2.8. Sodiumdodecyl sulfate-polyacry

2.8. Sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
Samples (2 g) were added to 20 ml of rigor buffer (75 mM KCl, 10mM K2HPO4, 2mM MgCl2, 2 mM EGTA, pH 7.0) and homogenized
(20 s bursts) with a polytron homogenizer (T25, IKA Werke GmbH&Co., KG, Germany). The homogenate was centrifuged at 10,000g, 4 °C, for 10 min, after which time, the supernatant (S1) was decanted and saved. Fresh rigor buffer of 20 ml was then added to the pellet, and
the homogenization was repeated for three times. The S1 was used for sarcoplasmic fractions, whereas the slury remained after homogenization for three times was used for myofibrils.Samples were mixed 1:1 with standard sample buffer containing
10% ß-mercaptoethanol, 4% SDS, 1 M Tris–HCl, 20% glycerol, 0.2% bromophenol blue, and heated at 100 °C for 3 min and applied to the gel. Gel composition, electrophoresis running conditions, and post-electrophoresis treatment of gelswere conducted as described by Fritz, Swartz, and Greaser (1989). The samples (1mg/ml) were loaded on gels made of 4% stacking and 12% separating gel and subjected to electrophoresis at a constant current of 10–20 mA per gel using a mini-gel electrophoresis unit (SE 260, Amersham Biosciences Corp., NJ, USA). After electrophoresis, the gels were stainedwith 0.1% Coomassie brilliant blue R-250 in 40% methanol and 7% acetic acid, and destained with 40% methanol and 7% acetic acid. Molecular weights of protein bands were calculated using standard markers (M-3788, Sigma, USA). Each sarcoplasmic and myofibril protein fraction was examined by an image analysis system for the purpose of quantitative analysis (Kodak 1D Image Analysis Software, Eastman Kodak Company, NY, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8. Sodiumdodecyl ซัลเฟต polyacrylamide เจอิ (SDS-หน้า)ตัวอย่าง (2 กรัม) ถูกเพิ่มไปยังบัฟเฟอร์ที่เข้มงวด (75 mM KCl, 10 มม. K2HPO4, 2 มม. MgCl2, EGTA ค่า pH 7.0 มม.) 20 มิลลิลิตร และ homogenized(20 s ระเบิด) กับการ homogenizer polytron (T25 สควิด Werke GmbH & Co. กก. เยอรมนี) Homogenate ถูกเหวี่ยงที่ 10, 000 กรัม 4 ° C, 10 นาที หลังจากที่เวลา supernatant (S1) ดีแคนติ้ง และมีบันทึก สดมากกว่าบัฟเฟอร์ของ 20 ml ถูกแล้วเพิ่มเม็ด และhomogenization ครั้งสามซ้ำอีกครั้ง S1 ถูกใช้สำหรับเศษส่วน sarcoplasmic ขณะ slury ยังคงอยู่หลังจากที่ใช้สำหรับ myofibrils homogenization ครั้งที่สาม ตัวอย่างที่ผสม 1:1 กับตัวอย่างมาตรฐานที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์บาท 10%-mercaptoethanol, 4% SDS, 1 M ทริ – HCl กลีเซอรอล 20%, 0.2% bromophenol น้ำเงิน และความร้อนที่ 100 องศาเซลเซียส 3 นาที และใช้เจ ส่วนประกอบเจ อิทำเงื่อนไข และการรักษาหลังอิ gelswere ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ โดย Fritz, Swartz, Greaser (1989) ตัวอย่าง (1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ถูกโหลดเจทำซ้อน 4% และ 12% แยกเจ และให้อิที่กระแสคง 10-20 mA ต่อเจเจมินิอิชั้น (SE 260, Amersham วิทยาศาสตร์ชีวภาพในระดับ Corp., NJ สหรัฐอเมริกา) หลังจากอิ เจลถูก stainedwith 0.1% Coomassie สดใสน้ำเงิน R-250 ในเมทานอล 40% และ 7% กรดอะซิติก และ destained กับเมทานอล 40% และ 7% กรดอะซิติก น้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนวงถูกคำนวณโดยใช้เครื่องหมายมาตรฐาน (M-3788 ซิกม่า สหรัฐอเมริกา) แต่ละ sarcoplasmic และ myofibril โปรตีนเศษถูกตรวจสอบ โดยระบบวิเคราะห์ภาพเพื่อการวิเคราะห์เชิงปริมาณ (Kodak 1 D ภาพวิเคราะห์ Eastman Kodak บริษัทซอฟต์แวร์ NY, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 Sodiumdodecyl ซัลเฟต polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
ตัวอย่าง (2 กรัม) ถูกเพิ่มเข้าไปใน 20 มล. ของบัฟเฟอร์ความรุนแรง (75 มิลลิเมตร KCl, 10 mM K2HPO4, 2mm MgCl2, 2 mm EGTA ค่า pH 7.0) และหดหาย
(ระเบิด 20 s) ด้วย homogenizer Polytron (T25, IKA Werke GmbH & CO., KG, เยอรมนี) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีหลังจากที่เวลาผ่านไปใส (S1) คือ decanted และบันทึก บัฟเฟอร์ความรุนแรงสด 20 มล. ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วเม็ดและ
เป็นเนื้อเดียวกันซ้ำสามครั้ง โครงการ S1 ใช้สำหรับเศษส่วน sarcoplasmic ขณะ slury ยังคงอยู่หลังจากที่เป็นเนื้อเดียวกันสำหรับสามครั้งถูกใช้สำหรับการ myofibrils.Samples ถูกผสม 1: 1 กับบัฟเฟอร์ตัวอย่างมาตรฐานที่มี
10% SS-mercaptoethanol, 4% SDS 1 M Tris-HCl 20 กลีเซอรอล%, 0.2% bromophenol สีฟ้าและให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีและนำไปใช้เจล องค์ประกอบเจลอิเล็กสภาพการทำงานและการรักษาโพสต์อิเลคของ gelswere ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยฟริตซ์, Swartz และจาระบี (1989) กลุ่มตัวอย่าง (1mg / มล.) ได้รับการโหลดในเจลที่ทำจากซ้อน 4% และ 12% เจลแยกและยัดเยียดให้ electrophoresis ที่คงที่ในปัจจุบัน 10-20 mA ต่อเจลใช้หน่วยมินิ gel electrophoresis (SE 260, Amersham ชีววิทยาศาสตร์คอร์ป ., นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) หลังจาก electrophoresis เจลเป็น stainedwith 0.1% Coomassie สีฟ้าสดใส R-250 ในเมทานอล 40% และ 7% กรดอะซิติกและ destained กับเมทานอล 40% และ 7% กรดอะซิติก น้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนวงดนตรีที่ได้รับการคำนวณโดยใช้เครื่องหมายมาตรฐาน (M-3788, Sigma, สหรัฐอเมริกา) sarcoplasmic และโปรตีน myofibril แต่ละส่วนถูกตรวจสอบโดยระบบการวิเคราะห์ภาพสำหรับวัตถุประสงค์ของการวิเคราะห์เชิงปริมาณ (Kodak 1D วิเคราะห์ภาพซอฟท์แว Eastman Kodak Company, NY, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )ตัวอย่าง ( 2 กรัม ) เพิ่ม 20 มิลลิลิตร การบัฟเฟอร์ ( 75 k2hpo4 2mm KCl 10mm , ชุด , 2 มม. หน่วย , pH 7.0 ) และบด( 20 s ระเบิด ) กับ polytron โฮโมจิไนซ์ ( t25 , อิกะ werke GmbH & Co . KG , เยอรมนี ) โดยแยกเป็นระดับที่ 10000g 4 ° C เป็นเวลา 10 นาที เมื่อเวลาที่ น่าน ( S1 ) คือรินและบันทึก บัฟเฟอร์การสด 20 ml ก็เพิ่มเม็ดและโดยการทำซ้ำ 3 ครั้ง S1 ใช้เศษส่วน sarcoplasmic ส่วน slury ยังคงอยู่หลังจากการสามครั้งใช้ไมโอไฟบริล ตัวอย่าง ผสม 1 : 1 ใช้บัฟเฟอร์ที่มีมาตรฐานß - mercaptoethanol 10 % , 4 % SDS , 1 M โดย– HCl , 20% กลีเซอรอล 0.2% โบรโมฟีนอลบลูและอุณหภูมิ 100 องศา C เป็นเวลา 3 นาทีและใช้กับเจล ส่วนประกอบเจลอิเล็กวิ่ง เงื่อนไข และวิธีการโพสต์ gelswere ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยฟริตซ์ Swartz และจารบี ( 1989 ) ตัวอย่าง ( 1mg / ml ) และโหลดบนเจลทำจาก 4 % และ 12 % ซ้อนแยกเจลและภายใต้วิธีที่ปัจจุบันคงที่ 10 – 20 มาต่อเจลใช้มินิ gel electrophoresis ( หน่วยเซ 260 , ชาม Biosciences Corp . , NJ , USA ) หลังจากอิเล็กเจลเป็น stainedwith 0.1% เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส r-250 เมทานอล 40% และ 7% กรด และ destained กับเมธานอล 40% และ 7% กรดอะซิติก น้ำหนักโมเลกุลของแถบโปรตีนได้โดยใช้เครื่องหมายมาตรฐาน ( m-3788 , Sigma , USA ) ส่วนโปรตีนไมโอไฟบริล sarcoplasmic แต่ละและถูกตรวจสอบโดยภาพการวิเคราะห์ระบบสำหรับวัตถุประสงค์ของการวิเคราะห์เชิงปริมาณ ( Kodak 1D รูปภาพซอฟต์แวร์ , Eastman Kodak บริษัท , NY , USA )