2.3. Antifungal activity of essenti

2.3. Antifungal activity of essential oils on mycelial growth in vitro conditions
The antifungal tests of essential oils were carried out for assessing its contact and volatile phase effects towards mycelial growth of B. cinerea as described previously (Soylu et al., 2006). For determi- nation of contact effects, the essential oils were dispersed as an emulsion in water using ethanol and Tween 20 (0.1% v/v) and added to PDA immediately before it was emptied into the glass Petri dishes (90 × 20 mm in diameter) at a temperature of 40–45 °C. The concentrations tested were 0.4 to 25.6 μg/ml. The controls received the same quantity of ethanol and Tween 20 mixed with PDA. B. cinerea was inoculated immediately by plating in the centre of each plate with a 7 mm diameter disc of the fungus, cut with a sterile cork borer from the edge of actively growing cultures on PDA plates. The Petri dishes were incubated in the dark at 22 °C. For determination of volatile phase effects, glass Petri dishes (90 × 20 mm, which offer 80 ml air spaces after addition of 20 ml agar media) were used. The Petri dishes inoculated as described above at different concentrations of essential oils were added to sterile filter papers (10 mm diameter, Whatman no.1) and placed on the inner surface of the lid of Petri dishes to obtain final concentrations of 0.05 to 1.6 μm/ml air. The Petri dishes were sealed immediately with parafilm to prevent loss of essential oil vapours and incubated at 22 °C. The mean radial mycelial growth of the pathogen was determined by measuring the diameter of the colony in two directions at right angels when the plate surface of the control Petri was covered by fungus 7 days after inoculation. The fungistatic–fungicidal nature of essential oils was tested by observing revival of growth of the inhibited mycelial disc following its transfer to non-treated PDA. A fungicidal effect was where there was no growth, whereas a fungistatic effect was where temporary inhibition of microbial growth occurred. The agar discs of B. cinerea, which failed to grow were either transferred onto agar media without oils (for contact phase effect of oils) or onto lids of the plate containing ethanol and Tween 20 (0.1% v/v) without oil (for volatile phase effect of oils). Petri plates were incubated for 5days. Activity of the each concentration of the various oils was considered fungicidal if the pathogen did not grow or fungistatic if the pathogen growth occurred.
For each concentration, five replicate plates were used. The mean growth values were obtained and then converted in to the inhibition percentage of mycelial growth in relation to the control treatment by using the formula, MGI(%) = ((dc − dt) / dc) × 100, dc and dt represent mycelial growth diameter in control and treated Petri plates, respectively. The experiments were conducted twice.
2.4. Effect of essential oil on conidial germination and germ tube elongation
The effects of essential oil upon the spore germination and germ tube elongation of B. cinerea were described in our earlier study (Soylu et al., 2005). Spore suspension (104 spores ml−1) of B. cinerea was prepared from actively growing culture (7–8 days old) in distilled sterile water. Three different 50 μl aliquots of the spore suspension drops were spread onto the surface of PDA medium supplemented with different concentrations of essential oil in contact or volatile phases as described before. Sterile distilled water, containing 0.01% Tween 20, was used in place of the essential oils as control. Plates were incubated at 22 °C until the germination in the control reached N 80% (10–12 h according to the rate of germination of the fungus) Afterward, spore germination was stopped by applying a drop of lactophenol-cotton blue to the inoculation sites on plates. Germination was defined as the point at which the germ tube length exceeded the spore diameter. The percentage of spore germination and the lengths of germ tubes (three replicates were conducted for each treatment, and a minimum of 100 spores were counted in each replicate) were estimated under a microscope (Olympus BX51, Tokyo, Japan), using a micrometer. The percent inhibition was calculated according to Abbott's formula: MGI(%)=

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การกิจกรรมต้านเชื้อราของน้ำมันบน mycelial การเจริญเติบโตในหลอดThe antifungal tests of essential oils were carried out for assessing its contact and volatile phase effects towards mycelial growth of B. cinerea as described previously (Soylu et al., 2006). For determi- nation of contact effects, the essential oils were dispersed as an emulsion in water using ethanol and Tween 20 (0.1% v/v) and added to PDA immediately before it was emptied into the glass Petri dishes (90 × 20 mm in diameter) at a temperature of 40–45 °C. The concentrations tested were 0.4 to 25.6 μg/ml. The controls received the same quantity of ethanol and Tween 20 mixed with PDA. B. cinerea was inoculated immediately by plating in the centre of each plate with a 7 mm diameter disc of the fungus, cut with a sterile cork borer from the edge of actively growing cultures on PDA plates. The Petri dishes were incubated in the dark at 22 °C. For determination of volatile phase effects, glass Petri dishes (90 × 20 mm, which offer 80 ml air spaces after addition of 20 ml agar media) were used. The Petri dishes inoculated as described above at different concentrations of essential oils were added to sterile filter papers (10 mm diameter, Whatman no.1) and placed on the inner surface of the lid of Petri dishes to obtain final concentrations of 0.05 to 1.6 μm/ml air. The Petri dishes were sealed immediately with parafilm to prevent loss of essential oil vapours and incubated at 22 °C. The mean radial mycelial growth of the pathogen was determined by measuring the diameter of the colony in two directions at right angels when the plate surface of the control Petri was covered by fungus 7 days after inoculation. The fungistatic–fungicidal nature of essential oils was tested by observing revival of growth of the inhibited mycelial disc following its transfer to non-treated PDA. A fungicidal effect was where there was no growth, whereas a fungistatic effect was where temporary inhibition of microbial growth occurred. The agar discs of B. cinerea, which failed to grow were either transferred onto agar media without oils (for contact phase effect of oils) or onto lids of the plate containing ethanol and Tween 20 (0.1% v/v) without oil (for volatile phase effect of oils). Petri plates were incubated for 5days. Activity of the each concentration of the various oils was considered fungicidal if the pathogen did not grow or fungistatic if the pathogen growth occurred.สำหรับแต่ละความเข้มข้น มีใช้แผ่น 5 replicate ค่าเฉลี่ยการเจริญเติบโตได้ และจากนั้น แปลงเป็นในเปอร์เซ็นต์ยับยั้งการเจริญเติบโต mycelial เกี่ยวกับการรักษาควบคุม โดยใช้สูตร MGI(%) = ((dc − dt) / dc) × 100, dc และ dt หมายถึงเส้นผ่าศูนย์กลางเจริญเติบโตของ mycelial ในการควบคุมและบำบัด Petri แผ่น ตามลำดับ ได้ดำเนินการทดลองสอง2.4. ผลของน้ำมันหอมระเหย conidial การงอกและ elongation จมูกหลอดผลของน้ำมันหอมระเหยตามการงอกสปอร์และจมูกหลอด elongation ของ cinerea เกิดได้อธิบายไว้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา (Soylu et al., 2005) ระงับสปอร์ (104 เพาะเฟิร์น ml−1) การเกิด cinerea ถูกเตรียมจากวัฒนธรรม (อายุ 7-8 วัน) ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อการเจริญเติบโตอย่างแข็งขัน สามแตกต่างกัน 50 μl aliquots หยดระงับสปอร์ได้แพร่กระจายไปบนพื้นผิวของ PDA สื่อเสริม ด้วยความเข้มข้นแตกต่างกันของน้ำมันหอมระเหยในระยะติดต่อ หรือระเหยตามที่อธิบายไว้ก่อน กอซกลั่นน้ำ ประกอบด้วย 0.01% Tween 20 ไม่ใช้น้ำมันหอมระเหยเป็นตัวควบคุม แผ่นก็ incubated ที่ 22 ° C จนถึงการงอกในตัวควบคุม N 80% (h 10-12 ตามอัตราการงอกของเห็ดรา) หลัง หยุดการงอกของสปอร์ โดยใช้หยดสีฟ้าผ้าฝ้าย lactophenol ไซต์ inoculation บนแผ่น การงอกได้กำหนดเป็นจุดที่ความยาวท่อจมูกเกินเส้นผ่าศูนย์กลางสปอร์ เปอร์เซ็นต์การงอกของสปอร์และความยาวของจมูกหลอด (เหมือนกับสามได้ดำเนินการสำหรับแต่ละการบำบัด และอย่างน้อย 100 เพาะเฟิร์นนับได้ในแต่ละซ้ำ) ได้ประเมินภายใต้กล้องจุลทรรศน์ (Olympus BX51 โตเกียว ญี่ปุ่น), ใช้เป็นไมโครมิเตอร์ เปอร์เซ็นต์การยับยั้งการเปลี่ยนคำนวณตามสูตรของ Abbott: MGI(%) =

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 กิจกรรมต้านเชื้อราของน้ำมันหอมระเหยต่อการเจริญเติบโตของเส้นใยในหลอดทดลองเงื่อนไขการทดสอบเชื้อราของน้ำมันหอมระเหยได้ดำเนินการในการประเมินการติดต่อของขั้นตอนและผลกระทบที่มีความผันผวนต่อการเจริญเติบโตของเส้นใยของบีซีเนเรียตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Soylu et al., 2006)
สำหรับประเทศ determi- ของผลกระทบที่ติดต่อน้ำมันหอมระเหยก็แยกย้ายกันเป็นอิมัลชันในน้ำโดยใช้เอทานอลและ Tween 20 (0.1% v / v) และเพิ่มไปยัง PDA ทันทีก่อนที่จะถูกเทลงในแก้วอาหารเลี้ยงเชื้อ (90 × 20 มม เส้นผ่าศูนย์กลาง) ที่อุณหภูมิ 40-45 องศาเซลเซียส ความเข้มข้นของการทดสอบเป็น 0.4-25.6 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ได้รับการควบคุมปริมาณเดียวกันของเอทานอลและ Tween 20 ผสมกับพีดีเอ บีซีเนเรียได้รับการฉีดวัคซีนทันทีโดยชุบในใจกลางของแต่ละจานดิสก์ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 7 มมของเชื้อราที่ตัดกับหนอนเจาะก๊อกผ่านการฆ่าเชื้อจากขอบของวัฒนธรรมที่เติบโตอย่างแข็งขันบนจานพีดีเอ อาหารเลี้ยงเชื้อถูกบ่มในที่มืดที่ 22 ° C สำหรับความมุ่งมั่นของผลกระทบระยะระเหยจานเลี้ยงเชื้อแก้ว (90 × 20 มิลลิเมตรซึ่งมี 80 มล. ช่องว่างอากาศหลังจากที่นอกเหนือจาก 20 มล. วุ้นสื่อ) ถูกนำมาใช้ อาหารเลี้ยงเชื้อเชื้อที่อธิบายข้างต้นที่ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของน้ำมันหอมระเหยที่ถูกเพิ่มเข้าเอกสารกรองผ่านการฆ่าเชื้อ (เส้นผ่าศูนย์กลาง 10 มม 1 เบอร์) และวางไว้บนพื้นผิวด้านในของฝาของจานเลี้ยงเชื้อเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.05-1.6 ไมครอน / ml อากาศ อาหารเลี้ยงเชื้อถูกปิดผนึกทันทีด้วย parafilm เพื่อป้องกันการสูญหายของไอระเหยน้ำมันหอมระเหยและบ่มที่ 22 องศาเซลเซียส หมายถึงการเจริญเติบโตของเส้นใยรัศมีของเชื้อโรคที่ถูกกำหนดโดยการวัดขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของอาณานิคมในสองทิศทางที่เทวดาที่เหมาะสมเมื่อพื้นผิวแผ่นของการควบคุมการเลี้ยงเชื้อที่ถูกปกคลุมด้วยเชื้อรา 7 วันหลังจากการฉีดวัคซีน ธรรมชาติ fungistatic-เชื้อราของน้ำมันหอมระเหยได้รับการทดสอบโดยการสังเกตการฟื้นตัวของการเจริญเติบโตของแผ่นเส้นใยยับยั้งต่อไปนี้การถ่ายโอนไปยังไม่ได้รับการรักษา PDA ผลเป็นเชื้อราที่มีการเจริญเติบโตในขณะที่ผลกระทบ fungistatic เป็นที่ยับยั้งชั่วคราวที่เกิดขึ้นเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ แผ่นวุ้นของซีเนเรียบีซึ่งล้มเหลวที่จะเติบโตถูกย้ายอย่างใดอย่างหนึ่งลงบนสื่อวุ้นโดยไม่ต้องน้ำมัน (สำหรับผลการขั้นตอนการติดต่อของน้ำมัน) หรือบนฝาของแผ่นที่มีเอทานอลและ Tween 20 (0.1% v / v) ไม่มีน้ำมัน (สำหรับ ผลกระทบขั้นตอนการระเหยของน้ำมัน) จาน Petri ถูกบ่มเป็นเวลา 5 วัน กิจกรรมของความเข้มข้นของแต่ละน้ำมันต่าง ๆ ได้รับการพิจารณาถ้าเชื้อราเชื้อโรคไม่เติบโตหรือ fungistatic ถ้าการเจริญเติบโตของเชื้อโรคที่เกิดขึ้น.
สำหรับความเข้มข้นของแต่ละห้าแผ่นถูกนำมาใช้ซ้ำ ค่าเฉลี่ยการเติบโตที่ได้รับแล้วแปลงในอัตราร้อยละการยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใยที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการรักษาโดยใช้สูตร MGI (%) = ((dc - dt) / DC) × 100, dc และ dt เป็นตัวแทนของเส้นใย เส้นผ่าศูนย์กลางการเจริญเติบโตในการควบคุมและรับการรักษาแผ่น Petri ตามลำดับ การทดลองได้ดำเนินการเป็นครั้งที่สอง.
2.4 ผลของน้ำมันหอมระเหยต่อการงอกของเชื้อราและเชื้อโรคหลอดยืดผลของน้ำมันหอมระเหยอยู่กับการงอกของสปอร์และการยืดตัวหลอดจมูกของซีเนเรียบีถูกอธิบายไว้ในก่อนหน้านี้เราศึกษา (Soylu et al., 2005)
สปอร์แขวนลอย (104 มล. สปอร์-1) ของซีเนเรียบีถูกจัดทำขึ้นจากการเพาะเลี้ยงที่เพิ่มขึ้นอย่างแข็งขัน (7-8 วันเก่า) ในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ สามที่แตกต่างกัน 50 ไมโครลิตร aliquots ของหยดสปอร์แขวนลอยกระจายอยู่บนพื้นผิวของสื่อเสริมพีดีเอที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของน้ำมันหอมระเหยในการติดต่อหรือขั้นตอนที่มีความผันผวนตามที่อธิบายไว้ก่อน น้ำกลั่นปลอดเชื้อที่มี 0.01% Tween 20 ถูกนำมาใช้ในสถานที่ของน้ำมันหอมระเหยเป็นตัวควบคุม แผ่นถูกบ่มที่ 22 องศาเซลเซียสจนงอกในการควบคุมถึง 80% ยังไม่มี (10-12 ชั่วโมงตามอัตราการงอกของเชื้อรา) ต่อจากนั้นงอกของสปอร์ก็หยุดโดยการใช้ลดลงจากสีฟ้า lactophenol ผ้าฝ้ายเพื่อการฉีดวัคซีน เว็บไซต์บนจาน งอกถูกกำหนดเป็นจุดที่มีความยาวท่อเชื้อโรคเกินขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของสปอร์ที่ เปอร์เซ็นต์การงอกของสปอร์และความยาวของหลอดเชื้อโรคที่ (สามซ้ำได้ดำเนินการสำหรับการรักษาในแต่ละครั้งและขั้นต่ำ 100 สปอร์นับซ้ำในแต่ละ) อยู่ที่ประมาณภายใต้กล้องจุลทรรศน์ (โอลิมปั BX51 โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) โดยใช้ไมโครเมตร ยับยั้งร้อยละที่คำนวณตามสูตรของแอ๊บบอต: MGI (%) =

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 ฤทธิ์ต้านราของน้ำมันหอมระเหยในเจริญในสภาวะปลอดเชื้อ
การทดสอบเชื้อราของน้ํามันหอมระเหย ได้ดำเนินการประเมินการติดต่อและผลกระทบระยะระเหยต่อเจริญของ B . cinerea ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( soylu et al . , 2006 ) สำหรับพยา - ชาติ ติดต่อ ผลกระทบน้ำมันหอมระเหยถูกกระจายเป็นอิมัลชันในน้ำโดยใช้เอทานอลและ Tween 20 ( 0.1 % v / v ) และเพิ่มไปยัง PDA ทันทีก่อนที่มันจะไม่มีอะไรในแก้วจานเลี้ยงเชื้อ ( 90 × 20 มม. ) ที่อุณหภูมิ 40 – 45 ° C มีความเข้มข้น 0.4 เพื่อทดสอบยังμกรัม / มิลลิลิตร การควบคุมที่ได้รับปริมาณเดียวกันของเอทานอลและ Tween 20 ผสมกับ PDA B .ขาวเป็นเชื้อทันที โดยชุบในศูนย์กลางของแต่ละจานมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 7 มม. แผ่นดิสก์ของเชื้อรา ตัดกับฆ่าเชื้อก๊อกเจาะจากขอบของวัฒนธรรมอย่างเติบโตบนอาหาร PDA แผ่น ในจานเพาะเลี้ยงเชื้อได้ในที่มืด อุณหภูมิ 22 องศา สำหรับการหาผลระยะที่ระเหย , จาน Petri แก้ว ( 90 × 20 มม.ซึ่งมีช่องว่างอากาศหลัง 80 ml เพิ่ม 20 ml อาหารวุ้น ) สถิติที่ใช้ ในจานเพาะเลี้ยงเชื้อตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ที่ระดับความเข้มข้นของน้ำมันหอมระเหยมีการเพิ่มตัวกรองเอกสารเป็นหมัน ( เส้นผ่าศูนย์กลาง 10 มม. whatman No.1 ) และวางไว้บนพื้นผิวด้านในของฝาของจานเพาะเลี้ยงเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย 0.05 ถึง 1.6 μ M ปริมาตรอากาศในจานเพาะเลี้ยงถูกปิดสนิททันทีกับพาราฟิล์มเพื่อป้องกันการสูญหายของไอระเหยน้ำมัน และบ่มที่อุณหภูมิ 22 องศา C หมายถึงรัศมีของการเจริญเติบโตของเชื้อนี้ถูกกำหนดโดยการวัดเส้นผ่านศูนย์กลางของอาณานิคมใน 2 เส้นทางที่เทวดาถูกเมื่อจาน Petri ควบคุมพื้นผิวของถูกปกคลุมด้วยเห็ดรา 7 วันหลังจากปลูกเชื้อการ fungistatic – fungicidal ธรรมชาติของน้ำมันหอมระเหยคือการทดสอบโดยการฟื้นฟูสังเกตการเจริญเติบโตของการเจริญของการรักษาแผ่นดิสก์ต่อไปนี้บน PDA ผล fungicidal คือ ที่ไม่มีการเติบโต ขณะที่ผล fungistatic ที่การยับยั้งชั่วคราวการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่เกิดขึ้น การใช้แผ่นขาว B ,