้าใน 10% กรดอะซิติกตาม destaining ใน
10% กรดอะซิติก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ phylogenetic : ในหลอดทดลองแบบลำดับเบส 16S rRNA
ตรงของแถบดีเอ็นเอและชิ้นส่วนถูก
) ( kusukawa และ AI . , 1990 ) สมบูรณ์ลำดับเบส 16S rRNA
คำนวณเทียบกับ 165 rRNA ลำดับ
ใน ncbi ฐานข้อมูล ( แอลเชิลและ AI . , 1990 ) การวิเคราะห์การใช้ซอฟต์แวร์ macvector
( มีนัย ใหม่ยัง
CT )เมตริกซ์ระยะทางถูกสร้างขึ้นโดยใช้ต้นไม้เพื่อนบ้านร่วม
วิธีของไซโตะกับเนย ( 1987 ) และซอฟต์แวร์
จาก phylip แพคเกจ ( felsenstein , 1993 ) .
เจลาตินโนนี่ polyacrylamide gel electrophoresis พบว่า คุณค่าทางอาหารในวัฒนธรรม :

น่านมีลักษณะโดย polyacrylamide gel electrophoresis ( หน้า ) โดยไม่
SDS ,ในแผ่นเจลที่ประกอบด้วย 1% เจลาตินเป็น copolymerized (
( ซารัท และ AI , 1989 ) หน้าดําเนินที่ 4 ° C
1 ชั่วโมง 150 โวลต์ ดังต่อไปนี้ electrophoresis , เจลถูกบ่ม
ใน o.lm ที่มีบัฟเฟอร์พีเอช 9.0 เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง 37 ° C .
protease activity ได้ถูกบันทึกไว้เป็นบวกเมื่อโซนที่มองเห็นของ
ล้างเป็นข้อสังเกตหลังจากเจลเปื้อน 0.1 %
เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า 10% กรดตามด้วย destaining ใน
10% กรดอะซิติก