(Fig. 1B). Although the AP value was the maximal for the smallest
inoculum size (1.4-fold higher compared with the value obtained
for the largest inoculum size), the inhibition halo boundaries were
not so clearly defined in this condition, making difficult its measurement.
For this reason, to accurately determine the diameter of
inhibition halos, assays were decided to be performed with overlays
containing a higher number of cells (106 CFU/ml).
The assay optimal temperature was determined by incubating
the antimicrobial activity assay plates at 20 ◦C, 25 ◦C, 30 ◦C, 35 ◦C
and 40 ◦C. The fungus was previously cultured in PDA for 6 days at
25 ◦C, in the dark, and then overlaid with 106 CFU/ml of the sensitive
indicator strain. The plates were then incubated at the different
temperatures for 48 h, in the dark. H. fasciculare displayed antiyeast
activity at all the temperature values tested, except at 40 ◦C
(Fig. 2) where neither the fungus nor the yeast seemed to have
grown. Although the fungus continues to grow during the assay
incubation (48 h), the final fungal colonies become smaller at higher
temperatures than those obtained in the assays performed near the
optimal temperature of 25 ◦C. The highest AP value was observed
at 30 ◦C, followed by the one obtained for the assay at 35 ◦C. Temperatures
near the optimal temperature of fungal growth have led
to smaller AP values (near 1.3-fold less). Antimicrobial activity was
slightly higher at 20 ◦C than at 25 ◦C, though the inhibition halo
and the yeast growth were more evident at 25 ◦C. As S. cerevisiae
poorly grows at 20 ◦C, this can lead to an apparently higher antiyeast
activity and the larger halo size observed is obtained due to
a lower number of targeted sensitive cells. Although the temperature
of 25 ◦C did not lead to the highest fungal AP, it was selected
to be the optimal assay temperature value due to the detection of
clearer and more defined inhibition halos.
According to the results obtained, the antimicrobial activity
assay was defined in PDA medium, using a 6-days grown fungus
and 106 CFU/ml of the microbial indicator strain, and should be
performed at 25 ◦C for 48 h. In order to assess and validate the usefulness
and adequacy of the bioassay, the antimicrobial properties
(Fig. 1B) ถึงแม้ว่าค่า AP สูงสุดสำหรับน้อยที่สุดขนาด inoculum (1.4-fold สูงเมื่อเทียบกับค่าที่ได้รับสำหรับขนาดใหญ่ที่สุด inoculum), ขอบเขตของ halo ยับยั้งได้ไม่ชัดเจนให้กำหนดในเงื่อนไขนี้ ทำยากของวัดด้วยเหตุนี้ อย่างถูกต้องกำหนดเส้นผ่าศูนย์กลางของยับยั้ง halos, assays ได้ตัดสินใจที่จะดำเนินการกับซ้อนทับประกอบด้วยของเซลล์ (106 CFU/ml)อุณหภูมิเหมาะสมวิเคราะห์ถูกกำหนด โดย incubatingแผ่นทดสอบกิจกรรมจุลินทรีย์ที่ 20 ◦C, 25 ◦C, 30 ◦C, 35 ◦Cและ 40 ◦C เชื้อราถูกก่อนหน้านี้อ่างใน PDA สำหรับ 6 วันที่25 ◦C ในมืด แล้ว overlaid กับ 106 CFU/ml ของสำคัญต้องใช้ตัวบ่งชี้ แผ่นได้แล้ว incubated ที่ต่าง ๆอุณหภูมิสำหรับ h 48 ในมืด H. fasciculare แสดง antiyeastกิจกรรมค่าอุณหภูมิที่ทดสอบ ยกเว้นที่ 40 ◦C(Fig. 2) ที่ไม่เชื้อราหรือยีสต์ดูเหมือนจะ มีเติบโตขึ้น แม้ว่าเชื้อรายังคงเติบโตในระหว่างการทดสอบคณะทันตแพทยศาสตร์ (48 h), อาณานิคมเชื้อราสุดท้ายกลายเป็นขนาดเล็กที่สูงขึ้นอุณหภูมิมากกว่าผู้ที่ได้รับใน assays ทำใกล้อุณหภูมิสูงสุด 25 ◦C ค่า AP สูงสุดถูกตรวจสอบที่ 30 ◦C ตามที่ได้รับการทดสอบที่ 35 ◦C อุณหภูมิใกล้อุณหภูมิสูงสุดของการเจริญเติบโตของเชื้อราได้นำขนาดเล็กค่า AP (ใกล้ 1.3-fold น้อย) มีกิจกรรมของจุลินทรีย์สูงขึ้นเล็กน้อยที่ ◦C 20 กว่าที่ 25 ◦C ว่า halo ที่ยับยั้งและการเจริญเติบโตของยีสต์ได้ชัดมากที่ 25 ◦C เป็น S. cerevisiaeไม่ดีขึ้นที่ 20 ◦C นี้สามารถนำไปสู่การ antiyeast สูงขึ้นเห็นได้ชัดกิจกรรมและ halo ขนาดใหญ่สังเกตได้รับเนื่องลดจำนวนของเซลล์เป้าหมายสำคัญ ถึงแม้ว่าอุณหภูมิ25 ◦C ได้ไม่ทำให้เชื้อรา AP สูงสุด มันถูกเลือกเป็น ค่าอุณหภูมิทดสอบที่เหมาะสมที่สุดเนื่องจากการตรวจพบhalos ยับยั้งชัดเจน และกำหนดเพิ่มเติมตามผลได้รับ กิจกรรมจุลินทรีย์ทดสอบกำหนดไว้ใน PDA ปานกลาง ใช้เป็นเชื้อรา 6 วันโตและ 106 CFU/ml ของสายพันธุ์จุลินทรีย์บ่งชี้ และควรดำเนินการใน 25 ◦C สำหรับ 48 h การประเมิน และตรวจสอบความมีประโยชน์และความเพียงพอของ bioassay คุณสมบัติต้านจุลชีพ
การแปล กรุณารอสักครู่..