Fruit tissue (4 g fresh weight) was homogenized in 4 ml of 0.1 M
TriseHCl buffer (pH 7.8) containing 2mMEDTA-Na, and 2mMDTT.
The homogenate was centrifuged at 20,000 g for 30 min at 4 C,
and the supernatant was used for the GSH-POD and GR assays. The
activity of GSH-POD enzyme was measured using the method of
Tappel (1978). The reaction mixture contained 0.1 M TriseHCl
buffer (pH 7.9), 0.4 mM EDTA, 1.0 mM NaN3, 1.0 mM H2O2, 1.0 mM
glutathione (GSH), 0.15 mM NADPH, 1 unit of glutathione reductase,
and 100 ml enzyme extract. The total reaction volume was
1.0 ml. The reaction was started by adding H2O2. GSH-POD enzyme
activity was measured by the rate of NADPH oxidation at 340 nm
เนื้อเยื่อผลไม้ (4 กรัมน้ำหนักสด) ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันใน 4 มิลลิลิตร 0.1 M
บัฟเฟอร์ TriseHCl (pH 7.8) ที่มี 2mMEDTA นาและ 2mMDTT.
homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 20,000? กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส
และสารละลายที่ใช้สำหรับ GSH-POD และ GR การตรวจ
กิจกรรมของเอนไซม์ GSH-POD วัดโดยใช้วิธีการของ
Tappel (1978) ผสมปฏิกิริยาที่มี 0.1 M TriseHCl
บัฟเฟอร์ (pH 7.9), EDTA 0.4 มิลลิ, 1.0 มิลลิ NaN3, 1.0 มิลลิ H2O2, 1.0 มิลลิ
กลูตาไธโอน (GSH) 0.15 มิลลิ NADPH, 1 หน่วย reductase กลูตาไธโอน
และ 100 มลสารสกัดเอนไซม์ ปริมาณการเกิดปฏิกิริยารวม
1.0 มล ปฏิกิริยาเริ่มต้นโดยการเพิ่ม H2O2 เอนไซม์ GSH-POD
กิจกรรมโดยวัดจากอัตราการเกิดออกซิเดชัน NADPH ที่ 340 นาโนเมตร
การแปล กรุณารอสักครู่..