Analysis of product formation and d

Analysis of product formation and determination of dry
cell weight
To determine the concentration of substrates and extracellular
metabolites, three aliquots (1.5 mL each) of cultures
were rapidly frozen in liquid nitrogen and then
thawed on ice before centrifugation (8,000×g for 5  min
at 4°C) to recover supernatants for analysis. Glucose, cellobiose
and citric acid were measured using an Aminex
HPX87-H column (Bio-Rad Laboratories, Germany),
operating at 50°C using a mobile phase (5  mM H2SO4)
flowing at a rate of 0.5 mL/min. Glucose and cellobiose
were detected using a Shodex RI-101 refractive index
detector (Showa Denko, New York, NY, USA), while citric
acid was detected using an UV detector at 210  nm
(Dionex, Sunnyvale, CA, USA).
To determine the dry cell weight, three aliquots (5 mL
each) of cultures were filtered through pre-weighed PES
filters (0.45 μm; Sartorius Biolab, Germany). The biomass
retained by the filters was washed, dried in a microwave
oven at 150 W for 15 min and then placed in a desiccator
before weighing. The biomass yield was calculated as the
ratio of the amount of biomass obtained divided by the
amount of carbon source consumed.
Lipids were extracted from freeze-dried cells (~10 mg)
and methylated as described previously [55]. During the
lipid extraction, C17:0 (Sigma) (50 μg) was added as the
internal standard and fatty acid methyl esters (FAMEs)
were analyzed by gas chromatography (6890 N Network
GC System, Agilent, USA). The measurements were performed
in a split mode (1 μL at 250°C), with helium as
the carrier gas (2  mL/min). FAMEs were separated on
a HP-5 GC column (30 m × 0.32 mm I.D., 0.5-μm film
thickness, Agilent, USA). The temperature program was
120°C, ramped to 180°C (10°C/min) for 6  min, 183°C (0.33°C/min) for 9 min and 250°C (15°C/min) for 5 min.
Detection was performed using a flame ionization detector
(FID) at 270°C (2.0 pA). FAMEs were quantified by
comparing their profiles with that of standards of known
concentration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ของสะสมสินค้าและมุ่งมั่นของแห้งน้ำหนักเซลล์การกำหนดความเข้มข้น ของพื้นผิว และ extracellularmetabolites, aliquots สาม (1.5 mL ละ) ของวัฒนธรรมถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวอย่างรวดเร็วแล้วthawed บนน้ำแข็งก่อน centrifugation (8, 000 ซื้อ g ใน 5 นาทีที่ 4 ° C) การกู้คืน supernatants สำหรับการวิเคราะห์ กลูโคส cellobioseและกรดซิตริกถูกวัดโดยใช้การ Aminexคอลัมน์ HPX87 H (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad เยอรมนี),การทำงานที่ 50° C โดยใช้เฟสเคลื่อนที่ (5 mM กำมะถัน)ไหลในอัตรา 0.5 mL/นาที กลูโคสและ cellobioseพบใช้ดรรชนี Shodex RI-101เครื่องตรวจจับ (โช Denko, New York, NY, USA), แอซิด ซิทริกในขณะกรดพบใช้เป็นเครื่องตรวจจับ UV ที่ 210 nm(Dionex, Sunnyvale, CA, USA)การกำหนดน้ำหนักเซลล์แห้ง aliquots สาม (5 mLแต่ละ) วัฒนธรรมถูกกรองผ่าน PES ก่อนชั่งน้ำหนักตัวกรอง (0.45 μm บริษัทซาร์โทเรียส Biolab เยอรมนี) ชีวมวลรักษาตัวกรองถูกล้างทำความสะอาด แห้งในกับไมโครเวฟเตาอบที่ 150 W สำหรับ 15 นาที และอยู่ใน desiccator เป็นก่อนที่จะชั่ง มีคำนวณผลผลิตชีวมวลเป็นอัตราส่วนของจำนวนของชีวมวลที่ได้หารด้วยตัวจำนวนแหล่งคาร์บอนที่ใช้โครงการถูกสกัดจากกรอบเซลล์ (~ 10 มิลลิกรัม)และ methylated ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [55] ในระหว่างไขมันสกัด C17:0 (ซิกมา) เพิ่ม (50 μg) เป็นการภายในห้องและกรดไขมัน methyl esters (FAMEs)มีวิเคราะห์ โดย chromatography ก๊าซ (6890 N เครือข่ายGC ระบบ Agilent สหรัฐอเมริกา) ดำเนินการประเมินในโหมดแยก (1 μL ที่ 250° C), กับฮีเลียมเป็นก๊าซผู้ขนส่ง (2 mL/min) FAMEs ถูกแยกจากกันในคอลัมน์ GC HP 5 (30 m × 0.32 มม.ประชาชน 0.5-μm ฟิล์มความหนา Agilent สหรัฐอเมริกา) โปรแกรมอุณหภูมิ120° C, ramped ถึง 180° C (10° C/นาที) สำหรับขั้นต่ำ 6, 183° C (0.33 องศาเซลเซียส/นาที) นาทีที่ 9 และ 250° C (15° C/นาที) ใน 5 นาทีทำตรวจสอบโดยใช้เครื่องตรวจจับการ ionization เป็นเปลวไฟ(FID) ที่ 270° C (2.0 ป่า) FAMEs ถูก quantified โดยโปรไฟล์ของพวกเขากับมาตรฐานของรู้จักเปรียบเทียบความเข้มข้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ของการพัฒนาผลิตภัณฑ์และความมุ่งมั่นของแห้งน้ำหนักเซลล์เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของพื้นผิวและสารสารสามaliquots (1.5 มิลลิลิตรในแต่ละ) ของวัฒนธรรมที่ถูกแช่แข็งอย่างรวดเร็วในไนโตรเจนเหลวและจากนั้นละลายน้ำแข็งก่อนที่จะหมุนเหวี่ยง(8000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่4 ° C) ในการกู้คืน supernatants สำหรับการวิเคราะห์ กลูโคส cellobiose และกรดซิตริกถูกวัดโดยใช้ Aminex คอลัมน์ HPX87-H (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad, เยอรมนี), การดำเนินงานที่ 50 องศาเซลเซียสโดยใช้เฟสเคลื่อนที่ (5 มิลลิ H2SO4) ไหลในอัตรา 0.5 มิลลิลิตร / นาที กลูโคสและ cellobiose ถูกตรวจพบโดยใช้ Shodex RI-101 ดัชนีหักเหตรวจจับ(Showa Denko, New York, NY, สหรัฐอเมริกา) ในขณะที่ซิตริกกรดที่ตรวจพบการใช้เครื่องตรวจจับรังสียูวีที่210 นาโนเมตร(Dionex, ซันนีเวล, CA, USA). การตรวจสอบ น้ำหนักเซลล์แห้งสาม aliquots (5 มิลลิลิตรในแต่ละ) ของวัฒนธรรมที่ถูกกรองผ่านก่อนชั่งน้ำหนัก PES กรอง (0.45 ไมครอน; Sartorius Biolab, เยอรมนี) ชีวมวลที่เก็บไว้โดยตัวกรองที่ถูกล้างแห้งในเตาไมโครเวฟเตาอบที่150 วัตต์นาน 15 นาทีแล้ววางไว้ในเดซิก่อนที่จะชั่งน้ำหนัก ผลผลิตชีวมวลที่ถูกคำนวณเป็นอัตราส่วนของปริมาณของชีวมวลที่ได้รับหารด้วยปริมาณของแหล่งคาร์บอนบริโภค. ไขมันสกัดจากเซลล์แห้ง (~ 10 มิลลิกรัม) และสารตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [55] ในระหว่างการสกัดไขมัน C17: 0 (ซิกม่า) (50 ไมโครกรัม) ถูกบันทึกเป็นมาตรฐานภายในและกรดไขมันเมทิลเอสเตอร์(FAMEs) วิเคราะห์แก๊ส chromatography (6890 ยังไม่มีเครือข่ายระบบGC, Agilent สหรัฐอเมริกา) วัดได้ดำเนินการในโหมดแยก (1 ไมโครลิตรที่ 250 ° C) ด้วยก๊าซฮีเลียมเป็นก๊าซที่ผู้ให้บริการ(2 มิลลิลิตร / นาที) FAMEs ถูกแยกออกในHP-5 คอลัมน์ GC (30 เมตร× 0.32 มม ID ภาพยนตร์ 0.5 ไมครอนหนาAgilent สหรัฐอเมริกา) โปรแกรมที่อุณหภูมิ120 องศาเซลเซียส ramped ที่ 180 ° C (10 ° C / นาที) เป็นเวลา 6 นาที, 183 ° C (0.33 ° C / นาที) 9 นาทีและ 250 ° C (15 ° C / นาที) 5 นาที. ตรวจสอบได้รับการดำเนินการโดยใช้เครื่องตรวจจับเปลวไฟไอออนไนซ์(FID) ที่ 270 ° C (2.0 ต่อปี) FAMEs ถูกวัดโดยเปรียบเทียบโปรไฟล์ของพวกเขากับที่ของมาตรฐานของการรู้จักความเข้มข้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ของการพัฒนาผลิตภัณฑ์และการกำหนดอะไรไหมไหม

เพื่อตรวจสอบน้ำหนักเซลล์แห้งความเข้มข้นของพื้นผิว และภายนอก
metabolites 3 เฉยๆ ( 1.5   ml แต่ละ ) ของวัฒนธรรม
ได้อย่างรวดเร็วแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวแล้ว
ละลายบนน้ำแข็งก่อนปั่น ( 8000 × g 5 มั้ย มิน
ที่ 4 ° C supernatants ) การกู้คืนสำหรับการวิเคราะห์ เซลโลไบโอส
กลูโคสและกรดซิตริก มีการวัด aminex
hpx87-h คอลัมน์ ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ , เยอรมัน ) ,
อุณหภูมิ 50 °องศาเซลเซียสโดยใช้เฟสเคลื่อนที่ ( 5 ไหมอืมกรดซัลฟิวริก )
ไหลในอัตรา 0.5 มิลลิลิตร / นาที กลูโคส และอะไรที่ถูกตรวจพบการใช้ shodex ri-101

เครื่องตรวจจับ ( Showa Denko ดัชนีหักเห , New York , NY , USA ) , ในขณะที่กรดซิตริก
ตรวจโดยใช้เครื่องตรวจจับรังสียูวีที่ 210 รึเปล่า nm
( DIONEX Sunnyvale , CA , USA ) .
กำหนดน้ำหนักเซลล์แห้งสามเฉยๆ ( 5 รึเปล่า ml
แต่ละ ) ของวัฒนธรรมที่ถูกกรองผ่านตัวกรองก่อนชั่ง PES
( 0.45  μ M ; Sartorius ไบโอแลป เยอรมนี ) ชีวมวล
เก็บไว้โดยตัวกรองก็ล้างแห้งในไมโครเวฟเตาอบที่ 150 W
  15  มินและวางไว้แล้วในเดซิกเคเตอร์
ก่อนชั่ง . ผลผลิตมวลชีวภาพมีค่าเป็น
อัตราส่วนของปริมาณที่ได้หารด้วย
ปริมาณคาร์บอนแหล่งบริโภค .
ไขมันสกัดจากเซลล์แห้ง ( ~ 10 รึเปล่า
methylated มิลลิกรัม ) และตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 55 ] ในการสกัดไขมัน c17:0
, ( ซิกม่า ) (  μ 50 g ) เพิ่มเป็น
ภายในมาตรฐานและกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ ( FAMEs )
วิเคราะห์ด้วยแก๊สโครมาโตกราฟี ( 6890  เครือข่าย
GC ระบบ , Agilent , USA ) การวัดจำนวน
ในโหมดแยก ( 1  μ L ที่ 250 ° C ) , ฮีเลียมเป็นแก๊สตัวพา (
2 รึเปล่า ml / min ) สารแยกในการ hp-5 GC คอลัมน์ ( 30   M  ×  0.32 ไหมอืมบัตรประจำตัว , 0.5 - μ M ภาพยนตร์
หนา , Agilent , USA ) โปรแกรมอุณหภูมิ 120 องศา C
, 180 ° C ( สร้าง 10 ° C / นาที ) 6 มั้ย มิน , 183 ° C ( 0.33 องศาองศาเซลเซียส / นาที ) 9 มั้ยมินและ 250 ° C ( 15 ° C / นาที ) 5 . การตรวจหาอะไร
ใช้เฟลมไอออไนเซชันเครื่องตรวจจับ
( FID ) 270 ° C ( 2.0 ( PA )ดีถูก quantified โดย
เปรียบเทียบโปรไฟล์ของพวกเขากับมาตรฐานที่รู้จัก
ความเข้มข้น