Measurement of cellular ROS product

Measurement of cellular ROS production
Cellular ROS production was measured using a DCFDA assay kit according to manufactory’s
protocol. DCFDA (2’,7’-dichlorofluorescein diacetate), a cell-permeable fluorogenic dye, is
deacetylated by cellular esterases to a non-fluorescent compound, and later oxidized by ROS
into highly fluorescent 2’,7’-dichlorofluorescein (DCF), which measures hydroxyl, peroxyl and
other ROS activity within the cell. HCECs were grown on 96-well plates or 8-chamber slides.
When reached confluence, the cells were washed twice with phosphate-buffered saline (PBS)
and then incubated with 25 μM DCFDA in essential medium with 10% FBS in 37°C incubator
for 45 min. After PBS washed twice, the cells were exposed to hyperosmotic media (350, 400 or
450 mOsM) by adding NaCl (19, 44 or 69 mM, respectively) for different time periods (30–180
min). Cells images were taken under fluorescent microscope. Cell fluorescence in 96-well plates
was measured at 488 nm excitation and 525 nm emission using Tecan Infinite M200 Multimode
Microplate Reader (Tecan US, Inc. Morrisville, NC) after adding NaCl for 15–120 mins.
Relative changes of DCF fluorescence were expressed as fold increase over untreated cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวัดผลิต ROS โทรศัพท์มือถือโทรศัพท์มือถือผลิต ROS ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบ DCFDA ตามของโรงงานโพรโทคอลการ DCFDA (2', 7' dichlorofluorescein diacetate), สี fluorogenic เซลล์ permeable เป็นdeacetylated โดย esterases โทรศัพท์มือถือกับสารประกอบไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์ และออกซิไดซ์ โดย ROS ในภายหลังเป็นเรืองแสงสูง 2', 7'-dichlorofluorescein (DCF), ซึ่งมาตรการไฮดรอกซิล peroxyl และกิจกรรม ROS อื่น ๆ ภายในเซลล์ HCECs ถูกปลูกบนแผ่น 96 ดีหรือภาพนิ่ง 8 หอเมื่อมาถึงบรรจบ เซลล์ถูกล้างสองครั้งกับ buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS)แล้ว incubated กับ μM 25 DCFDA ในกลางสำคัญ 10% FBS ใน incubator ที่ 37° Cสำหรับ 45 นาที หลังจาก PBS ล้างสอง เซลล์ได้สัมผัสกับสื่อ hyperosmotic (350, 400 หรือ450 mOsM) โดยเพิ่ม NaCl (19, 44 หรือ 69 มม. ตามลำดับ) สำหรับรอบระยะเวลาต่าง ๆ (30 – 180นาที) ภาพเซลล์ที่ถ่ายภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรส เซลล์ fluorescence ในดี 96 แผ่นมีวัดที่ 488 nm ในการกระตุ้นและปล่อยก๊าซ 525 nm ใช้ Tecan อนันต์ M200 Multimodeอ่าน Microplate (สหรัฐอเมริกา inc. Tecan Morrisville, NC) หลังเพิ่ม NaCl สำหรับ 15 – 120 นาทีการเปลี่ยนแปลงสัมพัทธ์ของ DCF fluorescence ถูกแสดงเป็นพับเพิ่มผ่านเซลล์ที่ไม่ถูกรักษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวัดการผลิตโทรศัพท์มือถือ ROS
ผลิตมือถือ ROS วัดโดยใช้ชุดทดสอบ DCFDA
ตามโรงงานของโปรโตคอล DCFDA (2 '7'-dichlorofluorescein diacetate) สีย้อมเซลล์ดูดซึมแจงเป็น
deacetylated โดย esterases โทรศัพท์มือถือที่จะเป็นสารที่ไม่เรืองแสงและออกซิไดซ์ในภายหลังโดย ROS
เข้าสูงเรืองแสง 2', 7'-dichlorofluorescein (DCF) ซึ่งมาตรการไฮดรอก, peroxyl
และกิจกรรมอื่นๆ ROS ภายในเซลล์ HCECs ปลูกบนจาน 96 หลุมหรือภาพนิ่ง 8 ห้อง.
เมื่อมาถึงจุดบรรจบเซลล์ถูกล้างครั้งที่สองด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส)
และบ่มแล้วกับ 25 ไมครอน DCFDA ในสื่อที่สำคัญ 10% FBS ใน 37 ° C ศูนย์บ่มเพาะ
สำหรับ 45 นาที หลังจากล้างพีบีเอสเป็นครั้งที่สองเซลล์ได้สัมผัสกับสื่อ hyperosmotic (350, 400 หรือ
450 mOsm) โดยการเพิ่มโซเดียมคลอไรด์ (19, 44 หรือ 69 มมตามลำดับ) สำหรับช่วงเวลาที่แตกต่างกัน (30-180
นาที) ภาพที่ถูกถ่ายเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง การเรืองแสงของเซลล์ในแผ่น 96
หลุมวัดที่488 นาโนเมตรและกระตุ้นการปล่อย 525 นาโนเมตรโดยใช้ Tecan ไม่มีที่สิ้นสุด M200
มัลติอ่านไมโคร(Tecan สหรัฐ, Inc มอร์ริส, NC) หลังจากที่เพิ่มโซเดียมคลอไรด์สำหรับ 15-120 นาที.
เปลี่ยนแปลงสัมพัทธ์ของการเรืองแสง DCF มีการแสดงออก การเพิ่มขึ้นเท่ามากกว่าเซลล์ได้รับการรักษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัดผลตอบแทนการผลิตโทรศัพท์มือถือโทรศัพท์มือถือผลตอบแทนการผลิต
เป็นวัดโดยใช้วิธีตามขั้นตอน dcfda ชุดโรงงาน

dcfda ( 2 ' 7 ' - ได ซิเตท dichlorofluorescein ) เซลล์สามารถดูดซึม fluorogenic ย้อม ,
deacetylated โดยเซลล์เพื่อหาอาหารที่พบในประเทศไทยไม่เรืองแสงผสมและต่อมาจะถูกออกซิไดซ์โดย Ros
เป็นอย่างสูงเรืองแสง 2 ' 7 ' - dichlorofluorescein ( 2 ) ซึ่งมาตรการไฮดรอกซิลและกิจกรรมอื่น ๆ peroxyl
ผลตอบแทนภายในเซลล์ hcecs ปลูกบนแผ่นสไลด์ 96 ดีหรือ 8-chamber .
เมื่อถึงบรรจบ เซลล์ก็ล้างสองครั้งกับฟอสเฟตในน้ำเกลือ ( PBS )
แล้วแยก 25 μ M dcfda จำเป็นปานกลาง 10% FBS ใน 37 ° C เครื่องฟักไข่
45 นาที หลังจาก PBS ซักสองครั้ง เซลล์ที่ได้รับการแช่ในวัคซีนสื่อ ( 350 , 400 หรือ
450 mOsm ) โดยการเพิ่มเกลือโซเดียมคลอไรด์ ( 19 , 44 หรือ 69 มิลลิเมตร ตามลำดับ ) สำหรับช่วงเวลาที่แตกต่างกัน ( 30 - 180
มิน ) เซลล์ภาพถ่ายภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง จากเซลล์ใน 96 ดีจาน
เป็นวัดที่ 488 นาโนเมตรและกระตุ้นการใช้ 525 นาโนเมตร TECAN อนันต์ m200 มัลติ
อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( ทีแคนเราสำหรับ Morrisville , NC ) หลังการเพิ่มขนาด 15 – 120 นาที .
การเปลี่ยนแปลงความสัมพันธ์ของการแสดงออกเป็น 2 พับเพิ่มกว่ารักษาเซลล์