To construct a Cas9 expression cass

To construct a Cas9 expression cassette for the binary vector,the rice codon-optimized SpCas9 gene (21) was placed downstream of the maize ubiquitin 1 promoter (14) and
upstream of the nopaline synthase (NOS) gene terminator by BamHI and SpeI restriction and DNA ligation. The Cas9 cassette and a Gateway recombination cassette that
contained the attR1-ccdB-attR2 were cloned into pCAMBIA1300,which confers hygromycin B resistance (hptII) in transgenic plant (CAMBIA Health Solutions, Inc.), resulting
in a destination vector, pUbi-Cas9. Constructs derived from pUbi-Cas9 were used for rice transgenics. For transient expression of Cas9 in rice mesophyll protoplasts, the
pUC19 version of Cas9 was described earlier (21).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สร้างอับนิพจน์ Cas9 สำหรับเวกเตอร์ฐาน ข้าวปรับรหัสพันธุกรรม SpCas9 ยีน (21) ที่อยู่ปลายน้ำของโปรโมเตอร์ ubiquitin ข้าวโพด 1 (14) และขั้นต้นน้ำของการ nopaline synthase (NOS) ยีนเทอร์มิเนเตอร์จำกัด BamHI และ SpeI และไข่ดีเอ็นเอ เป็นเกตเวย์ recombination เทปและเทป Cas9 ที่อยู่ attR1-ccdB-attR2 ถูกโคลนลงใน pCAMBIA1300 ที่ confers hygromycin B ความต้านทาน (hptII) ในถั่วเหลืองพืช (CAMBIA สุขภาพโซลูชั่น Inc.), ผลลัพธ์ในปลายทางเวกเตอร์ pUbi-Cas9 โครงสร้างมาจาก pUbi-Cas9 ถูกใช้สำหรับข้าว transgenics สำหรับนิพจน์แบบฉับพลันของ Cas9 ในข้าว mesophyll โป การรุ่น pUC19 Cas9 ถูกก่อนหน้านี้อธิบาย (21)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อสร้างเทปการแสดงออก Cas9 สำหรับเวกเตอร์ไบนารี codon ที่ดีที่สุดข้าวยีน SpCas9 (21) ที่วางอยู่ปลายน้ำของ ubiquitin ข้าวโพด 1 โปรโมเตอร์ (14) และ
ต้นน้ำของเทส nopaline (NOS) เทอร์มิยีนโดย BamHI และข้อ จำกัด Spei และ ligation ดีเอ็นเอ เทปคาสเซ็ท Cas9 และเทปคาสเซ็ทรวมตัวกันอีกเกตเวย์ที่
มี attR1-Ccdb-attR2 ถูกโคลนเป็น pCAMBIA1300 ซึ่งฟาโรห์ต้านทาน B ไฮโกร (hptII) ในพืชดัดแปรพันธุกรรม (cambia สุขภาพ Solutions, Inc. ) ส่งผล
ในเวกเตอร์ปลายทาง Pubi-Cas9 . สร้างมาจาก Pubi-Cas9 ถูกนำมาใช้สำหรับ transgenics ข้าว สำหรับการแสดงออกชั่วคราวของ Cas9 ข้าว protoplasts mesophyll,
รุ่น pUC19 ของ Cas9 ถูกอธิบายไว้ก่อนหน้า (21)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อสร้าง cas9 การแสดงออกเทปสำหรับเวกเตอร์เลขฐานสองส่งเสริมข้าวเหมาะ spcas9 ยีน ( 21 ) อยู่ท้ายข้าวโพดข้างนอก 1 โปรโมเตอร์ ( 14 ) และ
ต้นน้ำของโนปาลีน synthase ( NOS ) ยีนเทอร์มิเนเตอร์ด้วย BamHI จำกัด และ spei Ligation และดีเอ็นเอ การ cas9 เทปคาสเซ็ตและเกตเวย์การ attr1-ccdb-attr2
มีโคลนเข้า pcambia1300 ) ,ซึ่งพระราชทานยีนต้านยา hygromycin B ความต้านทาน ( hptii ) ในโรงงานอุตสาหกรรม ( cambia สุขภาพโซลูชั่น , Inc . ) (
ในปลายทางของเวกเตอร์ pubi-cas9 . สร้างมาจาก pubi-cas9 ใช้ข้าวทรานสเจนิก . ให้มีการแสดงออกของ cas9 ในข้าวมีโซฟีลล์ ~ i ,
puc19 รุ่น cas9 ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 21 )