4. DiscussionIn routine laboratorie

4. Discussion
In routine laboratories, the detection of “nondeletion” alpha globin
chain variants in populationswith specificmutation spectrumismainly
performed using traditional well-established PCR-based methods.
These methods, however, target a specific mutation each time and
represent a time-consuming strategy in most populations [7]. More
advantageous in terms of time-saving and costs, especially, when
genotyping samples with a large spectrum of globin gene mutations,
are methods locating or excluding nucleotide variations by evaluating
the melting behaviour of selected PCR amplicons within a gene region.
These methods, however, do not provide a definitive diagnosis, and all
samples must be characterized using another appropriate method to
specify the nucleotide variation [8].
Here,we present a simple, less laborious and cost-effective genotyping
platform for identifying 13 known “nondeletion” alpha globin gene
mutations using as tools PCR and PEXT reaction combinedwith dipstick
assay (biosensor). The method comprises PCR amplification of a single
1087 bp fragment for each HBA1 and HBA2 gene using any conventional
thermal cycler; multiplex PEXT reaction of few (10) cycles, using
unpurified amplification product as a template, to incorporate biotin
into extended allele-specific primers and, finally, visual detection of
the reaction products within minutes by the dipstick biosensor. The
genotype is simply assigned by observing each pair of spots. For any
particular mutation, a normal (wild-type) individual will produce red
colour at the left spot only, whereas a case that is homozygous for a
mutation will produce colour only at the right spot of the pair. Both
spots will be red if the sample is heterozygous for the mutation. The
entire protocol of the proposedmethod including PCR, primer extension
reaction and the dipstick assay takes about 2 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. สนทนาในห้องปฏิบัติการตามปกติ การตรวจพบ globin อัลฟา "nondeletion"สายย่อยใน populationswith specificmutation spectrumismainlyดำเนินการโดยใช้วิธีแบบดั้งเดิมดีขึ้นผลวิธีการเหล่านี้ อย่างไรก็ตาม เป้าหมายการกลายพันธุ์เฉพาะแต่ละครั้ง และหมายถึงกลยุทธ์ที่ใช้เวลานานในประชากรมากที่สุด [7] เพิ่มเติมประโยชน์ในเงื่อนไขของการประหยัดเวลาและค่าใช้จ่าย โดยเฉพาะ เมื่อตัวอย่าง genotyping กับคลื่นใหญ่ของ globin กลายพันธุ์ของยีนมีวิธีการค้นหา หรือไม่รวมการเปลี่ยนแปลงของนิวคลีโอไทด์ โดยการประเมินพฤติกรรมละลายของ amplicons PCR ที่เลือกภายในบริเวณยีนวิธีการเหล่านี้ อย่างไรก็ตาม ไม่ให้วินิจฉัยทั่วไป และทั้งหมดต้องเป็นลักษณะตัวอย่างโดยใช้วิธีอื่นที่เหมาะสมที่จะการเปลี่ยนแปลงของนิวคลีโอไทด์ [8]ที่นี่ เรานำเสนอง่าย น้อย genotyping ลำบาก และคุ้มค่าแพลตฟอร์มสำหรับการระบุยีนอัลฟา globin ชื่อดัง "nondeletion" 13ใช้เป็นเครื่องมือ PCR และ PEXT ปฏิกิริยา combinedwith dipstick กลายพันธุ์วิเคราะห์ (biosensor) วิธี PCR ขยายของเดียวที่ประกอบด้วย1087 bp ส่วนสำหรับแต่ละ HBA1 และ HBA2 ยีนใช้ได้ปกติความร้อน cycler multiplex PEXT ปฏิกิริยาของไม่กี่รอบ (10) การใช้ผลิตภัณฑ์ขยาย unpurified เป็นแม่ การรวมไบโอตินเป็นไพรเมอร์ allele เฉพาะขยาย และ สุด ท้าย ภาพตรวจผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาภายในนาที dipstick biosensor ที่เพียงแค่มีกำหนดลักษณะทางพันธุกรรม โดยการสังเกตแต่ละคู่ของจุด ใด ๆการกลายพันธุ์ แต่ละคน (ป่าชนิด) ปกติจะผลิตสีแดงสีที่จุดซ้ายเท่านั้น กรณีที่เป็น homozygous สำหรับการการกลายพันธุ์จะผลิตสีที่จุดเหมาะสมของการจับคู่ ทั้งสองอย่างจุดจะเป็นสีแดงถ้าตัวอย่างเป็น heterozygous สำหรับการกลายพันธุ์ ที่โพรโทคอทั้งหมดของ proposedmethod รวมทั้ง PCR ขยายพื้นปฏิกิริยาและทดสอบ dipstick ใช้ 2 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.
การอภิปรายในห้องปฏิบัติการประจำการตรวจสอบของ"nondeletion" อัลฟา globin
สายพันธุ์ในห่วงโซ่ populationswith specificmutation spectrumismainly
ดำเนินการโดยใช้แบบดั้งเดิมที่ดีขึ้นตามวิธี PCR.
วิธีการเหล่านี้อย่างไรก็ตามเป้าหมายการกลายพันธุ์ที่เฉพาะเจาะจงในแต่ละครั้งและเป็นตัวแทนของกลยุทธ์ที่ใช้เวลานาน
ในประชากรมากที่สุด [7] เพิ่มเติมได้เปรียบในแง่ของการประหยัดเวลาและค่าใช้จ่ายโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อgenotyping ตัวอย่างที่มีคลื่นความถี่ที่มีขนาดใหญ่ของโกลบินการกลายพันธุ์ของยีนจะมีวิธีการตั้งหรือไม่รวมรูปแบบเบื่อหน่ายโดยการประเมินพฤติกรรมการละลายของเลือกamplicons PCR ในภูมิภาคยีน. วิธีการเหล่านี้อย่างไร ไม่ได้ให้การวินิจฉัยที่ชัดเจนและทุกตัวอย่างต้องมีลักษณะการใช้อีกวิธีการที่เหมาะสมในการระบุการเปลี่ยนแปลงเบส[8]. นี่เรานำเสนอที่เรียบง่ายลำบากน้อยลงและ genotyping ค่าใช้จ่ายที่มีประสิทธิภาพแพลตฟอร์มสำหรับการระบุ13 ที่รู้จักกัน "nondeletion" อัลฟา globin ยีนกลายพันธุ์ที่ใช้เป็นเครื่องมือในการPCR และ PEXT ปฏิกิริยาร่วมกับการใช้ dipstick ทดสอบ (ไบโอเซนเซอร์) วิธีประกอบด้วยขยาย PCR ของเดียวส่วน1,087 bp สำหรับแต่ละ HBA1 และยีน HBA2 ใช้ใด ๆ ธรรมดาCycler ความร้อน ปฏิกิริยา PEXT multiplex ไม่กี่ (10) วงจรโดยใช้ผลิตภัณฑ์ขยายunpurified เป็นแม่แบบในการรวมไบโอตินลงไปในไพรเมอร์ขยายเฉพาะอัลลีลและในที่สุดการตรวจสอบภาพของผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาภายในไม่กี่นาทีโดยdipstick ไบโอเซนเซอร์ พันธุ์ที่ได้รับมอบหมายโดยการสังเกตเพียงคู่ของแต่ละจุด สำหรับการใด ๆการกลายพันธุ์โดยเฉพาะอย่างยิ่งปกติ (ป่าชนิด) ของแต่ละบุคคลจะผลิตสีแดงสีที่จุดซ้ายเท่านั้นในขณะที่กรณีที่เป็นhomozygous สำหรับการกลายพันธุ์จะผลิตสีเฉพาะในจุดที่เหมาะสมของทั้งคู่ ทั้งสองจุดจะเป็นสีแดงถ้าตัวอย่างเป็น heterozygous สำหรับการกลายพันธุ์ โปรโตคอลทั้งหมดของ proposedmethod PCR รวมทั้งการขยายไพรเมอร์ปฏิกิริยาและการทดสอบdipstick ใช้เวลาประมาณ 2 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . การอภิปราย
ในงานประจำของห้องปฏิบัติการ การตรวจหาของ " nondeletion " อัลฟาโกลบิน

specificmutation โซ่พันธุ์ใน populationswith spectrumismainly โดยใช้เทคนิคแบบดั้งเดิมที่ใช้วิธีการที่ดี .
เหล่านี้วิธีการ แต่เป้าหมายการกลายพันธุ์เฉพาะในแต่ละครั้ง และใช้เวลานานในกลยุทธ์
เป็นตัวแทนของประชากรมากที่สุด [ 7 ] เพิ่มเติม
ได้เปรียบในแง่ของการประหยัดเวลาและต้นทุนโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อ
เขตตัวอย่างที่มีคลื่นขนาดใหญ่ของ sequence เป็นวิธีการติดตั้ง หรือการกลายพันธุ์

ยกเว้นการเปลี่ยนแปลงนิวคลีโอไทด์ โดยการประเมินผลพฤติกรรมของ amplicons PCR ที่ละลายภายในยีน เขต .
วิธีการเหล่านี้ แต่ไม่ได้ให้วินิจฉัย และตัวอย่างทั้งหมด
ต้องถูกกำหนดใช้วิธีการอื่นที่เหมาะสม

การระบุยีนที่ [ 8 ]
นี่เรา ปัจจุบัน ง่าย ไม่ลำบากและมีประสิทธิภาพแพลตฟอร์มสำหรับการระบุเขต
13 รู้จัก " nondeletion " แอลฟาโกลบินยีน
การกลายพันธุ์โดยใช้เป็นเครื่องมือในการศึกษาปฏิกิริยา pext ทุกคนมีสี
assay ( มันสำปะหลัง ) วิธีประกอบด้วย PCR แบบเดียว
และ BP ส่วนสำหรับแต่ละ hba1 และยีน hba2 ใช้ปกติ
Thermal cycler ;ปฏิกิริยา pext multiplex น้อย ( 10 ) วงจรโดยใช้
ผลิตภัณฑ์ขยาย unpurified เป็นแม่แบบรวม biotin
เข้าไปขยายเฉพาะอัลลีลไพรเมอร์ และ สุดท้าย ภาพการตรวจหา
ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาภายในไม่กี่นาที โดยชนิดไบโอเซนเซอร์ .
พันธุกรรมเป็นเพียงได้รับมอบหมายจากการสังเกตแต่ละคู่ของจุด สำหรับการกลายพันธุ์ใด
โดยเฉพาะปกติ ( ของแต่ละคน ) จะผลิตสีแดง
ที่ด้านซ้ายจุดเดียว ส่วนกรณีที่มียีน A
การกลายพันธุ์จะผลิตสีในจุดที่ถูกต้องของการจับคู่ ทั้ง
จุดจะเป็นสีแดง ถ้ากลุ่มตัวอย่างที่เป็น homozygous สำหรับการกลายพันธุ์
โปรโตคอลทั้งหมด รวมทั้งผลตรวจปฏิกิริยาส่งเสริม
รองพื้นและคนมีสี ( ใช้เวลาประมาณ 2 ชั่วโมง