2.6. MUG direct assay using the han

2.6. MUG direct assay using the hand-held detector
Borosilicate glass test tubes (size 10  75 mm) were prepared
with 100 ml of 50 mM MUG in PBS pH 6.8. Aliquots (900 ml) of
freshly collected river water samples (not filtered or otherwise
treated) were added to the tubes, and after mixing, the tubes
were incubated for 30 min, after which the reaction was
stopped by adding 100 ml of 1 M NaOH. The tubes were individually
read with the hand-held confocal fluorescence
detector FLUO SENS SD (ESE GmbH) which was aligned into
a prototype sample holder (Fig. S1). This holder was designed
to allow use of disposable glass tubes and can also be readily
adapted to house cuvettes. Each sample was measured with
25 excitation-detection cycles in 1 s intervals (excitation
wavelength 360 nm, emission wavelength 460 nm). The
sensor was controlled by and the data were stored on a FLUO
LOG Handheld (ESE GmbH) control unit. The instrument with
the coupled control unit works independently allowing
portable use and on-site measurements. The control unit was
connected to a Laptop/PC via USB and the data exported into
Microsoft Excel for further analysis. Each water sample was
measured in triplicate. The two controls consisted of water
sample without MUG substrate and MUG substrate with
ultrapure water. The sensitivity of the detector was adjusted
and a reference curve recorded with dilutions of 4MU in PBS;
NaOH was added and the fluorescence measured in the same
manner than for the water samples. Control experiments
were carried out by adding solutions of varied concentrations
of b-D-glucuronidase to the tubes and analysing the fluorescence
in the same manner than for the water samples.
Samples of serial diluted E. coli cultures (see above) were also
analysed for b-D-glucuronidase activity following the same
protocol.
2.7. Optimisation of detection conditions for the
hand-held detector
The FLUO SENS SD confocal fluorescence detector includes
a software controlled setup for detector sensitivity as well as
a correction for background signal and blank sample. Detector
sensitivity was adjusted initially with a 4MU standard curve
with the scope to achieve linearity over a range of 103
magnitudes and reproducible signal to background ratios for
the lowest concentrations. 4MU concentrations used for this
step were from 10 nM to 20 mM. The settings where then
further adjusted with the MUG-GUD assay and finally with E.
coli spiked water samples. Once the sensitivity setup had been
optimised it was stored in the software file and remained
unchanged for the analyses of river water samples. Sterile
Ringer’s solution was used as a blank to zero the instrument.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. MUG วิเคราะห์โดยตรงโดยใช้เครื่องตรวจจับมือถือหลอดทดสอบแก้ว borosilicate (ขนาด 10 มม. 75) ถูกเตรียมไว้มี 50 mM MUG PBS pH 6.8 100 มล Aliquots (900 มล.) ของแม่น้ำสดรวบรวมตัวอย่างน้ำ (ไม่ถูกกรอง หรือมิฉะนั้นรักษา) เพิ่มหลอด และหลัง จากการ ผสม หลอดมี incubated ใน 30 นาที ที่มีปฏิกิริยาหยุดเพิ่ม 100 ml ของ 1 M NaOH แต่ละหลอดได้อ่าน fluorescence confocal มือถือจับ FLUO เซ้นส์ SD (ความเร็ว GmbH) ซึ่งถูกจัดเป็นที่เก็บตัวอย่างต้นแบบ (ฟิก S1) เจ้านี้ถูกออกแบบมาให้ใช้ทิ้งแก้วหลอด และยังสามารถพร้อมดัดแปลงบ้าน cuvettes แต่ละอย่างถูกวัดด้วย25 รอบตรวจในการกระตุ้นในช่วง s 1 (ในการกระตุ้นความยาวคลื่น 360 นาโนเมตร nm ความยาวคลื่น 460 ปล่อยก๊าซ) ที่เซ็นเซอร์ถูกควบคุมโดย และข้อมูลถูกเก็บไว้ในตัว FLUOบันทึกมือถือ (ความเร็ว GmbH) หน่วยควบคุม เครื่องมือพร้อมหน่วยควบคุมควบคู่การทำงานอย่างอิสระให้ใช้พกพาและวัดสิ่ง มีหน่วยควบคุมเชื่อมต่อกับเครื่องแล็ปท็อป/คอมพิวเตอร์ผ่าน USB และข้อมูลที่ส่งออกไปMicrosoft Excel สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม แต่ละตัวอย่างน้ำถูกวัดใน triplicate ตัวควบคุมที่สองประกอบด้วยน้ำตัวอย่าง โดย MUG พื้นผิวและพื้นผิว MUG ด้วยน้ำ ultrapure มีการปรับปรุงความไวของเครื่องตรวจจับเส้นโค้งอ้างอิงบันทึกกับ dilutions 4MU ใน PBSเพิ่ม NaOH และวัด fluorescence ที่เดียวลักษณะกว่าสำหรับตัวอย่างน้ำ ควบคุมการทดลองได้ดำเนินการ โดยการเพิ่มโซลูชั่นที่ความเข้มข้นแตกต่างกันของ b-D-glucuronidase กับหลอด fluorescence ที่วิเคราะห์ในลักษณะเดียวกันมากกว่าสำหรับตัวอย่างน้ำตัวอย่างของวัฒนธรรมประจำแตกออก E. coli (ดูข้างต้น) ยังได้analysed กิจกรรม b-D-glucuronidase ต่อเหมือนกันโพรโทคอลการ2.7 การเพิ่มประสิทธิภาพของการตรวจสอบเงื่อนไขสำหรับการจับมือถือมีเครื่องตรวจจับ confocal fluorescence FLUO เซ้นส์ SDการตั้งค่าซอฟต์แวร์ควบคุมสำหรับเครื่องตรวจจับความไวเป็นการแก้ไขพื้นหลังสัญญาณและตัวอย่างที่ว่างเปล่า เครื่องตรวจจับมีการปรับปรุงความไวเริ่มโค้งมาตรฐาน 4MUมีขอบเขตให้แบบดอกไม้ช่วง 103magnitudes และจำลองสัญญาณไปอัตราส่วนพื้นหลังสำหรับความเข้มข้นต่ำ ความเข้มข้น 4MU ที่ใช้สำหรับการนี้ขั้นตอนที่ 10 nM ถึง 20 มม. การตั้งค่าแล้วปรับปรุงเพิ่มเติม ด้วยวิเคราะห์ MUG GUD และสุดท้ายกับอีcoli spiked ตัวอย่างน้ำ เมื่อได้รับการตั้งค่าความไวบวมจะถูกเก็บไว้ในแฟ้มซอฟต์แวร์ และยังคงเปลี่ยนแปลงการวิเคราะห์ตัวอย่างน้ำของแม่น้ำ กอซโซลูชันของ ringer ถูกใช้เป็นช่องว่างเป็นศูนย์เครื่องมือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 MUG ทดสอบโดยตรงโดยใช้มือถือเครื่องตรวจจับ
Borosilicate หลอดทดลองแก้ว (ขนาด 10? 75 มิลลิเมตร)
ได้จัดทำด้วย100 มลแก้ว 50 มมพีบีเอสพีเอช 6.8 aliquots (900 มล.)
ของการเก็บรวบรวมสดตัวอย่างน้ำในแม่น้ำ(ไม่ผ่านการกรองหรืออื่น ๆ
ได้รับการรักษา)
ถูกเพิ่มเข้าไปในท่อและหลังจากผสมหลอดถูกบ่มเป็นเวลา30
นาทีหลังจากที่เกิดปฏิกิริยาถูกหยุดโดยการเพิ่ม100 มล. 1 M NaOH . หลอดเป็นรายบุคคลได้รับการอ่านกับมือถือเรืองแสง confocal ตรวจจับ FLUO SENS SD (ESE GmbH) ซึ่งสอดคล้องเข้าถือตัวอย่างต้นแบบ(รูป. S1) ผู้ถือนี้ถูกออกแบบมาเพื่อให้การใช้งานของหลอดแก้วที่ใช้แล้วทิ้งและยังสามารถได้อย่างง่ายดายปรับให้เข้ากับบ้านcuvettes ตัวอย่างแต่ละวัดที่มี25 รอบการกระตุ้นการตรวจสอบในช่วงเวลา 1 วินาที (กระตุ้นความยาวคลื่น360 นาโนเมตรความยาวคลื่น 460 นาโนเมตรปล่อยก๊าซเรือนกระจก) เซ็นเซอร์ถูกควบคุมโดยและข้อมูลที่ถูกเก็บไว้ใน FLUO LOG มือถือ (ESE GmbH) หน่วยควบคุม เครื่องมือที่ใช้กับชุดควบคุมการทำงานควบคู่อิสระที่ช่วยให้การใช้งานแบบพกพาและการวัดในสถานที่ หน่วยควบคุมได้รับการเชื่อมต่อกับแล็ปท็อป / คอมพิวเตอร์ผ่านทาง USB และข้อมูลที่ส่งออกใน Microsoft Excel สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป ตัวอย่างน้ำแต่ละวัดในเพิ่มขึ้นสามเท่า ทั้งสองควบคุมประกอบด้วยน้ำตัวอย่างโดยไม่ต้องพื้นผิวแก้วและพื้นผิวแก้วที่มีน้ำบริสุทธิ์ ความไวของการตรวจจับที่ได้รับการตั้งค่าและเส้นโค้งการอ้างอิงบันทึกด้วยเจือจางของ 4MU ในพีบีเอส; NaOH ถูกบันทึกและเรืองแสงที่วัดได้ในเดียวกันลักษณะกว่าสำหรับตัวอย่างน้ำ การทดลองควบคุมได้ดำเนินการโดยการเพิ่มความเข้มข้นของการแก้ปัญหาที่แตกต่างกันของBD-glucuronidase กับหลอดและการวิเคราะห์การเรืองแสงในลักษณะเดียวกันกว่าสำหรับตัวอย่างน้ำ. ตัวอย่างอนุกรมเจือจาง E. coli วัฒนธรรม (ดูด้านบน) ก็ยังวิเคราะห์BD- กิจกรรมต่อไปนี้ glucuronidase เดียวกันโปรโตคอล. 2.7 การเพิ่มประสิทธิภาพของการตรวจสอบเงื่อนไขในการตรวจจับมือถือFLUO SENS SD ตรวจจับแสง confocal รวมถึงซอฟแวร์ควบคุมการติดตั้งเพื่อความไวของเครื่องตรวจจับเช่นเดียวกับการแก้ไขสัญญาณพื้นหลังและตัวอย่างที่ว่างเปล่า เครื่องตรวจจับความไวของการปรับครั้งแรกกับเส้นโค้งมาตรฐาน 4MU ขอบเขตเพื่อให้บรรลุความเป็นเชิงเส้นในช่วง 103 เคาะและทำซ้ำสัญญาณอัตราส่วนพื้นหลังสำหรับความเข้มข้นต่ำสุดที่ ความเข้มข้น 4MU ใช้สำหรับการนี้ขั้นตอนจาก10 นาโนเมตรถึง 20 มิลลิ การตั้งค่าที่แล้วปรับต่อไปด้วยการทดสอบ MUG-GUD และสุดท้ายกับอีโคไลได้ถูกแทงตัวอย่างน้ำ เมื่อตั้งค่าความไวแสงที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมมันถูกเก็บไว้ในแฟ้มซอฟต์แวร์และยังคงไม่เปลี่ยนแปลงสำหรับการวิเคราะห์ของแม่น้ำตัวอย่างน้ำ ผ่านการฆ่าเชื้อแก้ปัญหา Ringer ถูกใช้เป็นที่ว่างเปล่าให้เป็นศูนย์เครื่องมือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 แก้วโดยตรง ( โดยใช้มือถือเครื่องตรวจจับ
borosilicate แก้วหลอดทดลอง ( ขนาด 10  75 มม. ) เตรียม
ด้วย 100 มิลลิลิตรของแก้ว 50 มม. ใน PBS พีเอช 6.8 . เฉยๆ ( 900 มล. ) ของน้ำตัวอย่างที่เก็บรวบรวม
สดๆ ( ไม่กรอง หรือมิฉะนั้น
ถือว่า ) มีการเพิ่มหลอดและหลังจากผสมหลอด
ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีหลังจากที่ปฏิกิริยา
แวะเติม 100 ml 1 M NaOHหลอดเป็นแบบ
อ่านกับมือถือด้วยเครื่องตรวจจับการเรืองแสง
Fluo Sens SD ( ESE GmbH ) ซึ่งเป็นผู้ถือต้นแบบชิดเข้า
( รูปที่ S1 ) ผู้นี้ ถูกออกแบบให้ใช้หลอดแก้ว

ทิ้งและยังสามารถใช้ปรับคิวเวทท์บ้าน แต่ละตัวอย่างถูกวัดด้วยระบบตรวจจับ
25 รอบใน 1 ช่วงเวลา ( 360 nm ความยาวคลื่นกระตุ้น
,การปล่อยความยาวคลื่น 500 นาโนเมตร )
เซ็นเซอร์ควบคุมและข้อมูลที่ถูกเก็บไว้บนมือถือ ( Fluo
เข้าสู่ระบบฟ้าผ่า GmbH ) หน่วยควบคุม เครื่องดนตรีกับคู่การควบคุมหน่วยงานอิสระ

และอนุญาตให้พกพาใช้วัดในโรงแรม หน่วยควบคุมเป็น
เชื่อมต่อกับแล็ปท็อป / PC ผ่าน USB และข้อมูลส่งออกเป็น
Microsoft Excel สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป แต่ละตัวอย่างน้ำถูก
วัดทั้งสามใบ สองการควบคุมประกอบด้วยน้ำ
ตัวอย่างพื้นผิวและพื้นผิวกับเหยือกแก้วโดยไม่
บริสุทธิ์มากน้ำ ความไวของเครื่องตรวจจับปรับ
และอ้างอิงโค้งบันทึกด้วยวิธีการ 4mu ใน PBS ;
NaOH เพิ่มและการวัดในลักษณะเดียวกัน
กว่า น้ำตัวอย่าง ควบคุมการทดลอง
ทดลองโดยการเพิ่มโซลูชั่นของหลากหลายความเข้มข้นของ b-d-glucuronidase กับหลอด

และวิเคราะห์การเรืองแสงในลักษณะเดียวกันมากกว่า สำหรับตัวอย่างน้ำ .
ตัวอย่างต่อเนื่องเจือจางเชื้อ E . coli วัฒนธรรม ( ดูข้างต้น ) และวิเคราะห์กิจกรรม b-d-glucuronidase
ต่อไปนี้โปรโตคอลเดียวกัน
.
2.7 . การเพิ่มประสิทธิภาพของภาพสำหรับ

เครื่องมือถือส่วนฟลู Sens SD ด้วยเครื่องตรวจจับซอฟต์แวร์รวมถึงการติดตั้งเครื่องควบคุม

ไวรวมทั้งการแก้ไขสัญญาณพื้นหลังและตัวอย่างที่ว่างเปล่า เครื่องตรวจจับ
ไวปรับตอนแรกกับ 4mu มาตรฐานเส้นโค้ง
กับขอบเขตเพื่อบรรลุเป็นเส้นตรงในช่วง 103
ขนาดและอัตราส่วนสัญญาณพื้นหลัง )
ความเข้มข้นต่ำสุด4mu ความเข้มข้นที่ใช้สำหรับขั้นตอนนี้
จาก 10 nm 20 มิลลิเมตร การตั้งค่าแล้ว
เพิ่มเติมปรับกับ mug-gud assay และสุดท้ายกับ E .
( จากตัวอย่างน้ำ เมื่อติดตั้งไวได้
- มันถูกเก็บไว้ในไฟล์ซอฟต์แวร์และยังคง
ไม่เปลี่ยนแปลงในการวิเคราะห์ตัวอย่างน้ำแม่น้ำ เป็นหมัน
เป็นโซลูชั่นที่ใช้เป็นช่องว่างศูนย์เครื่องมือ