The presence of influenza A virus c

The presence of influenza A virus can be confirmed in AGID tests by demonstrating the presence of
the nucleocapsid or matrix antigens, both of which are common to all influenza A viruses (see Section
B.3.1). The antigens may be prepared by concentrating the virus from infective allantoic fluid or
extracting the infected chorioallantoic membranes; these are tested against known positive antisera.
Virus may be concentrated from infective allantoic fluid by ultracentrifugation, or by precipitation under
acid conditions. The latter method consists of the addition of 1.0 M HCl to infective allantoic fluid until it
is approximately pH 4.0. The mixture is placed in an ice bath for 1 hour and then clarified by
centrifugation at 1000 g at 4°C. The supernatant fluid is discarded. The virus concentrates are
resuspended in glycin/sarcosyl buffer: this consists of 1% (w/v) sodium lauroyl sarcosinate buffered to
pH 9.0 with 0.5 M glycine. These concentrates contain both nucleocapsid and matrix polypeptides.
Preparations of nucleocapsid-rich antigen can also be obtained from chorioallantoic membranes for
use in the AGID test (Beard, 1970). This method involves removal of the chorioallantoic membranes
from infected eggs that have allantoic fluids with HA activity. The membranes are then homogenised or
ground to a paste. This is subjected to three freeze–thaw cycles, followed by centrifugation at 1000 g
for 10 minutes. The pellet is discarded and the supernatant is used as an antigen following treatment
with 0.1% formalin.
Use of the AGID test to demonstrate nucleocapsid or matrix antigens is a satisfactory way to indicate
the presence of influenza A virus in amnioallantoic fluid, but various experimental and commercial
rapid, solid-phase antigen-capture ELISAs (AC-ELISAs) are an effective alternative (Swayne et al.,
2013). Most AC-ELISAs have been licensed and marketed to detect human influenza A virus in clinical
specimens. Some have demonstrated effectiveness for detection of influenza A, but many of these
commercial tests have had low sensitivity (Woolcock & Cardona, 2005). Those validated for veterinary
use are preferred.
Any HA activity of sterile fluids harvested from the inoculated eggs is most likely to be caused by an
influenza A virus or an avian paramyxovirus, but a few strains of avian reovirus, as well as nonsterile
fluid containing HA of bacterial origin can cause the agglutination of RBCs. There are currently
12 recognised serotypes of avian paramyxoviruses (Miller et al., 2010). Most laboratories will have
antiserum specific to Newcastle disease virus (avian paramyxovirus type 1), and in view of its
widespread occurrence and almost universal use as a live vaccine in poultry, it is best to evaluate its
presence by haemagglutination inhibition (HI) tests (see Chapter 2.3.14 Newcastle disease).
Alternatively, the presence of influenza virus can be confirmed by the use of RT-PCR or real-time RTPCR
using nucleoprotein-specific or matrix-specific conserved primers (Altmuller et al., 1991;
Spackman et al., 2002). Also, the presence of subtype H5 or H7 influenza virus can be confirmed by
using H5- or H7-specific primers (Monne et al., 2008; Slomka et al., 2007; Spackman et al., 2002).
Antigenic subtyping can be accomplished by monospecific antisera prepared against purified or
recombinant H and N subtype-specific proteins, used in HI and NI tests, or polyclonal antisera raised
against a battery of intact influenza viruses and used in HI and NI tests. Genotyping can be
accomplished using H and N subtype specific primers in RT-PCR and real-time RT-PCR tests; or 4)
using sequence analysis of H and N genes. Subtype identification by these techniques is beyond the
scope of most diagnostic laboratories not specialising in influenza viruses. Assistance is available from
the OIE Reference Laboratories (see Table given in Part 4 of this Terrestrial Manual).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สามารถยืนยันสถานะของไวรัสไข้หวัดใหญ่ A ใน AGID ทดสอบ โดยเห็นของดโปรตีนหรือเมทริกซ์ antigens ซึ่งทั้งสองเป็นเหมือนไวรัสไข้หวัดใหญ่ A ทั้งหมด (ดูที่ส่วนB.3.1) ได้อาจเตรียมการ antigens โดย concentrating ไวรัสจาก infective allantoic fluid หรือแยกสาร chorioallantoic ติดเชื้อ เหล่านี้ถูกทดสอบกับ antisera รู้จักบวกไวรัสอาจเข้มข้นจากน้ำมัน infective allantoic โดย ultracentrifugation หรือฝนภายใต้สภาวะกรด วิธีหลังประกอบด้วยการเพิ่ม 1.0 M HCl เพื่อ infective allantoic fluid จนกว่าจะมี pH ประมาณ 4.0 ผสมอยู่ในน้ำเป็นน้ำแข็ง 1 ชั่วโมงแล้ว ขึ้โดยcentrifugation ที่ 1000 กรัมที่ 4 องศาเซลเซียส น้ำมัน supernatant จะถูกยกเลิก มีสารสกัดไวรัสresuspended ในบัฟเฟอร์ glycin/sarcosyl: ซึ่งประกอบด้วย 1% (w/v) โซเดียม lauroyl sarcosinate buffered เพื่อpH 9.0 กับ glycine 0.5 M สารสกัดเหล่านี้ประกอบด้วยเปปไทด์ดโปรตีนและเมตริกซ์เตรียมอุดมดโปรตีนตรวจหาได้จากสาร chorioallantoic สำหรับใช้ในการทดสอบ AGID (เครา 1970) วิธีการนี้เกี่ยวข้องกับการกำจัดของสาร chorioallantoicจากไข่ติดเชื้อที่มีของเหลว allantoic กับกิจกรรมฮา สารเป็น homogenised แล้ว หรือพื้นดินต้องวาง นี้ขึ้นอยู่กับสามรอบแช่แข็ง – thaw ตาม centrifugation ที่ 1000 กรัม10 นาที เม็ดถูกละทิ้ง และ supernatant ที่ใช้เป็นการตรวจหาวิธีรักษาด้วย 0.1% formalinใช้ทดสอบ AGID ส่อ antigens ดโปรตีนหรือเมทริกซ์เป็นวิธีพอจะบ่งชี้ของไวรัสไข้หวัดใหญ่ A ในน้ำมัน amnioallantoic แต่ต่าง ๆ ทดลอง และเชิงพาณิชย์อย่างรวดเร็ว แข็งขั้นตอนการตรวจหาจับ ELISAs (AC ELISAs) จะเป็นทางเลือกที่มีประสิทธิภาพ (Swayne et al.,2013) การได้รับอนุญาต และเด็ดขาดเพื่อตรวจหาไข้หวัดมนุษย์ไวรัสในคลินิกสุด AC ELISAsไว้เป็นตัวอย่าง บางคนได้แสดงประสิทธิภาพของไข้หวัดใหญ่ A แต่มากการทดสอบเชิงพาณิชย์มีความไวต่ำ (Woolcock & Cardona, 2005) ผู้ตรวจสอบสำหรับสัตวใช้เป็นที่ต้องการกิจกรรม HA ใด ๆ ของของเหลวผ่านการฆ่าเชื้อที่เก็บเกี่ยวจากไข่ inoculated เป็นมักจะเกิดจากการไวรัสไข้หวัดใหญ่ A หรือ paramyxovirus การนก แต่บางสายพันธุ์ของนก reovirus เช่นเป็น nonsterileฮาของเหลวที่มีต้นกำเนิดจากแบคทีเรียอาจทำให้เกิด agglutination ของ RBCs ขณะนี้มี12 ยัง serotypes นก paramyxoviruses (มิลเลอร์ et al., 2010) ห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่จะมีantiserum เฉพาะไวรัสโรคนิวคาสเซิล (paramyxovirus นกชนิด 1), และในมุมมองของตนเกิดขึ้นอย่างแพร่หลายและใช้สากลเกือบเป็นวัคซีนที่อยู่ในสัตว์ปีก ดีที่สุดคือการประเมินความแสดง โดยยับยั้ง haemagglutination (HI) ทดสอบ (ดูบท 2.3.14 โรคนิวคาสเซิล)สามารถยืนยันสถานะของไวรัสไข้หวัดใหญ่ โดยการใช้ RT-PCR หรือ RTPCR แบบเรียลไทม์หรือใช้ เฉพาะ nucleoprotein หรือเมทริกซ์เฉพาะนำไพรเมอร์ (Altmuller et al., 1991Spackman และ al., 2002) ยัง สถานะของชนิดย่อย H5 หรือไวรัสไข้หวัดใหญ่ H7 สามารถยืนยันโดยใช้ H5 หรือ H7-เฉพาะไพรเมอร์ (Monne et al., 2008 Slomka et al., 2007 Spackman และ al., 2002)ลูกผสมสาม antigenic สามารถทำได้ โดยเตรียมกับ antisera monospecific บริสุทธิ์ หรือวททช H และ N เฉพาะชนิดย่อย โปรตีน ใช้ในการทดสอบ HI และ NI หรือ antisera polyclonal ยกเทียบกับแบตเตอรี่ของไวรัสไข้หวัดใหญ่เหมือนเดิม และ NI HI ใช้ในการทดสอบ Genotyping สามารถใช้ H และ N ชนิดย่อยเฉพาะไพรเมอร์ RT-PCR และการทดสอบแบบเรียลไทม์ของ RT-PCR หรือ 4)ใช้การวิเคราะห์ลำดับยีน H และ N ระบุชนิดย่อย โดยเทคนิคเหล่านี้จะอยู่นอกเหนือการขอบเขตของห้องปฏิบัติการวินิจฉัยส่วนใหญ่ที่ไม่เชี่ยวชาญในไวรัสไข้หวัดใหญ่ ความช่วยเหลือได้จากห้องปฏิบัติการอ้างอิงสัตว์ระหว่างประเทศที่ (ดูตารางที่กำหนดใน 4 ส่วนของคู่มือนี้ภาคพื้น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การปรากฏตัวของไวรัสไข้หวัดใหญ่ได้รับการยืนยันในการทดสอบ AGID โดยแสดงให้เห็นถึงการปรากฏตัวของ
นิวคลีโอแอนติเจนหรือเมทริกซ์ทั้งสองซึ่งเป็นเรื่องธรรมดาที่จะไข้หวัดใหญ่ไวรัส (ดูมาตรา
B.3.1) แอนติเจนอาจจะจัดทำขึ้นโดยมุ่งเน้นไวรัสจากของเหลว allantoic ติดเชื้อหรือ
การแยกเยื่อ chorioallantoic ติดเชื้อ เหล่านี้จะมีการทดสอบกับ antisera บวกที่รู้จักกัน.
ไวรัสอาจจะเข้มข้นจากของเหลว allantoic ติดเชื้อโดย ultracentrifugation หรือโดยการตกตะกอนภายใต้
สภาพที่เป็นกรด วิธีหลังประกอบด้วยการเพิ่มขึ้นของ 1.0 M HCl ที่จะติดเชื้อของเหลว allantoic จนกว่าจะ
อยู่ที่ประมาณค่า pH 4.0 ส่วนผสมจะอยู่ในห้องอาบน้ำน้ำแข็งเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและชี้แจงแล้วโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 1000 กรัมที่ 4 ° C ของเหลวจะถูกยกเลิก เข้มข้นไวรัส
resuspended ใน glycin / บัฟเฟอร์ sarcosyl นี้ประกอบด้วย 1% (w / v) โซเดียม lauroyl sarcosinate บัฟเฟอร์จะ
มีค่า pH 9.0 กับ 0.5 M ไกลซีน เข้มข้นเหล่านี้มีทั้งนิวคลีโอเมทริกซ์และ polypeptides.
เตรียมแอนติเจนนิวคลีโอที่อุดมไปด้วยนอกจากนี้ยังสามารถได้รับจากเยื่อ chorioallantoic สำหรับ
ใช้ในการทดสอบ AGID (เครา, 1970) วิธีการนี้จะเกี่ยวข้องกับการกำจัดของเยื่อ chorioallantoic
จากไข่ที่ติดเชื้อที่มีของเหลว allantoic กับกิจกรรม HA เยื่อแล้วปั่นหรือ
พื้นดินที่จะวาง นี้อยู่ภายใต้สามรอบแช่แข็งละลายตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 1000 กรัม
เป็นเวลา 10 นาที เม็ดจะถูกยกเลิกและใสใช้เป็นแอนติเจนต่อไปนี้การรักษา
ด้วยฟอร์มาลิน 0.1%.
ใช้การทดสอบแสดงให้เห็นถึง AGID แอนติเจนหรือนิวคลีโอเมทริกซ์เป็นวิธีที่น่าพอใจเพื่อบ่งชี้ถึง
การปรากฏตัวของไวรัสไข้หวัดใหญ่ในของเหลว amnioallantoic แต่การทดลองต่างๆและ ในเชิงพาณิชย์
อย่างรวดเร็วเฟสของแข็ง ELISAs แอนติเจนจับ (AC-ELISAs) เป็นทางเลือกที่มีประสิทธิภาพ (Swayne et al.,
2013) ส่วนใหญ่ AC-ELISAs ได้รับอนุญาตและทำการตลาดในการตรวจสอบไข้หวัดใหญ่ไวรัสในทางคลินิก
ตัวอย่าง บางคนได้แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพในการตรวจหาโรคไข้หวัดใหญ่ แต่หลายเหล่านี้
การทดสอบในเชิงพาณิชย์มีความไวต่ำ (Woolcock และโดนา, 2005) ผู้ที่ผ่านการตรวจสอบสำหรับสัตวแพทย์
ใช้เป็นที่ต้องการ.
กิจกรรมใด ๆ HA ของของเหลวผ่านการฆ่าเชื้อจากการเก็บเกี่ยวไข่เชื้อเป็นส่วนใหญ่มักจะเกิดจาก
ไวรัสไข้หวัดใหญ่หรือ paramyxovirus นก แต่ไม่กี่สายพันธุ์รีโอไวรัสไข้หวัดนกเช่นเดียวกับ nonsterile
ของเหลวที่มี HA ต้นกำเนิดของเชื้อแบคทีเรียสามารถก่อให้เกิดการจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดง ขณะนี้มี
12 สายพันธุ์ได้รับการยอมรับข่ายนก (มิลเลอร์ et al., 2010) ห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่จะมี
แอนติบอดี้ที่เฉพาะเจาะจงต่อการเกิดโรคไวรัสนิวคาสเซิ (ชนิด paramyxovirus นก 1) และในมุมมองของ
การเกิดขึ้นอย่างกว้างขวางและการใช้งานสากลเกือบจะเป็นวัคซีนในสัตว์ปีกมีชีวิตที่ดีที่สุดคือการประเมินของ
การแสดงตนโดยการยับยั้ง haemagglutination (HI) การทดสอบ ( ดูบท 2.3.14 โรคนิวคาสเซิ).
อีกวิธีหนึ่งคือการปรากฏตัวของเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ได้รับการยืนยันโดยการใช้ RT-PCR หรือเรียลไทม์ RTPCR
โดยใช้นิวคลีโอที่เฉพาะเจาะจงหรือเมทริกซ์เฉพาะไพรอนุรักษ์ (Altmuller et al, 1991;.
Spackman et al., 2002) นอกจากนี้ยังมีการปรากฏตัวของชนิดย่อย H5 หรือไวรัสไข้หวัดใหญ่ H7 ได้รับการยืนยันโดย
ใช้ H5- หรือไพร H7 เฉพาะ. (Monne et al, 2008;. Slomka et al, 2007;.. Spackman, et al, 2002)
แอนติเจน subtyping สามารถ ทำได้โดยการฉีด monospecific เตรียมไว้พร้อมบริสุทธิ์หรือ
H recombinant และไม่มีโปรตีนเฉพาะชนิดย่อยที่ใช้ในการ HI และการทดสอบ NI หรือฉีดโพลียก
กับแบตเตอรี่ของไวรัสไข้หวัดใหญ่เหมือนเดิมและใช้ในการทดสอบและ HI NI Genotyping สามารถ
ทำได้โดยใช้ H และชนิดย่อยไม่มีไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงใน RT-PCR และเรียลไทม์การทดสอบ RT-PCR; หรือ 4)
โดยใช้การวิเคราะห์ลำดับของ H และ N ยีน การระบุชนิดย่อยโดยเทคนิคเหล่านี้อยู่นอกเหนือ
ขอบเขตของห้องปฏิบัติการตรวจวินิจฉัยส่วนใหญ่ไม่ได้มีความเชี่ยวชาญในไวรัสไข้หวัดใหญ่ ให้ความช่วยเหลือได้จาก
ห้องปฏิบัติการอ้างอิง OIE (ดูตารางที่กำหนดไว้ในส่วนที่ 4 ของคู่มือนี้บก)