cslAsc gene replacement and genetic

cslAsc gene replacement and genetic complementation. pHL151 was introduced into M145 from ET12567/pUZ8002 by E.coli-streptomyces intergeneric conjugation as described previously. Apr Hyg exconjugants were transferred to selective agar medium containing nalidixic acid and hygromycin,allowed to sporulate,and then transferred to MS agar without antibiotic selection spores from the MS agar were then plated on MS agar containing hygromycin to obtain single, which replicated on agar media containing only hygromycin and both apramycin and hygromycin. Five Aps Hyg colonies were obtained,all with the same phenotype on MS,MM,and R2YF agars. to confirm gene replacement in these isolates, southern blots were performed with a digoxi-genin-labeled 3.8 Kb BglII/PvuII fragment containing csLAsc as aprobe. complementation of the mutant wasachieved pHL155 by conjugation the vector pSET152 was also introduced into the mutant and M145 to provide negative controls.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แทนที่ยีน cslasc และ complementation ทางพันธุกรรม phl151 ถูกนำเข้าจาก M145 et12567/puz8002 โดย E.coli-Streptomyces ผัน intergeneric ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ เมษายน exconjugants อ่างล้างหน้าถูกย้ายไปกลางวุ้นเลือกที่มีส่วนผสมของกรดไฮ nalidixic และได้รับอนุญาตให้สร้างสปอร์,แล้วย้ายไปมิลลิวุ้นโดยไม่ต้องสปอร์จากการเลือกยาปฏิชีวนะวุ้นมิลลิถูกชุบแล้วในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไฮมิลลิวินาทีที่จะได้รับเพียงครั้งเดียวซึ่งทำซ้ำในสื่อวุ้นที่มีเพียงไฮและทั้งสอง apramycin และไฮ ห้า aps อาณานิคมอ่างล้างหน้าที่ได้รับทั้งหมดมีฟีโนไทป์เดียวกันในมิลลิวินาที มม. และความจำเพาะ r2yf เพื่อยืนยันการเปลี่ยนยีนในสายพันธุ์เหล่านี้blots ภาคใต้ได้รับการดำเนินการกับ digoxi-genin ติดฉลาก 3.8 กิโลไบต์ bglii / ส่วน pvuii มี cslasc เป็น aprobe complementation ของ phl155 wasachieved กลายพันธุ์โดยการผัน pset152 เวกเตอร์นอกจากนี้ยังได้รับการแนะนำเป็นกลายพันธุ์และ M145 เพื่อให้การควบคุมเชิงลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

cslAsc แทนยีนและพันธุกรรม complementation pHL151 ถูกนำเข้าสู่ M145 จาก ET12567/pUZ8002 ด้วยระบบ streptomyces conjugation ลูกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ มีการถ่ายโอน exconjugants Apr Hyg agar เลือกขนาดกลางมีนาลิดิซิกกรดและ hygromycin อนุญาตให้ sporulateและโอนย้ายแล้ว ให้ MS agar โดยเลือกยาปฏิชีวนะ เพาะเฟิร์นจาก MS agar ได้แล้วชุบใน MS agar ที่ประกอบด้วย hygromycin รับเดี่ยว ที่จำลองแบบแล้วบนสื่อ agar ที่ประกอบด้วยเพียง hygromycin และ apramycin และ hygromycin ห้า Aps Hyg อาณานิคมได้รับ กับ phenotype เหมือนใน MS, MM และ R2YF agars เพื่อยืนยันการเปลี่ยนยีนใน isolates เหล่านี้ กันบล็อทใต้ดำเนินกับ 3.8 ที่ digoxi genin มีป้ายชื่อว่าประกอบด้วย csLAsc เป็น aprobe ส่วน Kb BglII/PvuII complementation pHL155 wasachieved การกลายพันธุ์โดยการ conjugation pSET152 เวกเตอร์ยังได้ถูกแนะนำเป็น mutant และ M145 ให้ลบตัวควบคุม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเปลี่ยน cslasc ยีนและยีน complementation . PHL 151 :รีโมทควบคุมได้รับการรวมไว้ในม. 145 จาก เอ็ด 12567 / puz 8002 โดยผล - streptomyces intergeneric ผัน(คำกริยา)ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ เม.ย. hyg exconjugants ก็จะพาท่านไปส่งถึงยังมีขนาดกลางสาหร่ายทะเลมีทางเลือกประกอบด้วย hygromycin และกรด nalidixic ได้รับอนุญาตให้ sporulateและจะพาท่านไปส่งถึงยังสาหร่ายทะเลมิลลิวินาทีโดยไม่สามารถกรองการเลือกปฏิชีวนะจากสาหร่ายทะเลมิลลิวินาทีที่เป็นตัวเสียบเคลือบทองบนสาหร่ายทะเล MS มี hygromycin เพื่อขอรับตัวเดียวซึ่งปรากฏบนสื่อสาหร่ายทะเลซึ่งมีเฉพาะ hygromycin และทั้งสอง apramycin และ hygromycin แล้ว อาณานิคม hyg ห้า AP ได้ทั้งหมดพร้อมด้วยกเดียวกันนี้ใน MS มม.และ R 2 ล้มเหลว YF agars .เพื่อยืนยันการเปลี่ยนยีนในแยกเหล่านี้ภาค ใต้เปื้อนทั้งมวลนั้นดำเนินการด้วย digoxi - genin - มีข้อความ 3.8 KB bglii / pvuii สักเท่าไหร่มี cslasc เป็น aprobe . complementation ของ mutant wasachieved PHL 155 โดยผัน(คำกริยา)ที่เวกเตอร์ pset 152 ก็ยังเข้ามาที่ mutant และม. 145 ให้ลบการควบคุม.