Flow cytometry analysis was conduct

Flow cytometry analysis was conducted to estimate the ploidy levels of 2, 4, 6 and 12-month-old embryogenic calli and of regenerants according to Galbraith et al. (1983). Oryza sativa spp. japonica cv. Nipponbare served as the standard for estimation of DNA content in ruzigrass; its DNA content was 0.91 pg 2C1 (Uozu et al.1997). Approximately 0.5 cm2 of young leaf tissue from
control plants and 0.05–0.1 g of embryogenic calli or leaf pieces were soaked in 1 mL extraction buffer (50 mmol L1 Tris-HCl, 0.5% polyvinylpyrrolidone, 0.01% Triton-X, 0.63% sodium sulfite, pH 7.5) for 5 min and chopped with a razor blade. After filtration of the mixture through 50 lmol L1 nylon mesh, 50 lL propidium iodide (PI) were added to the nuclear suspension and incubated for at least 5 min at room temperature to stain nuclei completely. The fluorescence intensities of nuclear suspensions were measured with an EPICS XL flow cytometer, equipped with a 488 nm argon laser and long path filter (Beckman Coulter, CA, USA). Diploid,tetraploid and octoploid regenerants were transferred to soil and grown in a greenhouse for morphological evaluation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์การตรวจวิเคราะห์เซลล์ไหลดำเนินการเพื่อประเมินระดับพล็อยดี ของเอเรียเพาะ 2, 4, 6 และ อายุ 12 เดือน และ regenerants ตาม Galbraith et al. (1983) พันธุ์ japonica Oryza sativa ออกซิเจน Nipponbare ทำหน้าที่เป็นมาตรฐานสำหรับการประเมินเนื้อหาดีเอ็นเอใน ruzigrass เนื้อหาดีเอ็นเอคือ 0.91 pg 2C 1 (Uozu et al.1997) ประมาณ 0.5 cm2 ของเนื้อเยื่อใบหนุ่มจากควบคุมพืชและ 0.05 – 0.1 กรัมชิ้นเอเรียหรือใบเพาะแช่ในบัฟเฟอร์สกัด 1 มล. (50 มิลลิโมลต่อ L1 ทริสเรทติ้ง HCl, polyvinylpyrrolidone 0.5% 0.01% Triton-X 0.63% โซเดียมซัลไฟต์ pH 7.5) 5 นาที และเตรียมการ ด้วยใบมีดโกน หลังจากกรองของผสมผ่านตาข่ายไนล่อน L1 lmol 50, 50 จะ propidium ไอโอไดด์ (PI) ถูกเพิ่มระงับนิวเคลียร์ และอย่างน้อย 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องให้สีย้อมนิวเคลียสทั้งหมดได้รับการกก ปลดปล่อยก๊าซเรืองแสงของสารแขวนลอยนิวเคลียร์ถูกวัด ด้วย cytometer ไหลการ EPICS XL, 488 nm เลเซอร์อาร์กอนและกรองเส้นทางยาว (Beckman Coulter, CA, USA) ฮอโมไซกัส tetraploid และ octoploid regenerants ถูกโอนไปยังดิน และปลูกในเรือนกระจกสำหรับสัณฐานการประเมินผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

flow cytometry วิเคราะห์ได้ดำเนินการในการประมาณระดับ ploidy ของ 2, 4, แคลลัส embryogenic 6 และ 12 เดือนเก่าและเพาะตาม Galbraith et al, (1983) Oryza sativa เอสพีพี japonica CV Nipponbare ทำหน้าที่เป็นมาตรฐานสำหรับการประมาณปริมาณดีเอ็นเอใน ruzigrass; ปริมาณดีเอ็นเอของมันคือ 0.91 PG 2C1 (Uozu et al.1997) ประมาณ 0.5 ซม 2 ของเนื้อเยื่อใบอ่อนจาก
พืชในการควบคุมและ 0.05-0.1 กรัม embryogenic แคลลัสหรือใบชิ้นถูกแช่ใน 1 มิลลิลิตรบัฟเฟอร์สกัด (50 มิลลิโมล L1 Tris-HCl, polyvinylpyrrolidone 0.5%, 0.01% Triton-X 0.63% โซเดียมซัลไฟต์ ค่า pH 7.5) เป็นเวลา 5 นาทีและสับด้วยใบมีดโกน หลังจากการกรองของส่วนผสมผ่าน 50 lmol ตาข่ายไนลอน L1 50 LL propidium ไอโอไดด์ (PI) ถูกเพิ่มเข้าไปในการระงับนิวเคลียร์และบ่มเป็นเวลาไม่น้อยกว่า 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องคราบนิวเคลียสสมบูรณ์ ความเข้มการเรืองแสงของสารแขวนลอยนิวเคลียร์ถูกวัดที่มีการไหลของมหากาพย์ XL cytometer พร้อมกับเลเซอร์อาร์กอน 488 นาโนเมตรและตัวกรองเส้นทางยาว (Beckman Coulter, CA, USA) ซ้ำ tetraploid และ octoploid เพาะถูกโอนไปยังดินและปลูกในเรือนกระจกสำหรับการประเมินผลทางสัณฐานวิทยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์การไหล ( มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินระดับการ 2 , 4 , 6 และ 12 เดือนเก่าและเลี้ยงแคลลัสของ regenerants ตามกัลเบรธ et al . ( 1983 ) ข้าวญี่ปุ่น ( พันธุ์ nipponbare ทำหน้าที่เป็นมาตรฐานสำหรับการประมาณปริมาณดีเอ็นเอใน ruzigrass ; ปริมาณดีเอ็นเอของมันคือ 0.91 PG 2c1 ( uozu et al . 1997 ) ประมาณ 0.5 ตร. ซม. เนื้อใบอ่อนจากพืชควบคุม และ 0.05 และ 0.1 กรัม เลี้ยงแคลลัส หรือชิ้นใบแช่ในบัฟเฟอร์การสกัด 1 มิลลิลิตร ( 50 มิลลิโมล L1 หรือ HCl , 0.5% พอลิวินิลไพร์โรลิโดน 0.01 % triton-x 0.63 % โซเดียมซัลไฟต์ พีเอช 7.5 ) เป็นเวลา 5 นาที และตัดด้วยมีดโกนใบมีด หลังจากที่กรองส่วนผสมผ่าน 50 lmol L1 ตาข่ายไนล่อน , 50 จะ propidium ไอโอไดด์ ( PI ) ที่ถูกระงับโครงการนิวเคลียร์และบ่มเป็นเวลาอย่างน้อย 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องคราบนิวเคลียสอย่างสมบูรณ์ เรืองแสงเข้มของนิวเคลียร์ ช่วงล่างเป็นวัดที่มีการใช้โมโนมหากาพย์ XL พร้อมกับ 488 นาโนเมตรเลเซอร์อาร์กอนและกรองเส้นทางยาว ( Beckman Coulter , CA , USA ) ดิพลอยด์และเตตราพล ด์ , octoploid regenerants ถูกย้ายดินและปลูกในเรือนกระจกเพื่อประเมินลักษณะทางสัณฐานวิทยา .