The cell pellets were resuspended in 500 mL TE buffer
containing the lytic enzymes derived from Rhizoctonia solani (1 mg/
mL), lysozyme (10 mg/mL) and lyticase from Arthrobacter luteus
(1 mg/mL) (all enzymes from SigmaeAldrich, Milan, Italy) and
incubated at 37 C for 2 h. After 30 min incubation at 37 C with
50 mg/mL ribonuclease A (SigmaeAldrich) and 5 g/L sodium
dodecyl sulphate (SDS), and a second incubation at 55 C for 30 min
with 10 mg/mL proteinase K (SigmaeAldrich), the DNAwas purified
by chloroform extraction and precipitated with two volumes of
ethanol plus 20 mg/mL glycogen (MBI Fermentas, Milan, Italy).
After centrifugation (maximum speed for 10 min at 4 C) the DNA
pellet was dried and resuspended in 50 mL Tris/HCl 10 mM, pH 8.0
เซลล์ในอัตรา resuspended 500 มิลลิลิตร TE บัฟเฟอร์
ที่มีเอนไซม์ไลติคได้มาจากเชื้อรา ( 1 มิลลิกรัม /
มิลลิลิตร ) , ไลโซไซม์ ( 10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และ lyticase จากยา luteus
( 1 mg / ml ) ( เอนไซม์จาก sigmaealdrich , มิลาน , อิตาลี ) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา
2 . หลังจาก 30 นาทีบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส
50 มก. / มล. ไรโบนิวคลีเ ( sigmaealdrich ) และ 5 กรัม / ลิตร
โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS )และบ่มที่ 55 ที่สองเป็นเวลา 30 นาที
10 mg / ml โปร K ( sigmaealdrich ) , dnawas บริสุทธิ์
โดยการสกัดคลอโรฟอร์มและตกตะกอนกับสองเล่ม
เอทานอล พลัส 20 มก. / มล. และไกลโคเจน ( 2 fermentas , มิลาน , อิตาลี )
หลังการปั่นเหวี่ยง ( ความเร็วสูงสุด 10 นาทีที่ 4 C ) เม็ดดีเอ็นเอ
เป็นแห้งและ resuspended ในปริมาตร 50 มิลลิลิตร / HCl 10 บริษัทพีเอช 8.0 มม.
การแปล กรุณารอสักครู่..
