2.6. Myoglobin concentration
Myoglobin concentration was determined according to the method
of Faustman and Phillips (2001). Duplicate 5 g frozen samples were homogenized
in 45mL ice cold 40mMsodiumphosphate buffer at pH 6.8.
The homogenatewas filtered usingWhatman No. 1 filter paper, and the
absorbance of the filtrate at 525 nm (A525) was recorded using a UV-
2401PC spectrophotometer (Shimadzu Inc., Columbia, MD, USA) with
sodium phosphate buffer as blank. Myoglobin concentration was
calculated using the following equation.
Myoglobin (mg/g)=[A525/(7.6 mM−1 cm−1×1 cm)] x
[17,000/1000]×10.
where, 7.6 mM−1 cm−1 = millimolar extinction coefficient of
myoglobin at 525 nm; 1 cm = path length of cuvette; 17,000 Da =
average molecular mass of myoglobin; 10 = dilution factor.
2.7. Isolation of sarcoplasmic proteome
The sarcoplasmic proteomes from ISM and OSM steaks (n = 8)
collected on day 0 were extracted according to the method of Joseph
et al. (2012). Frozen sampleswere thawed at 4 °C, and 5 g ofmuscle tissuewas
homogenized in a 25 mLice-cold extraction buffer (40mMTris,
5 mM EDTA, pH 8.0) using a Waring blender (Waring Commercial,
Torrington, CT, USA). The homogenate was centrifuged at 10,000 ×g
for 10 min at 4 °C. The supernatant (sarcoplasmic proteome extract)
was filtered and utilized for subsequent analysis.
2.6 ความเข้มข้นไมโยโกลบินความเข้มข้นไมโยโกลบินได้กำหนดตามวิธีการFaustman และไขควง (2001) 5 กรัมแช่ตัวอย่างซ้ำถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 45mL น้ำแข็งเย็น 40mMsodiumphosphate บัฟเฟอร์ที่ pH 6.8Homogenatewas ที่กรองกระดาษกรอง usingWhatman หมายเลข 1 และabsorbance ของสารกรองที่ 525 nm (A525) ถูกบันทึกไว้โดยใช้ UV แบบ2401PC เครื่องทดสอบกรดด่าง (Shimadzu Inc. โคลัมเบีย MD สหรัฐอเมริกา) ด้วยโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ว่างไว้ มีความเข้มข้นไมโยโกลบินคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้ไมโยโกลบิน (mg/g) = [A525 / (7.6 mM−1 cm−1 × 1 ซม.)] x[17,000/1000] × 10, 7.6 mM−1 cm−1 = millimolar ดับสัมประสิทธิ์ของไมโยโกลบินที่ 525 nm 1 ซม. =ความยาวเส้นทางของ cuvette ดา 17,000 =มวลโมเลกุลเฉลี่ยของไมโยโกลบิน 10 =ปัจจัยเจือจาง2.7 การแยกของ sarcoplasmic proteomeProteomes sarcoplasmic จากสเต็ก ISM และ OSM (n = 8)รวบรวมในวันที่ 0 ที่แยกตามวิธีการของโจเซฟal. ร้อยเอ็ด (2012) แช่แข็ง thawed ที่ 4 ° C, 5 g ofmuscle tissuewas sampleswerehomogenized เป็นกลุ่มในบัฟเฟอร์ 25 สกัดเย็น mLice (40mMTris5 mM EDTA, pH 8.0) ใช้ blender Waring (Waring พาณิชย์Torrington, CT สหรัฐอเมริกา) Homogenate ถูก centrifuged ที่ 10000 × gใน 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatant (sarcoplasmic proteome สกัด)กรอง และใช้สำหรับวิเคราะห์ภายหลัง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.6 ความเข้มข้นของ myoglobin
เข้มข้น myoglobin
ถูกกำหนดตามวิธีการของFaustman และฟิลลิป (2001) ซ้ำ 5
กรัมตัวอย่างแช่แข็งที่ถูกปั่นในน้ำแข็ง45ml บัฟเฟอร์เย็น 40mMsodiumphosphate ที่ pH 6.8.
homogenatewas กรอง usingWhatman ฉบับที่ 1
กระดาษกรองและการดูดกลืนแสงของกรองที่525 นาโนเมตร (A525) จะถูกบันทึกโดยใช้รังสียูวี
spectrophotometer 2401PC (Shimadzu Inc . โคลัมเบีย, MD, USA)
มีโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์เป็นที่ว่างเปล่า ความเข้มข้นของ myoglobin
ถูกคำนวณโดยใช้สมการต่อไป.
myoglobin (mg / g) = [A525 / (7.6 MM-1 ซม-1 × 1 ซม.)] x
[17000/1000] × 10.
ที่ 7.6 MM-1 ซม-1 = ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสีย millimolar ของ
myoglobin ที่ 525 นาโนเมตร; 1 ซม. ความยาวเส้นทางของ cuvette =; 17,000 ดา =
มวลโมเลกุลเฉลี่ยของ myoglobin; 10 = ปัจจัยที่ทำให้เจือจาง.
2.7 การแยกโปรตีน sarcoplasmic
proteomes sarcoplasmic จากสเต็ก ISM และ OSM (n = 8)
เก็บรวบรวมในวันที่ 0
ถูกสกัดตามวิธีการของโจเซฟเอตอัล (2012) sampleswere แช่แข็งละลายที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและ 5 กรัม ofmuscle tissuewas
หดหายในบัฟเฟอร์สกัด 25 mLice เย็น (40mMTris,
EDTA 5 มิลลิค่า pH 8.0) โดยใช้เครื่องปั่น Waring (Waring พาณิชย์,
ทอร์, CT, USA) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000
×กรัมเป็นเวลา10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส สารละลาย (สารสกัดจากโปรตีน sarcoplasmic)
ถูกกรองและนำมาใช้ในการวิเคราะห์ที่ตามมา
การแปล กรุณารอสักครู่..