2.2. Resistance of Z. bailii to wea

2.2. Resistance of Z. bailii to weak acids and inhibitors
Tests were carried out using Z. bailii (NCYC 1766) and S. cerevisiae
(BY4741) on resistance to 87 chemical inhibitors, including lipophilic
and hydrophilic weak-acids, alcohols, chelating acids, ethers, aldehydes
and esters (Supplementary Data Table 1). For the majority of inhibitors,
500 mMstock solutionswere prepared inmethanol, and added to YEPD
aliquots at increasing concentrations. Bottles were inoculated at
103 cells/ml and incubated for 14 days at 25 °C. The MICwas the lowest
concentration of preservative at which no growth was detectable at
14 days.
2.3. Population heterogeneity in resistance of Z. bailii and S. cerevisiae
In preserved soft drinks, spoilage yeasts fall to the bottomof bottles.
To imitate these conditions in the laboratory, resistance of individual
cells was determined by colony growth in static liquid culture. Yeast
cells in liquid media subside to the bottom at ~5 mm/h and in static
conditions form discrete, countable yeast colonies under the liquid, at
the bottom of Petri dishes or bottles. However, any later disturbance
will cause yeasts to disperse, merging the colonies. To prevent agitation
and maintain separate colonies, yeasts were grown in liquid culture in
flat-bottomed 96-well microtitre plates (Steels et al., 2000).
Starter cultures of Z. bailii (NCYC 1766) and S. cerevisiae strain
(BY4741) in YEPD pH 4.0 were accurately counted by haemocytometer
and serially diluted in YEPD to 104 cells/ml. 20 ml aliquots of YEPD
containing progressively higher concentration of sorbic acid (0–7 mM)
were inoculated at 15–30 cells/ml final concentration and dispensed
into microtitre plates at 200 μl/well (maximum 3–6 colonies/well).
Plates were sealed, lidded, double-bagged to prevent evaporation, and
incubated at 25 °C for 14 days. Yeast colonies/well were recorded
every 2 days, as high levels of preservatives progressively slow yeast
growth. For each sorbic acid concentration, five replicate microtitre
plates were inoculated, and the procedure repeated using four separate
yeast starters. After 14 days, the total colony number at each sorbic
acid concentration was recorded, and expressed in proportion to the
colony number growing in YEPD pH 4.0 without sorbic acid.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การต่อต้านของ bailii z.กรดอ่อนและ inhibitorsทดสอบได้ดำเนินการใช้ z. bailii (NCYC 1766) และ S. cerevisiae(BY4741) บนความต้านทานต่อสารเคมี inhibitors 87 รวม lipophilicและ chelating hydrophilic ที่อ่อนแอกรด alcohols กรด ethers, aldehydesและ esters (เสริมข้อมูลตาราง 1) สำหรับส่วนใหญ่ของ inhibitors500 mMstock solutionswere เตรียม inmethanol และเพิ่ม YEPDaliquots ที่เพิ่มความเข้มข้น ขวดได้ inoculated ที่103 เซลล์/มล. และ incubated 14 วันที่ 25 องศาเซลเซียส MICwas สุดความเข้มข้นของ preservative ที่เจริญเติบโตไม่ได้สามารถตรวจสอบได้ที่วันที่ 142.3 ประชากร heterogeneity ในต้านทาน z. bailii และ S. cerevisiaeในดื่มรักษา yeasts เน่าเสียตกไปขวด bottomofการเลียนแบบเงื่อนไขเหล่านี้ในห้องปฏิบัติการ ความต้านทานของแต่ละบุคคลเซลล์ที่ถูกกำหนด โดยโคโลนีเจริญเติบโตในวัฒนธรรมคงเหลว ยีสต์เซลล์ในสื่อของเหลวเบาบางลงล่าง ที่ ~ 5 mm/h และสถิตเงื่อนไขแบบเดี่ยว ๆ นับได้ยีสต์อาณานิคมภายใต้ของเหลว ที่ด้านล่างของจาน Petri หรือขวด อย่างไรก็ตาม รบกวนใด ๆ ในภายหลังจะทำให้ yeasts กระจาย รวมอาณานิคม เพื่อป้องกันอาการกังวลต่อและรักษาอาณานิคมแยก yeasts ได้เติบโตในวัฒนธรรมของเหลวในflat-bottomed 96-ดี microtitre แผ่น (Steels et al., 2000)เริ่มต้นวัฒนธรรม z. bailii (NCYC 1766) และต้องใช้ S. cerevisiae(BY4741) YEPD pH 4.0 ได้อย่างถูกต้องนับ โดย haemocytometerและแตกออก serially ใน YEPD 104 เซลล์ / มล. aliquots 20 ml ของ YEPDประกอบด้วยความก้าวหน้าสูงกว่าความเข้มข้นของกรด sorbic (0-7 มิลลิเมตร)inoculated ที่ความเข้มข้นสุดท้ายเซลล์/มล. 15 – 30 และคำเป็นแผ่น microtitre ที่ μl 200 ดี (อาณานิคมสูง 3 – 6 ด้วย)แผ่นถูกปิดผนึก lidded, bagged คู่เพื่อป้องกันการระเหย และincubated ที่ 25 ° C สำหรับ 14 วัน ยีสต์อาณานิคม/ดีถูกบันทึกไว้ทุก ๆ 2 วัน เป็นสารกันบูดยีสต์ช้าความก้าวหน้าระดับสูงเจริญเติบโต สำหรับแต่ละความเข้มข้นกรด sorbic ห้าจำลอง microtitreแผ่นที่ inoculated และทำซ้ำขั้นตอนใช้สี่แยกอย่ายีสต์ หลังจาก 14 วัน หมายเลขรวมฝูงแต่ละ sorbicความเข้มข้นกรดถูกบันทึก และแสดง proportion เพื่อจำนวนโคโลนีเติบโตใน YEPD ค่า pH 4.0 ไม่มี sorbic กรด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 ความต้านทานของ bailii ซีกรดอ่อนแอและยับยั้ง
การทดสอบได้ดำเนินการโดยใช้ bailii ซี (NCYC 1766) และ S. cerevisiae
(BY4741) ความต้านทาน 87 ยับยั้งสารเคมีรวมทั้ง lipophilic
และ hydrophilic กรดอ่อนแอ, แอลกอฮอล์, กรดคีเลต, อีเทอร์ , ลดีไฮด์
และเอสเทอ (เสริมข้อมูลตารางที่ 1) สำหรับส่วนใหญ่ของสารยับยั้ง,
500 mMstock solutionswere inmethanol ที่เตรียมไว้และเพิ่มไปยัง YEPD
aliquots ที่ระดับความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้น ขวดถูกเชื้อที่
103 เซลล์ / มล. และบ่มเป็นเวลา 14 วันที่ 25 ° C MICwas ต่ำสุด
เข้มข้นของสารกันบูดที่ไม่มีการเจริญเติบโตเป็นที่ตรวจพบใน
14 วัน.
2.3 ความแตกต่างของประชากรในความต้านทานของ bailii ซีและ S. cerevisiae
ในเครื่องดื่มที่เก็บรักษาไว้ยีสต์เน่าเสียตกอยู่กับขวด bottomof.
เพื่อเลียนแบบเงื่อนไขเหล่านี้ในห้องปฏิบัติการความต้านทานของแต่ละ
เซลล์ถูกกำหนดโดยการเจริญเติบโตของอาณานิคมในวัฒนธรรมของเหลวคงที่ ยีสต์
เซลล์ในสื่อที่มีสภาพคล่องลดลงไปที่ด้านล่างประมาณ 5 มิลลิเมตร / ชั่วโมงและในการคง
สภาพรูปแบบไม่ต่อเนื่องนับยีสต์อาณานิคมภายใต้ของเหลวที่
ด้านล่างของจานเลี้ยงเชื้อหรือขวด แต่รบกวนใด ๆ ในภายหลัง
จะทำให้ยีสต์ที่จะแยกย้ายกันกลมกลืนอาณานิคม เพื่อป้องกันการก่อกวน
และรักษาอาณานิคมแยกยีสต์เติบโตในวัฒนธรรมของของเหลวใน
ที่ราบต่ำ 96 หลุมจาน microtitre (เหล็ก et al., 2000).
วัฒนธรรมเริ่มต้นของ bailii ซี (NCYC 1766) และ S. cerevisiae สายพันธุ์
(BY4741) ในค่า pH 4.0 YEPD นับได้อย่างถูกต้องโดยการสไลด์นับเม็ดเลือด
และปรับลดลำดับใน YEPD ถึง 104 เซลล์ / มิลลิลิตร 20 มล. aliquots ของ YEPD
ที่มีความเข้มข้นสูงกว่าความก้าวหน้าของกรดซอร์บิก (0-7 มิลลิเมตร)
ถูกเชื้อที่ 15-30 เซลล์ / มล. เข้มข้นสุดท้ายและจ่าย
ลงในแผ่น microtitre ที่ 200 ไมโครลิตร / ดี (สูงสุด 3-6 โคโลนี / ดี).
แผ่น ถูกปิดผนึก, lidded ดับเบิลถุงเพื่อป้องกันการระเหยและ
บ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 14 วัน อาณานิคมยีสต์ / ดีถูกบันทึกไว้
ทุก 2 วันเป็นระดับสูงของสารกันบูดยีสต์ช้าความก้าวหน้า
การเจริญเติบโต สำหรับแต่ละความเข้มข้นของกรดซอร์บิกห้าซ้ำ microtitre
แผ่นถูกเชื้อและขั้นตอนการทำซ้ำใช้สี่แยก
เริ่มยีสต์ หลังจาก 14 วันจำนวนอาณานิคมทั้งหมดในแต่ละซอร์บิก
ความเข้มข้นของกรดได้รับการบันทึกและแสดงในสัดส่วนที่
จำนวนโคโลนีที่เพิ่มขึ้นในค่า pH 4.0 โดยไม่ต้อง YEPD กรดซอร์บิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . ความต้านทานของ Z bailii กรดอ่อนและผลทดสอบที่ออกมาใช้
Z bailii ( ncyc 1766 ) และ S . cerevisiae
( by4741 ) ความต้านทานต่อสารเคมีและการรวม 87 , ลิโพฟิลิก
น้ำและกรดอ่อน แอลกอฮอล์ และกรด อีเทอร์อัลดีไฮด์
, ส ( ข้อมูลเพิ่มเติม ตารางที่ 1 ) สำหรับส่วนใหญ่ของ inhibitors
500 mmstock เตรียม inmethanol ต่างๆ ,และเพิ่มสุข
เฉยๆที่เพิ่มความเข้มข้น ขวดเป็นหัวเชื้อที่
103 เซลล์ / มล. บ่มเป็นเวลา 14 วัน ที่ 25 ° C micwas ความเข้มข้นต่ำสุด
ของสารกันบูดที่ไม่เจริญเติบโตได้ใน 14 วัน
.
2.3 ที่สามารถต้านทานของประชากรใน Z bailii และ S . cerevisiae
ในการรักษาเครื่องดื่มยีสต์ตกอยู่กับ bottomof
ขวด .เลียนแบบเงื่อนไขเหล่านี้ในห้องปฏิบัติการ , ความต้านทานของเซลล์แต่ละเซลล์
ถูกกำหนดโดยการเจริญเติบโตของอาณานิคมในของเหลวแบบวัฒนธรรม ยีสต์ในอาหารเหลวบางเบา
เซลล์ต้นตอที่ ~ 5 มม. / ชม. และในสภาวะคงที่
แบบไม่ต่อเนื่องได้ยีสต์อาณานิคมภายใต้ของเหลวที่
ด้านล่างของจานเพาะเลี้ยง หรือขวด อย่างไรก็ตาม การรบกวนใด ๆในภายหลัง จะทำให้ยีสต์
จะแยกย้ายกันไปการรวมอาณานิคม เพื่อป้องกันการปั่น
และรักษาแยกโคโลนียีสต์เติบโตในอาหารเหลวใน
แบน bottomed 96 ดี microtitre แผ่นเหล็ก et al . , 2000 ) .
จุลินทรีย์เริ่มต้นของ Z bailii ( ncyc 1766 ) และ S . cerevisiae สายพันธุ์
( by4741 ) pH 4.0 เป็นสุขได้อย่างถูกต้องนับโดย haemocytometer
อนุกรมและเจือจางใน อาหารเลี้ยงเชื้อ 104 เซลล์ / มล. 20 ml เฉยๆของอาหารเลี้ยงเชื้อ
ผู้ที่มีความเข้มข้นของกรดซอร์บิค ( 0 – 7 มม. )
ปลูกเชื้อที่ 15 – 30 เซลล์ / มล. ความเข้มข้นสุดท้ายและจ่าย
เป็น microtitre แผ่น 200 μ L / ( 3 ) สูงสุด 6 โคโลนี / ดี )
แผ่นถูกผนึกเปลือกตาคู่ใส่ถุงเพื่อป้องกันการระเหยและ
บ่มที่ 25 ° C เป็นเวลา 14 วัน อาณานิคม / ยีสต์ก็ถูกบันทึกไว้
ทุก 2 วันเป็นระดับสูงของสารกันบูดช้าก้าวหน้ายีสต์
การเจริญเติบโต สำหรับแต่ละกรดซอร์บิคความเข้มข้น 5 ทำซ้ำ microtitre
แผ่นปลูกเชื้อและขั้นตอนซ้ำโดยใช้สี่ starters ยีสต์ที่แยกต่างหาก

หลังจาก 14 วัน รวมอาณานิคมหมายเลขที่แต่ละความเข้มข้นของกรดซอร์บิค
ถูกบันทึกไว้ และแสดงออกในสัดส่วน
อาณานิคมหมายเลขเติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อ pH 4.0 โดยกรดซอร์บิค .