2. Materials and Methods2.1. Genera

2. Materials and Methods
2.1. General
Melting points were recorded on an electrothermal MEL-TEMP 3.0 apparatus. UV spectra were measured in methanol on a Beckman Coulter-DU 800 UV-visible spectrophotometer. IR spectra were recorded on a Perkin Elmer system 2000 FT-IR spectrophotometer. 1H and 13C NMR spectra were measured and recorded on a Bruker-400 MHz FT-NMR spectrometer and a Mercury-400 MHz FT-NMR spectrometer. ESI-MS were recorded on a Bruker Daltonics Apex II 30e. The absorbances in bioassays were measured and recorded on a multiplate spectrophotometer (μQuant, BioTek, USA).
2.2. Plant Material, Extraction, and Isolation
P. nodiflora was collected in June 2010 in Tainan, Taiwan, and identified by Professor I. S. Chen, School of Pharmacy of Kaohsiung Medical University, Kaohsiung, Taiwan. A voucher specimen (2010-06-PNM) was deposited at the Herbarium of the Department of Fragrance and Cosmetic Science, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung, Taiwan. The dried aerial part of P. nodiflora (4.6 kg) was chopped and immersed in methanol for three times at room temperature. The mixtures were filtered and concentrated to dryness under reduced pressure, producing a methanolic extract (PNM, 525 g). The PNM (160 g) was taken and further purified with n-hexane and an increasing polarity of EtOAc and MeOH, yielding 8 fractions (Fr. D1–D8). β-Sitosterol and 3,7,4′,5′-tetrahydroxy-3′-methoxyflavone (1) (3.9 mg) were purified by silica column chromatography (CC) with n-hexane : acetone (10 : 1), followed by n-hexane : CH2Cl2 : EtOAc (5 : 2 : 1) from Fr. D2. Hispidulin (8) (4.3 mg) and larycitrin (9) (1.2 mg) were purified by silica CC with n-hexane : EtOAC (2 : 3), followed by RP18 silica gel with acetone : H2O (3 : 2) from Fr. D4. Nodifloretin (2) (9.5 mg) and eupafolin (7) (13.5 mg) were isolated and purified by silica gel with n-hexane : EtOAC : MeOH (7 : 80 : 13), followed by RP18 silica with acetone : H2O (1 : 1) and Sephadex LH-20 CC from Fr. D5. 4′-Hydroxywogonin (3) (10.4 mg), onopordin (4) (21.8 mg), cirsiliol (5) (11.8 mg), and 5,7,8,4′-tetrahydroxy-3′-methoxyflavone (6) (10.3 mg) were isolated and purified by silica gel with n-hexane : EtOAC : MeOH (6 : 69 : 25), followed by RP18 gel with MeOH : H2O (1 : 1), acetone : H2O (3 : 1), and Sephadex LH-20 CC from Fr. D6. Compounds 1–9 were recrystallized and identified by NMR and other spectroscopic data following comparison with values in the literature [11, 13,14].
Another two batches of P. nodiflora were also collected at the same place in different years and seasons as shown in specimen numbers 2007-02-PNM and 2009-06-PNM. 2007-02-PNM was collected in February (spring) 2007 and 2009-06-PNM was collected in June (summer) 2009, respectively, and they were kept at our laboratory for future reference. Together with 2010-06-PNM, the air-dried samples of these three batches were lyophilized and stored at low temperature until analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ทั่วไป
จุดหลอมเหลวถูกบันทึกไว้ในเครื่องเป็น 3.0 อุณหภูมิเมล electrothermal แรมสเป็คตรา UV ถูกวัดในเมทานอลบนเครื่องทดสอบกรดด่าง UV เห็น Beckman Coulter DU 800 IR แรมสเป็คตราถูกบันทึกไว้ในแบบเพอร์เอลเมอระบบ 2000 FT-IR เครื่องทดสอบกรดด่าง แรมสเป็คตรา NMR 1H และ 13C ถูกวัด และบันทึกเป็นสเปกโตรมิเตอร์ Bruker 400 MHz FT-NMR และเป็นปรอท 400 MHz FT-NMR สเปกโตรมิเตอร์ ESI MS ถูกบันทึกบนตัว Bruker Daltonics Apex II 30e วัด และบันทึกไว้ในแบบ multiplate เครื่องทดสอบกรดด่าง (μQuant, BioTek สหรัฐอเมริกา) absorbances ใน bioassays.
2.2 พืชวัสดุ แยก และแยก
P nodiflora ถูกเรียกเก็บในเดือน 2010 มิถุนายนในไทนัน ไต้หวัน และระบุ โดยศาสตราจารย์ I. S. Chen โรงเรียนเภสัชกรรมของมหาวิทยาลัยการแพทย์สง เกาสง ไต้หวัน ตัวอย่างสำคัญคือฝาก (2010-06-PNM) ที่หอพรรณไม้กรมน้ำหอมและเครื่องสำอางวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยการแพทย์สง เกาสง ไต้หวัน ส่วนทางอากาศแห้งของ P. nodiflora (46 กิโลกรัม) สับละเอียด และแช่อยู่ในเมทานอลสำหรับ 3 เท่าที่อุณหภูมิห้อง ส่วนผสมได้กรอง และเข้มข้นกับความแห้งกร้านภายใต้ความดันลดลง การผลิตสารสกัดจาก methanolic (PNM, 525 g) PNM (160 กรัม) ถูกนำมา และเพิ่มเติม บริสุทธิ์ที่ มีเอ็นเฮกเซนและขั้วการเพิ่มขึ้นของ EtOAc และทานอ ผลผลิตเศษ 8 (คุณพ่อง 1 – D8) Β-Sitosterol และ 3,7, 4′5′-tetrahydroxy-3′-methoxyflavone (1) (3.9 มิลลิกรัม) ที่บริสุทธิ์ ด้วยซิลิก้าคอลัมน์ chromatography (CC) ด้วยเอ็นเฮกเซน: อะซิโตน (10:1), ตาม ด้วยเอ็นเฮกเซน: CH2Cl2: EtOAc (5:2:1) จาก D2 คุณพ่อ Hispidulin (8) (4.3 มิลลิกรัม) และ larycitrin (9) (1.2 mg) ที่บริสุทธิ์ ด้วยซิลิก้า CC ด้วยเอ็นเฮกเซน: EtOAC (2:3), ตาม ด้วยเจล RP18 ด้วยอะซีโตน: H2O (3:2) จาก D4 คุณพ่อ Nodifloretin (2) (95 มิลลิกรัม) และ eupafolin (7) (13.5 mg) ถูกแยกต่างหาก และบริสุทธิ์ ด้วยซิลิก้าเจลด้วยเอ็นเฮกเซน: EtOAC: ทานอ (7:80:13), ไปมาแล้ว ด้วยซิลิก้า RP18 ด้วยอะซีโตน: H2O (1:1) และ Sephadex LH 20 CC จาก D5 คุณพ่อ 4′-Hydroxywogonin (3) (10.4 มิลลิกรัม), onopordin (4) (21.8 มิลลิกรัม), cirsiliol (5) (11.8 มิลลิกรัม), และ 5,7,8, 4′-tetrahydroxy-3′-methoxyflavone (6) (10มิลลิกรัม 3) แยกต่างหาก และบริสุทธิ์ ด้วยซิลิก้าเจลด้วยเอ็นเฮกเซน: EtOAC: ทานอ (6:69:25), ไปมาแล้ว โดยเจ RP18 กับทานอ: H2O (1:1), อะซิโตน: H2O (3:1), และ Sephadex LH 20 CC จาก D6 คุณพ่อ สาร 1 – 9 recrystallized และระบุ NMR และข้อมูลด้านอื่น ๆ ต่อไปนี้เปรียบเทียบกับค่าในวรรณคดี [11, 13,14] .
อีกชุดที่สองของพี nodiflora ถูกยังเก็บรวบรวมในเดียวกันในปีต่าง ๆ และฤดูกาลดังที่แสดงในตัวอย่างหมายเลข 2007-02-PNM และ 2009-06-PNM 2007-02-PNM รวบรวมไว้ในเดือนกุมภาพันธ์ (ฤดูใบไม้ผลิ) 2007 และ 2009-06-PNM ถูกรวบรวมในเดือนมิถุนายน (ฤดูร้อน) 2009 ตามลำดับ และพวกเขาถูกเก็บไว้ที่ห้องปฏิบัติการของเราสำหรับการอ้างอิงในอนาคต 2010-06-PNM พร้อม ตัวอย่าง air-dried ของชุดเหล่านี้สาม lyophilized และเก็บที่อุณหภูมิต่ำจนถึงการวิเคราะห์.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 ทั่วไป
จุดหลอมละลายที่ถูกบันทึกไว้ใน electrothermal MEL-TEMP 3.0 อุปกรณ์ UV สเปกตรัมถูกวัดในเมทานอลใน Beckman Coulter-DU spectrophotometer 800 ยูวีที่มองเห็นได้ IR สเปกตรัมที่ถูกบันทึกไว้ในระบบ Perkin Elmer 2000 spectrophotometer FT-IR 1H และ 13C NMR สเปกตรัมถูกวัดและบันทึกไว้ใน Bruker-400 MHz สเปกโตรมิเตอร์ FT-NMR และสเปกโตรมิเตอร์ปรอท-400 MHz FT-NMR ESI-MS ที่ถูกบันทึกไว้ใน 30e Bruker Daltonics เอเพ็กซ์ที่สอง absorbances ในการทดลองทางชีววิทยาถูกวัดและบันทึกไว้ใน spectrophotometer multiplate (μQuant, Biotek สหรัฐอเมริกา)
2.2 โรงงานวัสดุ, การสกัดและการแยก
P. nodiflora ถูกเก็บรวบรวมในเดือนมิถุนายน 2010 Tainan, ไต้หวัน, และมีการระบุโดยศาสตราจารย์เฉิน IS, โรงเรียนเภสัชของเกาสงแพทย์มหาวิทยาลัย, เกาสง, ไต้หวัน ตัวอย่างบัตรกำนัล (2010-06-PNM) ถูกวางที่หอพรรณไม้ของกรมน้ำหอมและเครื่องสำอางค์วิทยาศาสตร์การแพทย์มหาวิทยาลัยเกาสง, เกาสง, ไต้หวัน ส่วนทางอากาศแห้งของพี nodiflora (4.6 กิโลกรัม) ได้รับการสับและแช่อยู่ในเมทานอลสำหรับสามครั้งที่อุณหภูมิห้อง ผสมถูกกรองและความเข้มข้นที่จะแห้งภายใต้ความกดดันที่ลดลง, การผลิตสารสกัดจากเมทานอล (PNM, 525 กรัม) PNM (160 กรัม) ถูกนำตัวและยังบริสุทธิ์กับ n-เฮกเซนและขั้วที่เพิ่มขึ้นของ EtOAc และเมธานอลยอม 8 เศษส่วน (อัส D1-D8) β-Sitosterol และ 3,7,4 ', 5'-tetrahydroxy-3'-methoxyflavone (1) (3.9 มิลลิกรัม) ได้รับการแยกบริสุทธิ์ซิลิกา (CC) กับ n-เฮกเซน: อะซิโตน (10: 1) ตามด้วย n-เฮกเซน: CH2Cl2: EtOAc (5: 2: 1) จากคุณพ่อ D2 Hispidulin (8) (4.3 มิลลิกรัม) และ larycitrin (9) (1.2 มิลลิกรัม) ได้บริสุทธิ์โดยซิลิกา CC กับ n-เฮกเซน: EtOAc (2: 3) ตามด้วยซิลิกาเจล RP18 ด้วยอะซิโตน: H2O (3: 2) จาก Fr . D4 Nodifloretin (2) (9.5 มิลลิกรัม) และ eupafolin (7) (13.5 มิลลิกรัม) ถูกแยกและบริสุทธิ์โดยซิลิกาเจลที่มี n-เฮกเซน: EtOAc: เมธานอล (7: 80: 13) ตามด้วย RP18 ซิลิกาด้วยอะซิโตน: H2O (1 : 1) และ Sephadex LH-20 ซีซีจากคุณพ่อ D5 4'-Hydroxywogonin (3) (10.4 มิลลิกรัม) onopordin (4) (21.8 มิลลิกรัม) cirsiliol (5) (11.8 มิลลิกรัม) และ 5,7,8,4'-tetrahydroxy-3'-methoxyflavone (6) ( 10.3 มิลลิกรัม) ถูกแยกและบริสุทธิ์โดยซิลิกาเจลที่มี n-เฮกเซน: EtOAc: เมธานอล (6: 69: 25) ตามด้วยเจล RP18 กับเมธานอล: H2O (1: 1), อะซิโตน: H2O (3: 1) และ Sephadex LH-20 ซีซีจากคุณพ่อ D6 สารประกอบ 1-9 ถูก recrystallized และระบุ NMR และอื่น ๆ ที่ข้อมูลสเปกโทรสโกต่อไปนี้เมื่อเทียบกับค่าในวรรณคดี [11, 13,14]
อีกสองชุดของพี nodiflora เก็บยังที่สถานที่เดียวกันในปีที่แตกต่างกันและฤดูกาลตามที่ปรากฏ ในจำนวนตัวอย่าง 2007-02-PNM และ 2009-06-PNM 2007-02-PNM ถูกเก็บรวบรวมในเดือนกุมภาพันธ์ (ฤดูใบไม้ผลิ) ปี 2007 และ 2009-06-PNM ถูกเก็บรวบรวมในเดือนมิถุนายน (ฤดูร้อน) 2009, ตามลำดับและพวกเขาจะถูกเก็บไว้ที่ห้องปฏิบัติการของเราสำหรับการอ้างอิงในอนาคต ร่วมกับ 2010-06-PNM, ตัวอย่างอากาศแห้งของทั้งสามกระบวนการที่แห้งและเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำจนการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ทั่วไป
จุดหลอมเหลวที่ถูกบันทึกไว้ใน mel-temp electrothermal 3.0 เครื่องมือ วัดแสงยูวีในเมทานอลในเบคแมน คูลเตอร์ ดู 800 UV มองเห็นวัสดุ อินฟราเรดสเปกตรัม FT-IR เพอร์กินเอลเมอร์ถูกบันทึกไว้ในระบบ 2000 วัสดุ1H NMR สเปกตรัม และวัด 13C และบันทึกไว้ใน bruker-400 MHz ft-nmr สเปกและ mercury-400 MHz ft-nmr สเปกโตรมิเตอร์ esi-ms ที่ถูกบันทึกไว้ใน 30e APEX II บรูกเกอร์ ดอลโทนิก ที่ละเอียด absorbances ในวัดและบันทึกไว้ในเครื่อง multiplate ( μ QUANT biotek , USA ) .
2.2 . วัสดุโรงงาน , การสกัดและการแยก
Pnodiflora เก็บข้อมูลในเดือนมิถุนายน 2010 ใน Tainan , ไต้หวัน , และระบุโดยศาสตราจารย์ฉัน S . Chen , โรงเรียนเภสัชกรรมเกาสงการแพทย์มหาวิทยาลัย , เกาสง , ไต้หวัน คูปองตัวอย่าง ( 2010-06-pnm ) ฝากที่หอพรรณไม้ กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ เครื่องสำอาง น้ำหอม และเกาสง , มหาวิทยาลัย , เกาสง , ไต้หวัน อากาศแห้งส่วนของหน้า nodiflora ( 46 กก. ) สับ และแช่ในเมทานอล สาม ครั้ง ที่ อุณหภูมิ ห้อง ส่วนผสมถูกกรองและเข้มข้นแห้งภายใต้ความดันลดลง การผลิตสารสกัดเมทานอล ( PNM 525 , G ) โดย PNM ( 160 กรัม ) ถูกบีบให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วย และการเพิ่มขึ้นของปริมาณ etoac ขั้วและ 8 ส่วนหยุ่น ( Fr . D1 – d8 ) บีตา - sitosterol และได้รับ 3,7,4 ,5 - tetrahydroxy-3 - methoxyflavone ’’ ( 1 ) ( 3.9 มิลลิกรัม ) มีความบริสุทธิ์จากซิลิกาคอลัมน์โครมาโตกราฟฟี ( CC ) กับบีบอะซีโตน ( 10 : 1 ) รองลงมาคือ บีบ : ch2cl2 : etoac ( 5 : 2 : 1 ) จากผล D2 . hispidulin ( 8 ) ( 10 มิลลิกรัม ) และ larycitrin ( 9 ) ( 1.2 มิลลิกรัม ) มีความบริสุทธิ์จากซิลิกา CC กับบีบ : etoac ( 2 : 3 ) รองลงมา คือ rp18 ซิลิกาเจลด้วยอะซีโตน : H2O ( 3 : 2 ) D4 จากเ . nodifloretin ( 2 ) ( 95 มิลลิกรัม ) และ eupafolin ( 7 ) ( 13.5 มิลลิกรัม ) ถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์ โดยซิลิกาเจลกับบีบ : etoac : เมทิลแอลกอฮอล์ ( 7 : 30 : 13 ) รองลงมา คือ rp18 ซิลิกาด้วยอะซีโตน : H2O ( 1 : 1 ) และ CC lh-20 แยกจาก Fr . D5 4 - hydroxywogonin ’ ( 3 ) ( 5 มิลลิกรัม ) onopordin ( 4 ) ( 21.8 มิลลิกรัม ) ( 5 ) ( cirsiliol 11.8 มิลลิกรัม ) และ 5,7,8,4 ’ - ’ tetrahydroxy-3 - methoxyflavone ( 6 ) ( 103 มก. ) ถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์ โดยซิลิกาเจลกับบีบ : etoac : เมทิลแอลกอฮอล์ ( 6 : 69 : 25 ) รองลงมา คือ rp18 เจลด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ : H2O ( 1 : 1 ) , อะซิโตน : H2O ( 3 : 1 ) , และ CC lh-20 แยกจาก Fr . d6 . สารประกอบ 1 – 9 มี recrystallized และระบุโดย NMR และข้อมูลทางอื่น ๆตามการเปรียบเทียบกับค่าในวรรณคดี 13,14 [ 11 ] .
อีกสองชุดของพีnodiflora ยังเก็บที่สถานที่เดียวกันในปีที่แตกต่างกันและฤดูกาลดังแสดงในตัวอย่าง 2007-02-pnm ตัวเลขและ 2009-06-pnm . 2007-02-pnm เก็บข้อมูลในเดือนกุมภาพันธ์ 2550 2009-06-pnm ( ฤดูใบไม้ผลิ ) และเก็บข้อมูลในเดือนมิถุนายน ( ฤดูร้อน ) 2009 ตามลำดับ และจะถูกเก็บไว้ที่ห้องปฏิบัติการของเราสำหรับการอ้างอิงในอนาคต 2010-06-pnm ด้วยกัน ,อากาศแห้งตัวอย่างของทั้งสามชุดเป็นแห้งและเก็บรักษาที่อุณหภูมิต่ำจนถึงการวิเคราะห์ .