2. Materials and methods2.1. Equipm

2. Materials and methods
2.1. Equipment
Three HPLC instruments in di€erent laboratories were
used in the study: a manual system consisting of two 510
pumps, a rheodyne 7125 injector, 680 controller, 8_10
radial compression module (Waters, Milford, MA, USA)
and an SPD-M10A diode array detector controlled with
Class software (Shimadzu, Tokyo, Japan). The other sys-
tems were integrated HP1050 and HP1100 instruments
respectively, incorporating autosampler, quaternary
pump, on-line degasser and diode array detector, con-
trolled with ChemStation software (Hewlett Packard,
Waldbronn, Germany).
Initial studies involved the use of the Resolve C18, 5
mm, 100_8 mm cartridge column, non-endcapped, 10%
carbon content (Waters). Several other C18 columns were
evaluated and the following selected for further investi-
gation: Nomura Develosil ODS-MG-5, 5 mm, 250_4.6
mm, dense end-capped, 15% carbon content, low ligand
density (Phenomenex, Torrance, CA, USA); YMC
AQ312, 5 mm, 150_4.6 mm, hydrophilic endcapped,
16% carbon load (YMC Inc., Wilmington, NC, USA);
Platinum EPS, 3 mm, 53_7 mm, non-endcapped, reduced
ligand density (Alltech, Deer®eld, IL, USA), and a Luna
Phenyl-C6 column, 5 mm, 250_4.6 mm, 18% carbon
(Phenomenex) evaluated for its combined aliphatic/aro-
matic selectivity. A Luna C8 column, 5 mm, 250_4.6
mm, hydrophobic shielded endcapped, 13.5% carbon
(Phenomenex), was also selected for further study.
2.2. Reagents
Water (>18 M), d-pantothenic acid, hemicalcium
salt (Sigma, St Louis, MO, USA), acetonitrile (HPLC
grade, BDH, Merck, Poole, UK), potassium dihydrogen
orthophosphate, orthophosphoric acid and glacial
acetic acid (AR grade, BDH).
Phosphate bu€er (0.1 M, pH 2.25) was prepared by
dissolving 13.61 g KH2PO4 in water (1.0 l) and adjusting
pH with H3PO4. Acetic acid (3.0% v/v) was prepared by
diluting 15 ml to 0.5 l with water.
Mobile phase was prepared by mixing, subsequent to
separate ®ltration and degassing, phosphate bu€er (970
ml) and acetonitrile (30 ml). Alternative bu€er:acetonitrile
eluent proportions were prepared as required.
2.3. Standard preparation
Stock pantothenic acid standard (500 mg/ml):
Approximately 140 mg calcium pantothenate was dried
at 105_C for 2 h over silica gel in a vacuum oven. After
cooling in dessicator, 108.8 mg was accurately weighed
into a small beaker. It was dissolved in a small volume
of water and transferred to a volumetric ¯ask (200 ml),
rinsing beaker with ethanol:water (1:1 v/v) and made to
volume, stoppered and mixed thoroughly. 4 ml aliquots
were dispensed into screw-capped vials and stored at
ÿ18_C. Stock standard was stable for 6 months.
Working standards (5.0 and 10.0 mg/ml): Prepared by
dilution of stock 1:100 and 1:50 respectively with water
in separate volumetric ¯asks (50 ml). These standards
were prepared fresh daily and discarded after use.
2.4. Sample preparation
Sample powder (0.5 g) was accurately weighed into a
disposable, graduated centrifuge tube (10 ml). A sample
blank and control sample were included in each analy-
tical schedule. Approximately 5 ml warm water (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 อุปกรณ์เครื่องมือ
สาม hplc ในห้องปฏิบัติการ di € erent ได้
ใช้ในการศึกษา: ระบบด้วยตนเองประกอบด้วยสอง 510
ปั๊ม rheodyne 7125 หัวฉีด, 680 ควบคุม 8_10
รัศมีโมดูลการบีบอัด (น้ำ, มิลฟอ ma, usa)
และ spd-m10a เครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอดควบคุมด้วยซอฟต์แวร์ระดับ
(Shimadzu, โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ระบบ-
อื่น ๆTEMS ถูกรวม hp1050 และ hp1100 เครื่องมือ
ตามลำดับมาตรการ autosampler, สี่
ปั๊ม degasser ออนไลน์และเครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด con-
trolled กับซอฟต์แวร์ ChemStation (Hewlett Packard,
Waldbronn, เยอรมนี).
เริ่มต้นการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับการใช้ประโยชน์จาก c18 แก้ไข, 5
มม. มม. คอลัมน์ตลับ 100_8, ไม่ใช่ endcapped 10%
ปริมาณคาร์บอน (น้ำ) หลายคอลัมน์อื่น ๆ c18
การประเมินและเลือกดังต่อไปนี้ต่อการ investi-
gation: โนมูระ develosil ODS มิลลิกรัม-5, 5 มม. 250_4.6
มม. ปลายปกคลุมด้วยปริมาณคาร์บอนหนาแน่น 15% ต่ำแกนด์
ความหนาแน่น (Phenomenex, ทอร์รันซ์, usa); YMC
aq312, 5 มม. 150_4.6 มม. endcapped น้ำ,
โหลด 16% คาร์บอน (INC YMC, วิลมิง, usa);.
eps แพลทินัม 3 มม. มม. 53_7, ไม่ใช่ endcapped ลดลง
ความหนาแน่นแกนด์ (alltech กวาง® eld ของ il, สหรัฐอเมริกา)และคอลัมน์ luna
phenyl-c6, 5 มม. 250_4.6 มม. , 18% คาร์บอน
(Phenomenex) ประเมิน aliphatic/aro- รวมของ
เมติหัวกะทิ คอลัมน์ luna c8, 5 มม. 250_4.6
มม. endcapped ป้องกันน้ำ 13.5% คาร์บอน
(Phenomenex) นอกจากนี้ยังได้รับเลือกในการศึกษาต่อ.
2.2 น้ำยา
น้ำ (> 18 ม. ), กรด pantothenic-d, hemicalcium
เกลือ (ซิก, เซนต์หลุยส์, mo, usa) acetonitrile (hplc
เกรด BDH, เมอร์คpoole, uk) โพแทสเซียมไดไฮโดรเจน
ออร์โธฟอสเฟตกรด orthophosphoric และน้ำแข็ง
กรดอะซิติก (ar เกรด BDH). ฟอสเฟต
เอ้อ bu € (0.1 เมตร ph 2.25) ได้รับการจัดทำขึ้นโดย
13.61 กรัมละลายในน้ำ kh2po4 (1.0 ลิตร) และปรับ
ph ด้วย H3PO4 กรดอะซิติก (3.0% v / v) ได้รับการจัดทำขึ้นโดย
เจือจาง 15 มล. 0.5 ลิตรที่มีน้ำ.
เฟสเคลื่อนที่ได้รับการจัดทำขึ้นโดยผสมภายหลังการแยก
® ltration และ degassing,ฟอสเฟต bu €เอ้อ (970 มล.
) และ acetonitrile (30 มล. ) ทางเลือก bu €เอ้อ: สัดส่วน acetonitrile
ตัวชะเตรียมตามที่ต้องการ
2.3. การจัดทำมาตรฐาน
หุ้น pantothenic มาตรฐานกรด (500 mg / ml):
ประมาณ 140 มิลลิกรัมแคลเซียมแพนโทธีแห้ง
ที่ 105_c เป็นเวลา 2 ชั่วโมงกว่าซิลิกาเจลในเตาอบสูญญากาศ
หลังจากการทำความเย็นใน dessicator, 108.8 มิลลิกรัมถูกชั่งน้ำหนักอย่างถูกต้อง
ในถ้วยแก้วขนาดเล็กมันจะถูกกลืนหายไปในปริมาณน้อย
ของน้ำและถ่ายโอนไปยังปริมาตร¯ถาม (200 มล. )
ล้างถ้วยแก้วที่มีเอทานอล: น้ำ (1:1 v / v) และทำเพื่อให้
ปริมาณ stoppered และผสม 4 มล. aliquots
ถูกจ่ายเข้าไปในขวดสกรูที่ปกคลุมและเก็บไว้ที่
ÿ18_c มาตรฐานหุ้นมีเสถียรภาพเป็นเวลา 6 เดือน
มาตรฐานการทำงาน (5.0 และ 10.0 mg / ml). จัดทำขึ้นโดย
เจือจาง 1:100 ของหุ้นและ 1:50 ตามลำดับด้วยน้ำ
แยก¯ปริมาตรถาม (50 มล. ) มาตรฐานเหล่านี้
เตรียมสดใหม่ทุกวันและทิ้งหลังการใช้งาน.
2.4 ตัวอย่างการเตรียม
ตัวอย่างผง (0.5 กรัม) ได้รับการชั่งน้ำหนักอย่างถูกต้องเป็น
ทิ้งจบการศึกษาในหลอด centrifuge (10 มล. )
ตัวอย่างตัวอย่างที่ว่างเปล่าและการควบคุมถูกรวมอยู่ใน ANALY-
ตารางเงินบาทในแต่ละ ประมาณ 5 ml น้ำอุ่น (<40_c)
ถูกเพิ่มเข้ามาด้วยการผสมน้ำวนและได้รับอนุญาตที่จะยืน
20 นาที 0.5 มล. กรดอะซิติก (3% v / v) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ
ตัวอย่างการ vortex และได้รับอนุญาตที่จะยืนเป็นเวลา 20 นาที
ตัวอย่างที่ทำแล้วปริมาณ (10.0 มล. ) และ CEN-
trifuged ที่ 3500 รอบต่อนาที (1000 กรัม) เป็นเวลา 15 นาที หาร (1 ±
2 มล. ) ถูกถอนออกจากซีรั่มเฟสน้ำ
(หลีกเลี่ยงไขมันและตะกอน) clari ®เอ็ดผ่าน 0.45
202 dc Woollard ตอัล/ เคมีอาหาร 69 (2000) 201 ± 208 มม.
เยื่อ® lter (sartorius, Goettingen, เยอรมนี)
แนบมากับ 10 มล. เข็มฉีดยาที่ใช้แล้วทิ้ง Luer ปลายและ
® ltrate เก็บใน 1.8 มล. สกรูปกคลุม autosampler
ขวด สารสกัดจากนั้นก็พร้อมสำหรับการฉีด.
ตัวอย่างของความสม่ำเสมอยากจนตัวอย่าง 5 กรัมถูก
ชั่งน้ำหนักใน 100 มล. ¯ถามและการวิเคราะห์ตามสัดส่วน
.
2.5 การวิเคราะห์ hplc
การศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพเบื้องต้นได้รับการดำเนินการกับคอลัมน์
แก้ไข ต่อไปนี้การกวาดล้างของการวิเคราะห์
คอลัมน์ที่มีอย่างน้อย 15 เล่ม acetonitrile (100%)
และ acetonitrile: น้ำ (50:50 v / v) ระบบเป็น equili-
brated ด้วยเฟสเคลื่อนที่ (ฟอสเฟต bu €เอ้อ ph
2.25: acetonitrile, 97:3 v / v) อัตรา isocratic ¯โอ๊ยเป็น adjus-
ted ระหว่าง 1 และ 2 มล. / นาทีการชะกรด pantothenic
มาตรฐานภายในแคลิฟอร์เนีย 10 ± 20 นาทีและเพื่อรักษาความดันที่เหมาะสม
ปฏิบัติการ มาตรฐานการทำงาน (10 ± 20 มล. ) มี
ฉีดจนการตอบสนองที่ประสบความสำเร็จทำซ้ำ
ตามด้วยสารสกัดจากตัวอย่าง โคเป็นอย่างต่อเนื่องจนกว่า
ที่สำคัญ eluting ปลายยอดเป็นที่รู้จัก
ออก (35 นาทีแคลิฟอร์เนีย) ก่อนที่จะฉีดตัวอย่างต่อไป.
ต่อไปนี้ความสำเร็จของตารางตัวอย่างเทือกเขา-
UMN ถูกไล่ออกตามลำดับด้วย acetonitrile: น้ำ
(50:50 v / v) น้ำ (100%), acetonitrile: น้ำ (50:50 v / v) และ
® Nally acetonitrile (100%) สำหรับการจัดเก็บคอลัมน์
ระหว่างการทำงาน .
หลายช่องตรวจจับยูวีที่ 200, 205 และ 240 นาโนเมตร
ถูกนำมาใช้เป็นประจำในระหว่างการวิเคราะห์ (ช่องคู่ Detec-
tion ที่ 200 และ 205 นาโนเมตรเป็นความต้องการขั้นต่ำที่จะช่วยให้
สเปกตรัม ratioing, มีการตรวจสอบที่ 240 นาโนเมตร con-
sidered สมควรในการที่จะตรวจสอบต่อไปกรณีที่ไม่มีการรบกวน
ของที่มีศักยภาพ) ในระหว่างการศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพ
สเปกตรัมสแกนได้มากับยอดเขาทั้งหมดที่น่าสนใจ
ทั้งสำหรับการประเมินผลการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของเป้าหมายและตรวจสอบสิ่งของ
ศักยภาพ.
ตามข้อมูลที่ได้มาจากการแก้ไข STU-
ตายคอลัมน์ทางเลือกที่ได้รับการประเมิน วิเคราะห์
เงื่อนไขที่เทียบเคียงสำหรับ aq312 YMC, luna
phenyl-c6 และ luna c8 คอลัมน์ยกเว้นเล็กน้อย
Modi ไพเพอร์®ในอัตรา¯โอ๊ย develosil ODS มิลลิกรัม-5
คอลัมน์ได้รับการดำเนินการที่เนื้อหา acetonitrile สูงขึ้น (5%
v / v) ในขณะที่กำไรต่อหุ้นทองคำถูกปรับให้เหมาะสมกับการ Phos-
phate bu €เอ้อ (100%) เพียงอย่างเดียว สำหรับคอลัมน์เหล่านี้มันเป็น
สมควรลบองค์ประกอบไว้ด้วย trile acetoni-
(100%) เป็นเวลา 5 นาที,ต่อไปนี้ elution ของแพนโทธี
ก่อนที่จะมีการปรับสมดุลอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเริ่มต้น.
2.6
การคำนวณสำหรับการวิเคราะห์ประจำปริมาณก็ประสบความสำเร็จด้วย
เดียวระดับมาตรฐานภายนอก: กรด pantothenic (มิลลิกรัมต่อ 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 อุปกรณ์
เครื่อง HPLC ที่สามในห้องปฏิบัติการ erent €ดิถูก
ใช้ในการศึกษา: ระบบด้วยตนเองประกอบด้วยสอง 510
ปั๊ม การอัด rheodyne 7125 ควบคุม 680, 8_10
โมดูลรวมรัศมี (น้ำ ลฟอร์ด MA, USA)
และจับเรย์ไดโอด SPD M10A ที่ควบคุมด้วย
คลาซอฟต์แวร์ (Shimadzu โตเกียว ญี่ปุ่น) อื่น ๆ sys-
สินได้รวมเครื่องมือ HP1050 และ HP1100
เพจตามลำดับ autosampler, quaternary
ปั๊ม degasser ง่ายดาย และไดโอดอาร์เรย์จับ แอร์-
trolled ChemStation ซอฟต์แวร์ (Hewlett Packard,
Waldbronn เยอรมนี) .
เริ่มต้นศึกษาเกี่ยวข้องกับการใช้การแก้ไข C18, 5
mm, 100_8 mm ตลับคอลัมน์ ไม่ใช่-endcapped, 10%
คาร์บอน (น้ำ) คอลัมน์ C18 อื่น ๆ หลายได้
ประเมิน และเลือกต่อไปนี้เพิ่มเติม investi-
gation: โนมูระ Develosil ODS-MG-5, 5 mm, 250_4.6
มม. ความหนาแน่นสูงสุดปรบมือ 15% คาร์บอน ลิแกนด์ต่ำ
ความหนาแน่น (Phenomenex รันซ์ CA, USA); YMC
AQ312, 5 mm, 150_4.6 mm, hydrophilic endcapped,
โหลด 16% คาร์บอน (YMC Inc. วิลมิ NC, USA);
ลดกำไรต่อหุ้นแพลตตินั่ม 3 mm, 53_7 mm ไม่ใช่-endcapped
ความหนาแน่นของลิแกนด์ (Alltech, ®กวาง eld, IL สหรัฐอเมริกา), และเป็นลูน่า
คอลัมน์ Phenyl C6, 5 mm, 250_4.6 mm, carbon
(Phenomenex) 18% ประเมินสำหรับพักของรวม aliphatic/ส-
ใวเอชไอมาติก คอลัมน์ Luna C8, 5 mm, 250_4.6
มม. hydrophobic shielded endcapped, 13.5% carbon
(Phenomenex) ถูกเลือกสำหรับการศึกษา.
2.2 Reagents
น้ำ (> 18 M), hemicalcium กรดแพนโทธีนิค d
เกลือ (ซิก เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) acetonitrile (HPLC
เกรด BDH เมอร์ค Poole, UK), โพแทสเซียมไฮโดรเจน
orthophosphate, orthophosphoric กรด และน้ำแข็ง
กรดอะซิติก (AR เกรด BDH) .
ฟอสเฟตบุ€เอ้อ (0.1 M, pH 2.25) ถูกเตรียมโดย
ยุบ g 13.61 KH2PO4 ในน้ำ (1.0 ลิตร) และปรับ
ค่า pH กับ H3PO4 กรดอะซิติก (3.0% v/v) ถูกเตรียมโดย
diluting 15 ml ใน l 0.5 กับน้ำ
ระยะเคลื่อนที่เตรียม โดยผสม ต่อไป
แยก ® ltration และ degassing ฟอสเฟตบุ€เอ้อ (970
ml) acetonitrile (30 มล.) และ บุสำรอง€เอ้อ: acetonitrile
eluent ที่สัดส่วนเตรียมไว้เป็นที่ต้องการ
2.3 เตรียมสอบมาตรฐาน
หุ้นแพนโทธีนิคกรดมาตรฐาน (500 mg/ml):
ที่แห้งประมาณ 140 มิลลิกรัมแคลเซียม pantothenate
ที่ 105_C สำหรับ h 2 ผ่านซิลิก้าเจลในเตาสูญญากาศ หลังจาก
ให้เย็นใน dessicator, 108.8 mg ถูกแม่นยำน้ำหนัก
ลงในบีกเกอร์ขนาดเล็ก มันถูกละลายในปริมาตรเล็ก ๆ
น้ำ และโอนย้ายไป ¯ask volumetric (200 มล.),
ล้างบีกเกอร์ ด้วยเอทานอล: น้ำ (1:1 v/v) และทำการ
ปริมาตร stoppered และผสมอย่างละเอียด aliquots 4 ml
คำเป็น vials ปรบมือสกรู และเก็บที่
ÿ18_C มาตรฐานหุ้นมีเสถียรภาพสำหรับ 6 เดือน.
ทำงานมาตรฐาน (5.0 และ 10.0 mg/ml): โดย
เจือจาง 1: 100 หุ้นและ 1:50 ลำดับน้ำ
ใน volumetric แยก ¯asks (50 มล.) มาตรฐานเหล่านี้
เตรียมสดใหม่ทุกวัน และถูกยกเลิกหลังจากใช้
2.4 ตัวอย่างเตรียม
ผงตัวอย่าง (0.5 กรัม) มีน้ำหนักถูกต้องเป็นการ
หลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงทิ้ง จบการศึกษา (10 มล.) ตัวอย่าง
ว่าง และควบคุมตัวอย่างรวมอยู่ในแต่ละ analy
กำหนดการธนบัตรบาท ประมาณ 5 ml น้ำอุ่น (< 40_C)
เพิ่ม ด้วยผสม vortex และอนุญาตให้ยืนสำหรับ
20 นาที 0.5 ml กรดอะซิติก (3% v/v) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละ
ตัว อย่าง vortexed และอนุญาตให้ยืนสำหรับ 20 นาที ใน
ตัวอย่างแล้วทำให้ระดับเสียง (10.0 ml) และ cen-
trifuged ที่ 3500 rpm (1000 กรัม) ใน 15 นาที ส่วนลงตัว (1±
2 ml) ถูกถอนจากเฟสเซรั่มอควี
หลีก (เลี่ยงไขมันและตะกอน), clari ® ed ผ่าน 0.45 เป็น
202 ดีซี Woollard et al / เคมีอาหาร 69 (2000) 201±208
มม.เยื่อ ® และวัสดุเป็น (บริษัทซาร์โทเรียส Goettingen เยอรมนี)
กับเป็น 10 ml luer ก้นทิ้งเข็ม และ
® ltrate รวบรวมไว้ใน autosampler ปรบมือสกรู 1.8 ml
คอนแทค สารสกัดถูกแล้วพร้อมสำหรับฉีด
ตัวอย่างของ homogeneity ดี ตัวอย่าง 5 กรัมถูก
น้ำหนัก ¯ask 100 ml และวิเคราะห์ปรับ
ตาม
2.5 วิเคราะห์ HPLC
ดำเนินการศึกษาเบื้องต้นการเพิ่มประสิทธิภาพด้วย
คอลัมน์แก้ไข ต่อล้างข้อมูลที่วิเคราะห์
คอลัมน์ acetonitrile (100%) ปริมาณน้อย 15
acetonitrile:water (คนละครึ่ง v/v), และระบบ equili-
brated กับระยะเคลื่อน (ฟอสเฟตบุ€เอ้อ pH
2.25:acetonitrile, 97:3 v/v) Isocratic คิดอัตรา ¯ow ถูก adjus-
ted ไประหว่าง 1 และ 2 ml/min ให้ elute กรดแพนโทธีนิค
มาตรฐานภาย ใน ca. 10±20 นาที และรักษาเหมาะ
แรงดันใช้งาน มีมาตรฐานการทำงาน (10±20 มล)
ฉีดจนสำเร็จตอบจำลอง,
ตาม ด้วยสารสกัดจากตัวอย่าง Chromatography ถูก
ต่อเนื่องจนถึงเป็นหลัก สาย eluting พีคไม่ทราบถูก
เอา (ca 35 นาที) ก่อนถัดไปตัวอย่างฉีด
ต่อความสมบูรณ์ของตัวอย่างกำหนดการ คอลัมน์-
umn ถูกลบตามลำดับกับ acetonitrile:water
(คนละครึ่ง v/v), น้ำ (100%) acetonitrile:water (คนละครึ่ง v/v)
และ ® acetonitrile nally (100%) สำหรับคอลัมน์เก็บ
ระหว่างทำ
Multichannel UV ตรวจ 200, 205 และ 240 nm
ใช้เป็นประจำในระหว่างการวิเคราะห์ (detec สองช่อง-
สเตรชันที่ 205 และ 200 nm มีความต้องการขั้นต่ำ
ให้สเปกตรัม ratioing มีการตรวจสอบที่ 240 nm คอน-
sidered สมควรเพื่อไปตรวจสอบการขาดงาน
ของศักยภาพ interferences) ในระหว่างการศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพ,
สเปกตรัมสแกนสินทรัพย์สำหรับยอดทั้งหมดน่าสนใจ,
ทั้งประเมินความบริสุทธิ์ ของ analyte เป้าหมาย และถึง
เป็นสิ่งประดิษฐ์ได้
ตามข้อมูลที่ได้มาจาก stu แก้ไข-
ตาย คอลัมน์อื่นได้ประเมิน วิเคราะห์
เงื่อนไขที่ได้เปรียบสำหรับ YMC AQ312, Luna
Phenyl C6 และ Luna C8 คอลัมน์ ยกเว้นวิชารอง
modi ® เป็นของหายากในอัตรา ¯ow Develosil ODS-MG-5
คอลัมน์ถูกดำเนินที่สูง acetonitrile เนื้อหา (5%
v/v), ในขณะที่ EPS แพลทินัมเหมาะงานกราฟฟิกและ phos
€phate บุเอ้อ (100%) เพียงอย่างเดียว สำหรับคอลัมน์เหล่านี้ มันเป็น
สมควรเอาสะสมประกอบ ด้วย acetoni-
trile (100%) สำหรับ 5 นาที ต่อ elution ของ pantothenate,
ก่อน equilibration ใหม่ภายใต้เงื่อนไขเริ่มต้น.
2.6 คำนวณ
สำหรับวิเคราะห์ประจำ สำเร็จการวิเคราะห์หาปริมาณด้วยการ
มาตรฐานภายนอกระดับเดียว: กรดแพนโทธีนิค (มิลลิกรัม/100

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . อุปกรณ์
สาม hplc ตราสารใน di €™ erent ห้องปฏิบัติการมี
ซึ่งจะช่วยนำไปใช้ในการศึกษา:คู่มือระบบซึ่งประกอบด้วยสอง 510
เครื่องปั๊มน้ำนม, rheodyne - 7125 เครื่องฉีด, 680 คอนโทรลเลอร์, 8 ___ 10
รัศมีการบีบอัดโมดูล(น้ำ, Milford Sound , MA , USA )
และที่เป็น ประเภท SPD - ม. 10 ที่ไดโอดวัด อุณหภูมิ ความหลากหลายอุปกรณ์ตรวจจับการควบคุมด้วย
Class ซอฟต์แวร์( shimadzu ,โตเกียว,ญี่ปุ่น) อื่นๆ SYS -
ได้เงื่อนไขในการเป็นแบบอินทิเกรตรุ่น HP 1050 และ HP 1100
ซึ่งจะช่วยงานฝึกงานตามลำดับ,ประกอบด้วย autosampler ,ยุคที่สี่
เครื่องปั๊มน้ำนม, On - line array degasser ไดโอดวัด อุณหภูมิ และอุปกรณ์ตรวจจับ, - - -
trolled chemstation พร้อมด้วยซอฟต์แวร์(, Hewlett Packard ,,
waldbronn ,เยอรมนี)..
เริ่มต้นจากการศึกษามีส่วนเกี่ยวข้องกับการใช้การแก้ไข C 18 , 5
มม., 100 _ 8 มม.กระสุนคอลัมน์,ไม่ endcapped , 10%
ปริมาณคาร์บอน(น้ำ) 18 คอลัมน์ C อื่นๆหลายคน
ตามมาตรฐานได้รับการประเมินและต่อไปนี้ที่เลือกสำหรับ investi -
gation :อื่นๆ develosil ODS - มก. - 5 , 5 มม., 250 __ _ 4.6
มม.ปลายมีความหนาแน่นปกคลุมไปด้วย, 15% ปริมาณคาร์บอนต่ำ ligand
ความหนาแน่น( phenomenex , torrance , CA ,สหรัฐอเมริกา), ymc
aq312 , 5 มม., 150 ม.ม.__ _ 4.6 ,เคลือบ endcapped ,
16% คาร์บอนโหลด( ymc , Inc ., Wilmington , NC , USA );
แพลตตินั่ม EPS , 3 มม., 53 _ 7 ม.ม.,ไม่ endcapped ,ลดความหนาแน่น
ligand ( alltech ,กวาง,แอบ, IL ,สหรัฐอเมริกา),คอลัมน์และ Luna
phenyl - c 6 ที่ 5 มม. 250 __ _ 4.6 มม. 18% คาร์บอน
( phenomenex )ได้รับการประเมินสำหรับตัวเลือกรวมอะลิฟาติกไฮโดรคาร์บอน/ aro -
MATIC . Luna c 8 คอลัมน์ที่ 5 มม. 250 __ _ 4.6
มม.หุ้มฉนวน endcapped ถูกขับ 13.5% คาร์บอน
( phenomenex )ถูกเลือกสำหรับการศึกษาต่อไป.
2.2 ยัง reagents
น้ำ(> 18 ม.)กรด D - ตินจัดอยู่ hemicalcium
เกลือ( Six Sigma St Louis , MO ,สหรัฐอเมริกา) acetonitrile (เกรด hplc
bdh merckpoole ,สหราชอาณาจักร),โปแตสเซียม dihydrogen
orthophosphate , orthophosphoric กรดและธารน้ำแข็ง
กรดอะซิติกชนิดตะกั่วกรดแบบซีล(อาร์เจนตินา คุณภาพ , bdh )..
ฟอสเฟต BU €™ ER ( 0.1 ม., pH 2.25 )เตรียมไว้ด้วย
หายไป 13.61 กรัม KH 2 PO 4 ในน้ำ( 1.0 ลิตร)และการปรับ
pH ด้วย H 3 po4 . แบตเตอรี่ชนิดตะกั่วกรดแบบซีลกรดอะซิติก( 3.0% v / v )ได้จัดทำไว้จาก
diluting 15 มล.เพื่อ 0.5 L พร้อมด้วยน้ำ.
ช่วงมือถือได้โดยการผสมใน ภายหลัง เพื่อ
แยก® ltration และ degassingBU ฟอสเฟต€™ ER ( 970
มล.)และ acetonitrile ( 30 มล.) สัดส่วน BU €™ ER : acetonitrile
eluent ได้เตรียมความพร้อมทางเลือกตามที่ต้องการ
2.3 มาตรฐานการเตรียมการ
หุ้นตินจัดอยู่มาตรฐาน( 500 mg / ML ):
ประมาณ 140 มก. Calcium pantothenate ก็แห้ง
ที่ 105 _c สำหรับ 2 ชั่วโมงกว่าซิลิกาเจลในที่เครื่องดูดฝุ่นเตาอบ หลังจาก
ซึ่งจะช่วยระบายความร้อนใน dessicator 108.8 มก.ก็ต้องชั่งน้ำหนัก
ซึ่งจะช่วยเข้าไปในโถปั่นขนาดเล็กที่ได้อย่างถูกต้องมันก็ละลายได้ในระดับเสียงขนาดเล็กที่
ของน้ำและจะพาท่านไปส่งยังเกี่ยวกับปริมาตรที่ N ห้ามทำขอให้( 200 มล.)โถ
ล้างด้วยเอทานอล:น้ำ( 1 : 1 V / V )และทำให้ระดับเสียง stoppered
และผสมให้ทั่วถึง 4 มล. aliquots
มีน้ำบริสุทธิ์ใน vials แบบสกรูและจัดเก็บไว้ที่ปกคลุมไปด้วย _c .
Y เพื่อแสดง 18 มาตรฐานหุ้นก็มั่นคงให้กับ 6 เดือน.มาตรฐาน
การทำงาน( 5.0 และ 10.0 มก./มล.)ซึ่งได้รับการจัดเตรียมโดย
ซึ่งจะช่วยเจือจางของตลาดหลักทรัพย์ฯ 1 : 100 และ 150 ตามลำดับพร้อมด้วยน้ำ
ในทางปริมาตร N ห้ามทำแบบแยกพื้นที่และขอให้( 50 มล.) มาตรฐานนี้
ซึ่งจะช่วยได้จัดเตรียมขึ้นอย่างสดใหม่ทุกวันและถูกยกเลิกหลังจากใช้.
2.4 ตัวอย่างของการเตรียมการ
ตัวอย่างแป้ง( 0.5 G )ก็ต้องชั่งน้ำหนักกับ
แบบใช้แล้วทิ้งได้อย่างแม่นยำจบการศึกษาท่อ centrifuge ( 10 มล.) ตัวอย่าง
ว่างไว้และการควบคุมตัวอย่างที่มีอยู่ในตารางเวลา analy -
แนวตั้งแต่ละครั้ง ประมาณ 5 มล.( _c < 40 )
เพิ่มการผสมกับสะดือทะเลและได้รับอนุญาตให้วาง
20 นาที 0.5 มล.กรดอะซิติกกรด( 3% v / v )ได้ถูกเพิ่มลงในแต่ละ
ตัวอย่าง, vortexed และได้รับอนุญาตให้อยู่ใน 20 นาทีที่
ตัวอย่างมีแล้วทำให้ในการปรับระดับเสียง( 10.0 มล.)และ Central Pier -
trifuged ที่ 3500 รอบต่อนาที( 1000 G )สำหรับ 15 นาทีที่ aliquot ( 1 ±
2 มล.)เป็นการถอนเงินออกจากที่ที่เกิดจากน้ำเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ขั้นตอน
(การหลีกเลี่ยงการ( lipid และตะกอน), clari ® Ed ด้วย 0.45
202 D . C . woollard et al ./อาหารเคมี 69 ( 2000 ) 201 ± 208
มม.เยื่อ®,แผ่นกรองเมื่อครบกำหนด( sartorius , goettingen ,เยอรมนี)
ติดอยู่กับที่ 10 มล. luer แบบแบบใช้แล้วทิ้งกระบอกฉีดและ
® ltrate เก็บรวบรวมใน 1.8 มล.สกรูปกคลุมไปด้วย autosampler
ขวด. ดึงก็พร้อมสำหรับหัวฉีด.
สำหรับตัวอย่างของซึ่งประกอบขึ้นด้วยส่วนที่เหมือนกันผู้น่าสงสาร 5 ตัวอย่าง G เป็น
ชั่งน้ำหนักใน 100 มล. N ห้ามทำถามและการวิเคราะห์ที่ปรับขยายได้
ซึ่งจะช่วยให้สอดคล้อง.
2.5 การวิเคราะห์ hplc
ตามมาตรฐานการศึกษาการใช้ประโยชน์สูงสุดเบื้องต้นได้ดำเนินการกับคอลัมน์
ซึ่งจะช่วยแก้ปัญหาได้ ต่อไปนี้กำลังเก็บกวาดของการวิเคราะห์
คอลัมน์ที่มีอย่างน้อย 15 เล่มของ acetonitrile ( 100% )
และ acetonitrile :น้ำ( 50 : 50 V / V ),ระบบ equili -
brated พร้อมด้วยโทรศัพท์มือถือช่วง(ฟอสเฟต BU €™ ER , pH
2.25 : acetonitrile , 97 : 3 V / V ) อัตราต isocratic N ห้ามทำเป็น adjus -
เท็ดในระหว่าง 1 และ 2 มล./นาทีเพื่อ elute กรดตินจัดอยู่
มาตรฐาน ภายใน ไม่ 10 ± 20 นาทีและเพื่อรักษาระดับความดัน
ทำงานเหมาะสม. การทำงานมาตรฐาน( 10 ,± 20 มล.)มี
แบบฉีดขึ้นรูปที่เกิดขึ้นซ้ำเดิมได้จนกว่าจะถึงการตอบสนองเป็นความสำเร็จ
ตามด้วยสารสกัดจากสาหร่ายตัวอย่าง. chromatography
ซึ่งจะช่วยได้อย่างต่อเนื่องจนสูงสุดที่ไม่รู้จัก eluting ช่วงสำคัญที่เป็น
ซึ่งจะช่วยถอดออก( CA 35 นาที)ก่อนแบบฉีดตัวอย่างต่อไป.
ต่อไปนี้การกำหนดตารางเวลาลิ้มลองได้ที่โรงเรียน -
umn ก็หมดสิ้นตามลำดับพร้อมด้วย acetonitrile :น้ำ
( 50 : 50 V / V ),น้ำ( 100% ), acetonitrile :น้ำ( 50 : 50 v / v )
และ® nally acetonitrile ( 100% )สำหรับคอลัมน์การจัดเก็บข้อมูล
ระหว่างการวิ่งแต่ละ.
การตรวจจับแบบมัลติแชนเนล UV ที่ 200 , 205 และ 240 nm
ซึ่งจะช่วยได้นำมาใช้อย่างสม่ำเสมอในระหว่างการวิเคราะห์( dual channel detec -
การที่ 200 และ 205 นาโนเมตรเป็นอย่างน้อยต้อง
ซึ่งจะช่วยทำให้เป็นผี ratioing ,พร้อมด้วยการตรวจสอบที่ 240 NM - - -
sidered สมควรในการตรวจสอบกรณีที่มีสัญญาณรบกวนที่อาจเกิดขึ้นของ
ซึ่งจะช่วยเพิ่มเติม) ในระหว่างการศึกษาการใช้ประโยชน์สูงสุดจะสแกนหา
คลื่นแสงความถี่ได้มาจากสำหรับยอดเขาทั้งหมดที่น่าสนใจ
ทั้งสำหรับการประเมินผลความบริสุทธิ์ผุดผ่องของ analyte เป้าหมายและงานฝีมือ ศักยภาพ
จอมอนิเตอร์.
ตามข้อมูลได้รับจากการแก้ไขที่รับ -
ตายคอลัมน์ทางเลือกเป็นการประเมิน การวิเคราะห์
ตามมาตรฐานเงื่อนไขก็เท่ากันสำหรับติดตั้งสวิชเกียร์ ymc 312 คอลัมน์ Luna
phenyl - c 6 และ Luna c 8 ยกเว้นในอัตราน้อย
ทางมหาวิทยาลัย Modi ®อีกมากมายใน N ห้ามทำต คอลัมน์ 5
โชว์เฟอร์ ODS - มก. develosil ที่ได้รับการผ่าตัดที่เนื้อหา acetonitrile สูงกว่า( 5%
v / v )ในขณะที่แพลตตินั่ม EPS ที่ปรับแต่งได้ด้วย phos -
phate BU €™ ER ( 100% )ตามลำพัง สำหรับคอลัมน์นี้ก็สมควร
ซึ่งจะช่วยในการลบคอมโพเนนต์ยังคงอยู่กับ acetoni -
trile ( 100% )เป็นเวลา 5 นาทีต่อไปนี้: elution ของ Calcium pantothenate
ก่อนอีกครั้ง equilibration ภายใต้ เงื่อนไขแรก.
2.6 . การคำนวณ
ซึ่งจะช่วยในการวิเคราะห์เป็นประจำ quantitation เป็นความสำเร็จด้วย
แบบ Single - ระดับมาตรฐานตินจัดอยู่ ภายนอก (มก./ 100