IntroductionThe fat body of the hol

Introduction
The fat body of the holometabolous insect Bombyx mori (silkworm) is a relatively large organ that is functionally similar to the vertebrate liver ( Thomson, 1975). As a central storage center for nutrition and energy, the fat body synthesizes large amounts of proteins including lipoproteins, storage proteins and vitellogenins and secretes them into the hemolymph in a time-dependent manner during the life cycle of B. mori ( Sakai et al., 1988 and Wyatt and Pan, 1978). Among the major plasma proteins is a group of structurally related proteins with molecular weights around 30 kDa, termed B. morilow molecular lipoproteins (Bmlps or “30 K proteins”). 30 K proteins are synthesized largely in the fat body and play multiple roles in the growth and development of B. mori, including inhibiting apoptosis ( Kim et al., 2001), defending against fungal infection ( Ujita et al., 2005), translocating chymotrypsin inhibitor ( Ueno et al., 2006), transporting lipid and/or sugar ( Yang et al., 2011), improving sialylation of recombinant proteins ( Wang et al., 2011), and enhancing cellular uptake and stability of enzymes ( Lee et al., 2014). Interestingly, changes in the level of 30 K protein mRNA in the fat body reflect changes in the hemolymph concentration of 30 K proteins, indicating that transcription is the major mode of 30 K protein gene regulation. B. mori hemolymph proteins have proven to be good models for studying the developmental regulation of gene expression ( Izumi et al., 1981, Mori et al., 1991a and Mori et al., 1991b).

The availability of the complete genome sequence of B. mori provides a unique opportunity to identify genes encoding 30 K proteins and determining how they are developmentally regulated. So far, a total of 24 genes encoding typical 30 K proteins have been identified (Bmlp1–24) ( Zhang et al., 2012a and Zhang et al., 2012b). Most of the 30 K protein genes share similar genome organizations, as well as high similarity in their amino acid sequences ( Mori et al., 1991a, Mori et al., 1991b and Sun et al., 2007). Notable, several genes such as Bmlp3 and Bmlp7, are synthesized largely in the fat body in a developmentally regulated manner ( Deng et al., 2013, Zhang et al., 2012a and Zhang et al., 2012b). The biosynthesis of 30 K proteins appears to be repressed by juvenile hormone (JH) and appears to be the result of reduced transcription initiation ( Bosquet et al., 1989, Izumi et al., 1984 and Ogawa et al., 2005). These data suggest that there might be DNA elements responsive to JH in the upstream sequences of 30 K protein genes. Little is known about the promoters of 30 K protein genes and their associated enhancers.

In a previous study, we cloned a 1.1-kb promoter region of Bmlp3 and demonstrated its ability to direct fat body-specific expression of DsRed in transgenic silkworms ( Deng et al., 2013). To further characterize the promoter of Bmlp3, a series of promoter-containing DNA fragments of differing lengths were attached to a luciferase reporter gene and the levels of reporter-gene expression were measured. Our results indicate the presence of a 21-bp sequence located between − 230 and − 250 bp upstream of the Bmlp3 transcription start site with the ability to increase luciferase gene expression in BmE cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทนำ
ไขมันในร่างกายของแมลง holometabolous Bombyx Mori (ไหม) เป็นอวัยวะที่ค่อนข้างใหญ่ที่มีหน้าที่คล้ายกับตับของสัตว์มีกระดูกสันหลัง (ทอมสัน, 1975) ในฐานะที่เป็นศูนย์กลางการจัดเก็บข้อมูลกลางสำหรับโภชนาการและพลังงานไขมันในร่างกายสังเคราะห์จำนวนมากของโปรตีนรวมทั้ง lipoproteins โปรตีนการจัดเก็บและ vitellogenins และหลั่งพวกเขาเข้าไปในเลือดในลักษณะที่ขึ้นกับเวลาในช่วงวงจรชีวิตของ B. Mori (ซาไกและคณะ 1988 และไวแอตต์และแพน, 1978) ท่ามกลางพลาสมาโปรตีนที่สำคัญคือกลุ่มของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการก่อสร้างที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 30 กิโลดาลตันเรียกว่าบี morilow lipoproteins โมเลกุล (Bmlps หรือ "30 K โปรตีน") 30 K มีการสังเคราะห์โปรตีนส่วนใหญ่อยู่ในไขมันในร่างกายและเล่นหลายบทบาทในการเจริญเติบโตและการพัฒนาของ B. Mori รวมทั้งยับยั้งการเกิด apoptosis (Kim et al., 2001), การป้องกันการติดเชื้อของเชื้อรา (Ujita et al., 2005), translocating ยับยั้ง chymotrypsin (อุเอโนะ et al., 2006) การขนส่งไขมันและ / หรือน้ำตาล (Yang et al., 2011) การปรับปรุง sialylation ของโปรตีน (Wang et al., 2011), และเพิ่มการดูดซึมของเซลล์และความมั่นคงของเอนไซม์ (ลี et al., 2014) ที่น่าสนใจการเปลี่ยนแปลงในระดับของ 30 K mRNA โปรตีนในร่างกายไขมันสะท้อนให้เห็นถึงการเปลี่ยนแปลงในความเข้มข้นของเลือด 30 K โปรตีนแสดงให้เห็นว่าการถอดความเป็นโหมดที่สำคัญของ 30 K โปรตีนยีนควบคุม B. Mori โปรตีนในเลือดได้พิสูจน์แล้วว่าเป็นรูปแบบที่ดีสำหรับการศึกษาการพัฒนากฎระเบียบของการแสดงออกของยีน (Izumi et al., 1981 Mori et al., 1991a และ Mori et al., 1991b). ความพร้อมของลำดับจีโนมที่สมบูรณ์ของ B. Mori มีโอกาสที่จะระบุยีนที่ควบคุมการ 30 K โปรตีนและการกำหนดวิธีการที่พวกเขาถูกควบคุมการพัฒนา จนถึงขณะนี้มีทั้งหมด 24 ยีนที่ควบคุมการทั่วไป 30 K โปรตีนได้รับการระบุ (Bmlp1-24) (Zhang et al., 2012a และ Zhang et al., 2012b) ส่วนใหญ่ของ 30 K ยีนโปรตีนแบ่งปันองค์กรจีโนมที่คล้ายกันเช่นเดียวกับความคล้ายคลึงกันสูงในลำดับกรดอะมิโนของพวกเขา (โมริ et al., 1991a, Mori et al., 1991b และ Sun et al., 2007) เด่นยีนหลายอย่างเช่น Bmlp3 และ Bmlp7, มีการสังเคราะห์ส่วนใหญ่อยู่ในไขมันในร่างกายในลักษณะที่ควบคุมการพัฒนา (เติ้ et al., 2013, Zhang et al., 2012a และ Zhang et al., 2012b) การสังเคราะห์โปรตีน 30 K ดูเหมือนจะอัดอั้นโดยฮอร์โมนเด็กและเยาวชน (JH) และดูเหมือนจะเป็นผลของการเริ่มต้นการถอดความลดลง (Bosquet et al., 1989, Izumi et al., 1984 และ Ogawa et al., 2005) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าอาจจะมีองค์ประกอบดีเอ็นเอเพื่อตอบสนอง JH ในลำดับต้นน้ำของ 30 K ยีนโปรตีน ไม่ค่อยมีใครรู้เกี่ยวกับการก่อการ 30 K ยีนโปรตีนและเพิ่มการเชื่อมโยงของพวกเขา. ในการศึกษาก่อนหน้านี้ที่เราโคลนภูมิภาคก่อการ 1.1 กิโล Bmlp3 และแสดงให้เห็นถึงความสามารถในการแสดงออกทางร่างกายโดยตรงเฉพาะไขมันของ DsRed ในดักแด้ดัดแปรพันธุกรรม (เติ้งและ al., 2013) เพื่อเพิ่มเติมลักษณะก่อการ Bmlp3 ชุดของโปรโมเตอร์ที่มีดีเอ็นเอของความยาวที่แตกต่างกันติดอยู่กับยีนนักข่าว luciferase และระดับการแสดงออกของยีนนักข่าวถูกวัด ผลของเราแสดงให้เห็นการปรากฏตัวของลำดับ 21 bp อยู่ระหว่าง - 230 และ - 250 bp ต้นน้ำของเว็บไซต์เริ่มต้นการถอดความ Bmlp3 ที่มีความสามารถในการเพิ่มการแสดงออกของยีนในเซลล์ luciferase BME