Immediately after the tide and befo

Immediately after the tide and before the measurements
were taken, we removed one leg (fourth right walking
leg taken at the joint) from each participant in the
nesting group (i.e. the female, the attached male and all
satellites). The legs were frozen immediately in dry ice or
liquid nitrogen and transported from Seahorse Key to the
University of Florida where they were held at 80C for
later genomic DNA extraction. We allowed each crab to
recover in the wading pool for at least 1 h prior to release
(horseshoe crabs have a rapid clotting response and many
crabs have legs missing naturally). We saw most nesting
again on the following day (no mortality occurred).
We evaluated paternity for each clutch using the
methods described in Brockmann et al. (1994) (conducted
by C.N. and W.P.). Briefly, for adults, we ground a
1-cm3 sample of muscle tissue from each leg in a mortar
and pestle precooled with liquid nitrogen. For 16–24
larvae from each clutch, we ground the entire larva in a
1.5-ml microcentrifuge tube with a tube-shaped metal
pestle. We extracted DNA from these ground tissues using
standard phenol: chloroform procedures. We used each
genomic DNA as a template in a polymerase chain
reaction (PCR) to amplify a single microsatellite locus
developed previously. PCR products were resolved on
ethidium-stained, 7% polyacrylamide gels. We determined
paternity by comparing electrophoretic bands
of each larva with the mother, attached male and all
satellites that participated in the nesting.
Paternity analysis was possible with a single locus for
two reasons. First, the locus is extremely polymorphic,
with 22 alleles observed in 33 adults from our previous
study (Brockmann et al. 1994). Although we did not make
a precise assessment of the allelic frequencies in the population
of this study, inspection of the gels indicated a
genetic diversity similar to the previous study. That study
documented that all alleles had relatively low allelic frequencies,
with the most common allele having a frequency
of 0.14. So, even in the worst-case scenario where
the female, the attached male and one satellite male had
the six most common alleles, there was still a 52% chance
that any randomly drawn sperm from the population
would be recognized. The mean and median allele frequency
was 0.05, so the power to recognize extragroup
fertilizations was approximately 0.7, considerably greater
than this worst-case example. In our previous study,
fertilization by sperm with an allele not present in the
putative parents was only 3% (11 of 324). Even if all of
these were due to sperm left in the sand by other males
(some could be due to mutation, misgenotyping and mishandling
of samples), the rate is sufficiently low not to
affect the general trends and conclusions of either our
840 ANIMAL BEHAVIOUR, 60, 6

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลัง จากน้ำทันที และ ก่อนการประเมินได้มา เราเอาขาข้างหนึ่ง (สี่ขวาเดินข้อต่อขา) จากแต่ละผู้เข้าร่วมในการกลุ่มซ้อน (เช่นหญิง เพศชายแนบ และทั้งหมดดาวเทียม) ขาถูกแช่แข็งทันทีในน้ำแข็งแห้ง หรือไนโตรเจนเหลว และลำเลียงจากคีย์ซีมหาวิทยาลัยฟลอริดาซึ่งพวกเขาถูกจับที่ 80C สำหรับหลังจาก genomic DNA สกัด เราอนุญาตให้ปูแต่ละการฟื้นตัวในสระน้อย 1 h ก่อนปล่อย(ฮอร์สชูปูมีการตอบสนองต่อโรคอย่างรวดเร็วและจำนวนมากปูมีขาขาดธรรมชาติ) เราเห็นส่วนใหญ่เนสติ้งอีกครั้งในวันต่อไปนี้ (ไม่มีการตายเกิดขึ้น)เราประเมิน paternity สำหรับใช้หนีบแต่ละวิธีการอธิบายไว้ใน Brockmann et al. (1994) (ดำเนินโดย C.N. และ W.P.) สั้น ๆ สำหรับผู้ใหญ่ เราพื้นดินเป็นตัวอย่าง 1 cm3 ของกล้ามเนื้อจากแต่ละเลกในครกและ pestle precooled กับไนโตรเจนเหลว สำหรับ 16-24ตัวอ่อนจากเงื้อมมือของแต่ละ เราดินหนอนทั้งในการmicrocentrifuge 1.5 ml หลอด ด้วยโลหะเป็นรูปหลอดpestle เราสกัดดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อพื้นดินเหล่านี้ใช้วางมาตรฐาน: คลอโรฟอร์มกระบวนการ เราใช้แต่ละgenomic DNA เป็นแม่แบบในโซ่พอลิเมอเรสปฏิกิริยา (PCR) ขยายเป็นชนิด microsatellite หนึ่งโลกัสโพลพัฒนาก่อนหน้านี้ ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการแก้ไขในethidium สี 7% polyacrylamide gels เรากำหนดpaternity โดยเปรียบเทียบวงด้วยของหนอนแต่ละเพศชายแม่ แนบและทั้งหมดดาวเทียมที่เข้าร่วมในเนสติ้งที่วิเคราะห์ paternity เป็นไปได้ ด้วยโลกัสโพลเดียวสำหรับด้วยเหตุผลสองประการ ครั้งแรก โลกัสโพลเป็น polymorphic มากมี 22 alleles ในผู้ใหญ่ 33 จากเราก่อนหน้านี้(Brockmann et al. 1994) ศึกษาการ ถึงแม้ว่าเราไม่ได้ทำประเมินความแม่นยำของความถี่ allelic ในประชากรการศึกษานี้ ระบุตรวจสอบเจเป็นความหลากหลายทางพันธุกรรมคล้ายคลึงกับการศึกษาก่อนหน้านี้ การศึกษานั้นจัดทำเอกสารว่า alleles ทั้งหมดมีความถี่ค่อนข้างต่ำ allelicมี allele พบมากที่สุดมีความถี่ของ 0.14 ดังนั้น แม้ในปฎิที่หญิง เพศชายแนบ และหนึ่งดาวเทียมชายalleles ทั่ว 6 ยังคงมีโอกาส 52%ที่สเปิร์มการวาดโดยการสุ่มจากประชากรจะได้รับการรับรอง ค่าเฉลี่ยและความถี่ของ allele มัธยฐาน0.05 ดังนั้นอำนาจในการจดจำ extragroupfertilizations ได้ประมาณ 0.7 สูงมากกว่านี้อย่าง worst-case ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเราการปฏิสนธิจากอสุจิ มี allele ไม่อยู่ในผู้ปกครอง putative ถูกเพียง 3% (11 ของ 324) แม้ทั้งหมดเหล่านี้ได้เนื่องจากอสุจิออกจากทราย โดยชายอื่น ๆ(บางคนอาจเกิดจากการกลายพันธุ์ misgenotyping และเก็บตัวอย่าง), อัตราไม่ต่ำพอถึงส่งผลกระทบต่อแนวโน้มทั่วไปและบทสรุปของอย่างใดอย่างหนึ่งของเรา840 พฤติกรรมสัตว์ 60, 6

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทันทีหลังจากที่น้ำขึ้นน้ำลงและก่อนที่วัด
ถูกนำเราเอาออกขาข้างหนึ่ง (เดินขวาที่สี่
ขาถ่ายที่ร่วม) จากผู้เข้าร่วมในแต่ละ
กลุ่มทำรัง (เช่นหญิงที่ติดชายและ
ดาวเทียม) ขาที่ถูกแช่แข็งทันทีในน้ำแข็งแห้งหรือ
ไนโตรเจนเหลวและการขนส่งจากคีย์ซีฮอร์กับ
มหาวิทยาลัยฟลอริดาที่พวกเขาถูกจัดขึ้นที่ 80C สำหรับ
การสกัดดีเอ็นเอในภายหลัง เราได้รับอนุญาตให้ปูแต่ละที่จะ
ฟื้นตัวในสระว่ายน้ำลุยน้ำเป็นเวลาอย่างน้อย 1 ชั่วโมงก่อนที่จะปล่อย
(แมงดาทะเลมีการตอบสนองที่รวดเร็วและการแข็งตัวของหลาย
ปูมีขาหายไปตามธรรมชาติ) เราเห็นการทำรังมากที่สุด
อีกครั้งในวันรุ่งขึ้น (การตายที่เกิดขึ้นไม่ได้).
เราประเมินพ่อสำหรับแต่ละคลัชโดยใช้
วิธีการที่อธิบายไว้ใน Brockmann และคณะ (1994) (ดำเนินการ
โดย CN และ WP) สั้น ๆ สำหรับผู้ใหญ่เราพื้น
ตัวอย่าง 1 cm3 ของเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อจากขาแต่ละข้างในครก
และสาก precooled ด้วยไนโตรเจนเหลว สำหรับ 16-24
ตัวอ่อนจากแต่ละคลัทช์เราพื้นดินอ่อนทั้งใน
หลอดไมโคร 1.5 มลด้วยโลหะกระบอก
สาก เราสกัดดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อเหล่านี้พื้นดินโดยใช้
ฟีนอลมาตรฐาน: ขั้นตอนการคลอโรฟอร์ม เราใช้ในแต่ละ
ดีเอ็นเอเป็นแม่แบบในห่วงโซ่โพลิเมอร์
ปฏิกิริยา (PCR) เพื่อขยายทางเดินไมโครเดียว
ก่อนหน้านี้ได้รับการพัฒนา ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการแก้ไขใน
ethidium เปื้อน, 7% เจลอะคริเลต เรามุ่งมั่นที่
พ่อโดยการเปรียบเทียบวงอิเล็ค
ของตัวอ่อนกับแต่ละแม่ติดชายและ
ดาวเทียมที่มีส่วนร่วมในการทำรัง.
วิเคราะห์พ่อเป็นไปได้ที่มีทางเดินเดียวสำหรับ
สองเหตุผล ครั้งแรกที่สถานทีเป็น polymorphic มาก
กับ 22 อัลลีลพบในผู้ใหญ่ 33 จากก่อนหน้านี้
การศึกษา (Brockmann et al. 1994) ถึงแม้ว่าเราจะไม่ได้ทำให้
การประเมินที่แม่นยำของความถี่ allelic ประชากรใน
การศึกษาครั้งนี้การตรวจสอบของเจลที่ระบุ
ความหลากหลายทางพันธุกรรมคล้ายกับการศึกษาก่อนหน้านี้ ว่าการศึกษา
เอกสารที่อัลลีลทั้งหมดมีความถี่ค่อนข้าง allelic ต่ำ
ที่มีอัลลีลที่พบมากที่สุดที่มีความถี่
ของ 0.14 ดังนั้นแม้จะอยู่ในสถานการณ์ที่เลวร้ายที่สุดกรณีที่
หญิงชายที่แนบมาและชายดาวเทียมหนึ่งมี
หกอัลลีลที่พบมากที่สุดยังคงมีโอกาส 52%
ที่สเปิร์มใด ๆ ที่สุ่มจากประชากรที่
จะได้รับการยอมรับ ค่าเฉลี่ยและความถี่อัลลีลเฉลี่ย
เท่ากับ 0.05 ดังนั้นอำนาจในการรับรู้ extragroup
fertilizations ประมาณ 0.7 มากมากขึ้น
กว่าตัวอย่างที่เลวร้ายที่สุดกรณีนี้ ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา
ปฏิสนธิโดยสเปิร์มที่มีอัลลีลไม่ได้อยู่ใน
พ่อแม่สมมุติเป็นเพียง 3% (11 of 324) แม้ว่าทั้งหมดของ
เหล่านี้เนื่องจากสเปิร์มที่เหลืออยู่ในทรายโดยเพศชายอื่น ๆ
(บางคนอาจจะเกิดจากการกลายพันธุ์ misgenotyping และผิดพลาด
ของตัวอย่าง), อัตราการอยู่ในระดับต่ำพอที่จะไม่
ส่งผลกระทบต่อแนวโน้มทั่วไปและข้อสรุปของการอย่างใดอย่างหนึ่งของเรา
840 พฤติกรรมสัตว์ , 60, 6

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทันทีหลังจากน้ำและก่อนการวัด
ถ่ายเราเอาขาข้างหนึ่ง ( สี่ขาขวาเดิน
ถ่ายที่ร่วม ) จากผู้เข้าร่วมในแต่ละกลุ่ม ( เช่น
ซ้อนแนบชายและหญิง
ดาวเทียม ) ขาถูกแช่แข็งทันที ในที่แห้งแข็งหรือ
ไนโตรเจนเหลวและการขนส่งจากคีย์ม้าน้ำกับ
มหาวิทยาลัยฟลอริดาที่พวกเขาถูกจัดขึ้นที่ 80c สำหรับ
ต่อมา genomic DNA ที่สกัด เราอนุญาตให้แต่ละปู

หายในสระอย่างน้อย 1 ชั่วโมงก่อนที่จะปล่อย
( แมงดาทะเลมีการตอบสนองอย่างรวดเร็วและแข็งตัวปูมากมาย
ขาหายไปตามธรรมชาติ ) เราเห็นการทำรังส่วนใหญ่
อีกครั้งในวันต่อไป ( ไม่มีการตายเกิดขึ้น ) .
เราประเมินความเป็นแต่ละ clutch ใช้
วิธีการอธิบายไว้ในบร็อกเมิน et al . ( 1994 ) ( ดำเนินการ
โดย ซี. และหน้า ) สั้นๆ สำหรับผู้ใหญ่ เราดิน
1-cm3 ตัวอย่างของเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อจากแต่ละขาในครกและสาก precooled
ด้วยไนโตรเจนเหลว 16 24
–ลูกน้ำจากแต่ละคลัชเราพื้นดินตัวทั้งในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์
1.5-ml ด้วยหลอดรูปสากเหล็ก

เราสกัดดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อพื้นดินเหล่านี้ใช้
ฟีนอลมาตรฐาน : ขั้นตอนคลอโรฟอร์ม เราใช้แต่ละ