S. thermophilus cell collection was

S. thermophilus cell collection was carried out according to Gaudreau et al., and production of the CCE was carried out according to Tanigawa et al with some modifications. A total of 10 L of sterile (110 °C for 15 min) RSM(12%,w/w)was inoculated with S. thermophilus ST1 (1 × 107 CFU/g) and cultured at 37 °C in a BLBIO-10SJ fermenter Agitation of the cultures was kept at 50 rpm, and the pH was buffered with 5 N ammonium hydroxide.
Fermentations were stopped after 24 h of incubation.
Hereafter, the viable s. cell were counted using LM17 agar.
Cell pellets were collected by centrifugation (8000 ×g for 10 min at 5 °C) and washed thrice in TMA-I buffer (10 mM Tris–HCl, pH 7.8, 30 mM NH4Cl, 10 mM MgCl2, and 6 mM 2-mercaptoethanol) in order to avoid the precipitation of casein during centrifugation. Afterwashing twice in sterile saline (0.85%,w/w), the cell pellets were ground on four
separate, consecutive occasions: beating for 20 s each at 3000 rpm with 0.1-mm zirconia silica beads in a Biospec mini bead-beater-16 after removing the beads and cell debris by centrifugation, the cell lysates were adjusted to 5 × 109 ruptured
S. thermophilus cells/g using distilled water according to the aforementioned S. thermophilus viable cell count.
then, lysates werefiltered through a 0.22-μm pore-size filter for sterilization. The obtained CCE was kept frozen (−80 °C) ready for use

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

S. thermophilus เซลล์คอลเลกชันถูกดำเนินการตาม Gaudreau et al. และผลิตของ CCE ถูกดำเนินการตาม Tanigawa et al มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ผลรวมของ L 10 กระบอก (110 องศาเซลเซียสสำหรับ 15 นาที) RSM (12%,w/w) ที่ inoculated กับ S. thermophilus ST1 (1 × 107 CFU/g) และอ่างที่ 37 ° C ใน fermenter BLBIO 10SJ อาการกังวลต่อวัฒนธรรมถูกเก็บไว้ที่ 50 rpm และ pH ถูก buffered ด้วยไฮดรอกไซด์แอมโมเนีย N 5 หมักแหนมก็หยุดหลังจาก 24 ชมของคณะทันตแพทยศาสตร์ โดย s ได้เซลล์ทำงานได้ถูกตรวจนับใช้ LM17 agar รวบรวม โดย centrifugation (× g 8000 สำหรับ 10 นาทีที่ 5 ° C) และล้างใน TMA เลยขี้เซลล์-ฉันมีบัฟเฟอร์ (10 mM ตรี – HCl, pH 7.8, NH4Cl, MgCl2 10 มม. และ 6 mM 2 mercaptoethanol 30 มม.) เพื่อหลีกเลี่ยงฝนของเคซีนระหว่าง centrifugation Afterwashing สองครั้งในการใส่น้ำเกลือ (0.85%,w/w), ขี้เซลล์ถูกล่างบน 4ครั้งติดต่อกัน แยก: ตีสำหรับ 20 s แต่ละที่ 3000 rpm กับซิลิก้า zirconia 0.1 มม.ลูกปัดในการ Biospec มินิลูกปัด-ตี-16 หลังจากเอาลูกปัดและเศษเซลล์โดย centrifugation, lysates เซลล์ถูกปรับ 5 × 109 พุ่งกระฉูดS. thermophilus เซลล์/g ใช้กลั่นน้ำตามดังกล่าว S. thermophilus นับเซลล์ทำงานได้ แล้ว lysates werefiltered ผ่านตัวกรองขนาดรูขุมขน μm $ 0.22 สำหรับฆ่าเชื้อ CCE ได้รับถูกเก็บแช่แข็ง (−80 ° C) มีความพร้อมสำหรับการใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คอลเลกชัน S. thermophilus เซลล์ได้ดำเนินการตาม Gaudreau et al., และการผลิตของ CCE ได้ดำเนินการตาม Tanigawa et al, มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง รวม 10 ลิตรผ่านการฆ่าเชื้อ (110 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที) RSM (12% w / w) ได้รับเชื้อด้วย S. thermophilus ST1 (1 × 107 CFU / g) และเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน BLBIO-10SJ ถังหมักกวนของวัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ที่ 50 รอบต่อนาทีและมีค่า pH ที่ถูกเป็นกลางกับ 5 N แอมโมเนียมไฮดรอกไซ.
หมักแหนมถูกหยุดหลังจาก 24 ชั่วโมงของการบ่ม.
ปรโลกที่ s ทำงานได้ เซลล์นับโดยใช้วุ้น LM17.
เม็ดเซลล์ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (8000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 5 ° C) และล้างสามครั้งในบัฟเฟอร์ TMA-I (10 มิลลิ Tris-HCl, pH 7.8, 30 มิลลิ NH4Cl 10 มิลลิ MgCl2 และ 6 มิลลิ 2 mercaptoethanol) เพื่อหลีกเลี่ยงการตกตะกอนของเคซีนในระหว่างการหมุนเหวี่ยง Afterwashing สองครั้งในน้ำเกลือปลอดเชื้อ (0.85% w / w)
เม็ดเซลล์ถูกพื้นดินสี่แยกครั้งติดต่อกัน: ตี 20 แต่ละที่ 3000 รอบต่อนาทีกับ 0.1 มมเม็ดซิลิกาเซอร์โคเนียใน Biospec มินิลูกปัดชนะ-16 หลังจากที่ถอดลูกปัดและเศษเซลล์โดยการหมุนเหวี่ยง lysates เซลล์มีการปรับถึง 5 × 109
ฉีกขาดเอส thermophilus เซลล์ / กรัมโดยใช้น้ำกลั่นตามที่ดังกล่าวข้างต้น S. thermophilus นับเซลล์ที่มีชีวิต.
แล้ว lysates werefiltered ผ่าน 0.22 ไมครอนกรองรูพรุนขนาดการฆ่าเชื้อ CCE ได้ถูกเก็บแช่แข็ง (-80 ° C) พร้อมใช้งาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอสเทอร์มอฟิลัสเซลล์คอลเลกชันได้ดำเนินการตาม gaudreau et al . , และการผลิตของ CCE ได้ดำเนินการตามทานิ et al ที่มีการปรับเปลี่ยน รวม 10 ลิตรปลอดเชื้อ ( 110 ° C เป็นเวลา 15 นาที ) RSM ( 12 % w / w ) เป็นเชื้อที่มี S . สีที่ได้จากธรรมชาติ st1 ( 1 × CFU / 107 กรัม ) และเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศา C ใน blbio-10sj หมักการกวนของวัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 50 รอบต่อนาที ,และ pH 2 กับ 5 N แอมโมเนียมไฮดรอกไซด์
fermentations ถูกหยุดหลังจาก 24 ชั่วโมงของการบ่ม
ต่อจากนี้ารเอสเซลล์ถูกนับโดยใช้ lm17 วุ้น
เซลล์เม็ด เก็บข้อมูลโดยการปั่นเหวี่ยง ( 8000 × G สำหรับ 10 นาทีที่ 5 ° C ) และล้าง 3 ครั้งใน tma-i บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ –กรดไฮโดรคลอริก pH 7.8 , 4 . ชุด 30 มม. , 10 มม.และ 6 มม. อย่างเดียว ) เพื่อหลีกเลี่ยงการตกตะกอนเคซีนในระหว่างการปั่นเหวี่ยง afterwashing สองครั้งในน้ำเกลือปลอดเชื้อ ( 0.85 % w / w ) , เซลล์เม็ดมีพื้นสี่
แยกติดต่อกันโอกาส : เต้น 20 s ที่ 3000 รอบต่อนาที ด้วย 0.1-mm แต่ละเม็ดซิลิกาลูกปัดใน biospec มินิ bead-beater-16 หลังจากเอาเศษเซลล์โดยการเหวี่ยงแยก ลูกปัด ,เซลล์ lysates คือปรับ 5 × 109 แตก
S . เทอร์มอฟิลัสเซลล์ / กรัมใช้น้ำกลั่นตามดังกล่าว . สีที่ได้จากธรรมชาติได้ เซลล์นับ
แล้ว lysates werefiltered ผ่าน 0.22 - μ M ขนาดรูพรุนตัวกรองสำหรับการฆ่าเชื้อ ค่า CCE ถูกเก็บไว้ ( − 80 ° C ) พร้อมสำหรับการใช้