A serious problem in achieving effi

A serious problem in achieving efficient and predictable
transgene expression is the potentially deleterious effect of
endogenous genomic sequences near the site of integration.
The presence of LCRs within transgenes may overcome the
influence of these flanking sequences. Specific regions of
mammalian DNA, A-elements, have been identified which
mediate attachment of the chromatin to the nuclear scaffold
(11). Reporter genes flanked by A-elements exhibit elevated
expression that is insertion site-independent in stably transfected
cultured cells. The availability of control elements that
would render a transgene free from the unpredictable influences
of the mouse genome would enable copy numberdependent
expression, thereby establishing a mechanism to
achieve reproducibly higher levels of transgene transcription.

(see ref 29 for review). Knowledge of developmental gene
regulation is used to direct the expression of toxins or toxinconjugates
to particular cell types at specific times. The ablation
of selected cell populations is a powerful reverse genetic
tool for determining the function of developing and differentiated
cells, and may be useful for dissecting cell lineage.
Transgenes can cure as well as cripple. Gene therapy, the
correction of genetic disease by direct molecular treatment of
a mutated gene, requires that the defective genetic information
be replaced or supplemented with a normal functional
gene. In gene augmentation (Fig. 2A), the expression of new
genetic material that randomly integrates into the genome of
a defective somatic or embryonic stem cell can complement
the host mutation, thereby curing the disease. Unfortunately,
the transgene will occasionally integrate into and inactivate
a necessary host gene, or be negatively influenced by endogenous
flanking sequences. Also, the expression of a
functional gene product will not necessarily cure diseases
caused by defective multimeric proteins; the presence of mutated
subunits can efficiently inactivate most entire complexes
(Fig. 2A). Nevertheless, this approach has been used
to ameliorate the symptoms of some genetic diseases caused
by underproduction of normal proteins. For example,
shiverer (shi) mice transgenic for a normal mouse myelin
basic protein gene produce compacted myelin in the central
nervous system and no longer shiver (30); /3-thalasemia in
mice homozygous for a deletion in the endogenous flrnai
globin gene can be extinguished by introduction of a normal
mouse 13maJ globin gene (31); and a gonadotropic-releasing
hormone transgene can compensate for the hypogonadal
(hpg) mutation in mice (32).
A gain-of-function approach that is more powerful and
free of potential genetic side-effects is targeted gene correction
(Fig. 2B), in which defective DNA sequences are
replaced with functional sequences without additional
genetic disturbance. The best method for gene correction is
by genetically manipulating cultured stem cells, such as ES
cells or bone marrow cells, selecting for cells carrying a corrected
allele and reintroducing those cells back into a
suitable host organ (Fig. IC). Thompson et al. (33) corrected
an HPRT-deficient ES cell line by targeted homologous
recombination, and then produced a chimeric mouse in
which the HPRT ES cells had contributed to the germ line.
This approach has the potential to cure any genetic defect in
animals; however, ethical issues may restrict genetic
modification to various somatic stem cells in humans.
MODELS FOR THE DEVELOPMENT AND
TREATMENT OF DISEASE
One of the most important applications of transgenic technology
is the creation of animal models of human disease.
This potential has been realized by the extensive characterization
of gene promoters and enhancers, permitting directed
expression of foreign genes to specific types of cells. Once established,
transgenic models can be used to dissect molecular
mechanisms contributing to the pathogenesis of specific diseases,
and to identify agents that can abrogate the onset of
the disease, slow its progression, or ameliorate its symptoms.
Transgenic mice have been used to establish models for AIDS
and AIDS-related disorders. When the human immunodeficiency
virus (HIV) transactivating tat gene is placed under
the control of the HIV regulatory region, skin lesions appear
resembling Kaposi’s sarcoma (34). A line of transgenic mice
bearing the intact HIV provirus developed a spontaneous
and fatal disease reminiscent of human AIDS (35)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปัญหาร้ายแรงในการบรรลุเป้าหมายอย่างมีประสิทธิภาพ และได้
transgene นิพจน์เป็นผลร้ายอาจ
ลำดับ endogenous genomic ใกล้ไซต์ของรวม
สถานะของ LCRs ใน transgenes อาจเอาชนะการ
อิทธิพล flanking ลำดับเหล่านี้ได้ ภูมิภาคที่เฉพาะเจาะจงของ
mammalian DNA, A-องค์ประกอบ ได้รับการระบุที่
บรรเทาแนบของโครมาตินจะไป scaffold
(11) นิวเคลียร์ โปรแกรมรายงานยีนนักองค์ประกอบ A แสดงยก
นิพจน์ที่จะแทรกไซต์อิสระใน stably transfected
อ่างเซลล์ ความพร้อมขององค์ประกอบควบคุมที่
จะแสดง transgene ที่ปราศจากอิทธิพลไม่แน่นอน
เม้าส์ จีโนมจะเปิดสำเนา numberdependent
นิพจน์ ดังนั้นจึงสร้างกลไกให้
บรรลุ transgene transcription

(see ref 29 for review) ระดับสูง reproducibly ความรู้ด้านยีนพัฒนา
ระเบียบจะใช้ค่าของสารพิษหรือ toxinconjugates
ชนิดเซลล์เฉพาะในเวลาที่ระบุ จี้ที่
ประชากรเซลล์ที่เลือกเป็นกลับมีประสิทธิภาพพันธุ
เครื่องมือในการกำหนดฟังก์ชันของการพัฒนา และแยกแยะ
เซลล์ และอาจมีประโยชน์สำหรับ dissecting เซลล์ลินเนจ.
Transgenes สามารถรักษาและในการ ยีนบำบัด การ
แก้ไขโรคทางพันธุกรรมโดยรักษาระดับโมเลกุลโดยตรง
ยีนกลาย จำเป็นต้องข้อมูลพันธุกรรมบกพร่อง
ถูกแทน หรือเสริมด้วยการทำงาน
ยีน ในการจำแนกยีน (Fig. 2A), นิพจน์ของใหม่
วัสดุทางพันธุกรรมที่ได้รวมเป็นกลุ่มของ
บกพร่อง somatic หรือตัวอ่อนสเต็มเซลล์สามารถเติมเต็ม
กลายพันธุ์ โฮสต์จึงบ่มโรค อับ,
transgene บางครั้งจะรวมเข้า และยก
ยีนเป็นโฮสต์ที่จำเป็น หรือจะส่งผล โดย endogenous
flanking ลำดับนั้น ยัง นิพจน์ของการ
ผลิตภัณฑ์ยีนทำงานจะไม่จำเป็นต้องรักษาโรค
เกิดจากโปรตีนบกพร่อง multimeric ของกลาย
subunits สามารถยก
(Fig. 2A) สิ่งอำนวยความสะดวกทั้งหมดส่วนใหญ่ได้อย่างมีประสิทธิภาพได้ อย่างไรก็ตาม มีการใช้วิธีนี้
เพื่อ ameliorate อาการของโรคทางพันธุกรรมบางอย่างเกิดขึ้น
โดยของโปรตีนปกติ ตัวอย่าง,
หนู shiverer (shi) ถั่วเหลืองสำหรับ myelin เมาส์ปกติ
ยีนพื้นฐานสร้าง myelin กระชับในใจกลาง
ระบบประสาทและไม่ศิวะ (30); /3-thalasemia ใน
หนู homozygous สำหรับการลบใน endogenous flrnai
globin ยีนสามารถยกเลิก โดยปกติแนะนำ
เมาส์ 13maJ globin ยีน (31); และที่ gonadotropic-ปล่อย
transgene ฮอร์โมนสามารถชดเชยการกลายพันธุ์ hypogonadal
(hpg) ในหนู (32) .
วิธีกำไรของฟังก์ชันที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น และ
ฟรีของพันธุกรรมอาจเกิดผลข้างเคียงคือยีนเป้าหมายการแก้ไข
(Fig. 2B) ในดีเอ็นเอที่มีข้อบกพร่องอยู่ลำดับ
ถูกแทนที่ ด้วยลำดับการทำงานโดยไม่ต้องเพิ่มเติม
รบกวนทางพันธุกรรมได้ วิธีดีที่สุดสำหรับการแก้ไขยีน
โดยแปลงพันธุกรรมกับการจัดการกับเซลล์ต้นกำเนิดอ่าง เช่น ES
เซลล์หรือเซลล์ไขกระดูก การเลือกสำหรับดำเนินการแก้ไขเซลล์
allele และ reintroducing เซลล์เหล่านั้นกลับไป
โฮสต์เหมาะอวัยวะ (Fig. IC) ทอมป์สันและ al. (33) แก้ไข
บรรทัดเซลล์ ES HPRT ไม่ได้ตามเป้าหมาย homologous
recombination แล้ว เมาส์ chimeric ใน
ซึ่งเซลล์ HPRT ES มีส่วนบรรทัดจมูก.
วิธีการนี้มีศักยภาพในการแก้ข้อบกพร่องทางกรรมพันธุ์ใน
สัตว์ อย่างไรก็ตาม ปัญหาจริยธรรมอาจจำกัดพันธุ
ปรับเปลี่ยนสเต็มเซลล์ somatic ต่าง ๆ ในมนุษย์
รุ่นพัฒนาและ
รักษาโรค
หนึ่งของโปรแกรมประยุกต์ที่สำคัญของถั่วเหลืองเทคโนโลยี
คือการสร้างแบบจำลองสัตว์มนุษย์โรคได้
ศักยภาพนี้มีการรับรู้การจำแนกอย่างละเอียด
ยีนก่อและเพิ่ม อนุญาตให้นำ
ของยีนต่างชนิดเฉพาะของเซลล์ เมื่อก่อตั้ง,
รูปถั่วเหลืองสามารถใช้ dissect โมเลกุล
กลไกสนับสนุนพยาธิกำเนิดของโรคเฉพาะ,
และระบุตัวแทนที่สามารถ abrogate ของ
โรค ชะลอความก้าวหน้า หรือ ameliorate อาการของการ
หนูถั่วเหลืองถูกนำมาใช้สร้างแบบจำลองสำหรับเอดส์
และโรคที่เกี่ยวข้องกับเอดส์ เมื่อเอชไอวีมนุษย์
ไวรัส (เอชไอวี) transactivating ตาดยีนอยู่ภายใต้
ปรากฏได้ผิวควบคุมของภูมิภาคทางเอชไอวี
คล้าย Kaposi sarcoma ของ (34) บรรทัดของถั่วเหลืองหนู
เรือง provirus เอชไอวีเหมือนเดิมพัฒนาเป็นอยู่
และโรคร้ายแรงของมนุษย์เอดส์ (35)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปัญหาร้ายแรงในการบรรลุประสิทธิภาพและการแสดงออกของยีนได้
คือผลกระทบที่อาจเป็นอันตรายในลำดับจีโนมของ
ใกล้เว็บไซต์ของการบูรณาการ การปรากฏตัวของ lcrs ภายใน transgenes

อาจเอาชนะอิทธิพลของเหล่านี้ flanking ลำดับ เฉพาะภูมิภาคของ
) ดีเอ็นเอ a-elements ได้รับการระบุซึ่ง
,สิ่งที่แนบมาของการไกล่เกลี่ยกับนิวเคลียร์นั่งร้าน
( 11 ) ยีนรายงานผล ขนาบข้างด้วย a-elements จัดแสดงสูง
การแสดงออกที่แทรกเว็บไซต์อิสระในเสถียร transfected
เพาะเลี้ยงเซลล์ ความพร้อมขององค์ประกอบการควบคุมที่
จะให้ยีนฟรีจากอิทธิพลของพันธุกรรมได้

numberdependent เมาส์จะช่วยให้ สีหน้า คัดลอกจึงสร้างกลไกเพื่อให้บรรลุระดับที่สูงขึ้นของ reproducibly
ยีนถอดความ

( เห็นกรรมการ 29 รีวิว ) ความรู้เกี่ยวกับกฎระเบียบของยีน
พัฒนาการใช้ตรงการแสดงออกของสารพิษหรือ toxinconjugates
เฉพาะเซลล์ชนิดในเวลาที่ระบุ Ablation
เลือกประชากรเซลล์ที่มีประสิทธิภาพเป็นพันธุกรรม
ย้อนกลับเครื่องมือสำหรับการกำหนดฟังก์ชันของการพัฒนา และมาย
เซลล์ และอาจเป็นประโยชน์สำหรับผ่าเซลล์เชื้อสาย .
transgenes สามารถรักษา รวมทั้งคนพิการ ยีนบำบัด ,
แก้ไขพันธุกรรมโดยการใช้โมเลกุลโดยตรงของ
มียีนกลายพันธุ์ มีข้อมูลทางพันธุกรรมที่บกพร่อง
ถูกแทนที่หรือเสริมด้วยปกติการทำงาน
ยีน ในยีนเสริม ( รูปที่ 2A )การแสดงออกของสารพันธุกรรมใหม่
สุ่มรวมลงในจีโนมของการบกพร่องทางกายหรือเซลล์ต้นกำเนิดตัวอ่อนสามารถเติมเต็ม
โฮสการกลายพันธุ์จึงรักษาโรค แต่น่าเสียดายที่บางครั้งจะรวมเป็นยีน

และ ยับยั้งยีนโฮสต์ที่จำเป็นหรือได้รับอิทธิพลทางลบจากภายนอก
flanking ลำดับ นอกจากนี้ สีหน้าของ
สินค้าจีน การทำงานจะไม่จําเป็นต้องรักษาโรค
ที่เกิดจากข้อบกพร่อง multimeric โปรตีน ; การปรากฏตัวของหน่วยได้อย่างมีประสิทธิภาพสามารถยับยั้งทั้งหมด 9

( รูปที่ 2A ที่สุดเชิงซ้อน ) อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้ถูกใช้เพื่อบำบัดอาการของโรค

โดย underproduction โรคทางพันธุกรรมบางอย่างเกิดจากโปรตีนปกติ ตัวอย่างเช่น
shiverer ( ชิ ) หนูดัดแปลงพันธุกรรมเป็นปกติเมาส์เยื่อไมอีลินพื้นฐานโปรตีนยีนผลิตอัดไม

ในระบบประสาทส่วนกลางและไม่สั่น ( 30 ) ; / 3-thalasemia ใน
หนูยีนลบในโครงสร้าง flrnai
sequence จะดับตามแนะนำของเมาส์ปกติ
13maj sequence ( 31 ) ปล่อย
; และโกนาโดโทรปิคยีนฮอร์โมนสามารถชดเชย hypogonadal
( hpg ) การกลายพันธุ์ในหนู ( 32 ) .
ได้รับของวิธีฟังก์ชันที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นและผลข้างเคียงที่อาจเกิดขึ้น คือ พันธุกรรม ฟรี

แก้ไขยีนเป้าหมาย ( รูปที่ 2B ) ซึ่งในการลำดับ DNA
แทนที่ด้วยลำดับการทำงานโดยไม่มีการรบกวนทางพันธุกรรมเพิ่มเติม

วิธีที่ดีที่สุดสำหรับการแก้ไขยีน
โดยการเพาะเลี้ยงเซลล์ต้นกำเนิดพันธุกรรม เช่น ES
เซลล์หรือเซลล์ไขกระดูก การเลือกเซลล์ถือการแก้ไขใน reintroducing
และเซลล์เหล่านั้นกลับมาเป็นโฮสต์ที่เหมาะสม
อวัยวะ ( รูป IC ) Thompson et al . ( 33 ) การแก้ไขการขาด
hprt ES เซลล์เป้าหมายบรรทัดโดยการเปรียบเทียบ
แล้วผลิตเมาส์ที่ใน
ซึ่ง hprt ES เซลล์มีส่วนกับสายเชื้อ .
วิธีนี้มีศักยภาพในการรักษาข้อบกพร่องทางพันธุกรรมใน
สัตว์ อย่างไรก็ตาม ประเด็นด้านจริยธรรมที่อาจมีการ จำกัด การดัดแปรพันธุกรรม
ต่างๆโซมาติกสเต็มเซลล์ในมนุษย์
แบบจำลองสำหรับการพัฒนาและการรักษาของโรค

หนึ่งของการใช้งานที่สำคัญที่สุดของ
เทคโนโลยี การดัดแปรพันธุกรรม คือ การสร้างโมเดลของโรค
สัตว์มนุษย์ศักยภาพนี้ได้รับการตระหนักโดยครอบคลุมลักษณะของโปรโมเตอร์ของยีนและเพิ่ม

อนุญาตกำกับการแสดงออกของยีนที่ต่างประเทศเพื่อระบุชนิดของเซลล์ ก่อตั้งขึ้นเมื่อ ,
รูปแบบพันธุกรรมสามารถใช้ผ่าโมเลกุลกลไกการเกิดพยาธิสภาพของ

และระบุเฉพาะโรค ตัวแทนที่สามารถยกเลิกการโจมตีของ
โรคช้าของความก้าวหน้าหรือบำบัดอาการของ
หนูยีนได้ถูกใช้เพื่อสร้างแบบจำลองสำหรับโรคเอดส์และโรคที่เกี่ยวข้องกับโรคเอดส์
. เมื่อมนุษย์ไวรัสเอดส์ ( HIV )
transactivating ททท. ยีนอยู่ภายใต้การควบคุมของภูมิภาคหรือ

คล้ายโรคเอดส์ แผลผิวหนังปรากฏโรคมะเร็งคาโปซี ( 34 ) สายของหนูพันธุ์
แบกเหมือนเดิมเอชไอวีโปรไวรัสพัฒนาธรรมชาติ
ถึงโรคร้ายแรงของโรคเอดส์ ( 35 )
มนุษย์