Apple peels (0.5 g fresh weight) we

Apple peels (0.5 g fresh weight) were ground in a mortar and pestle with 10 ml of the cold 0.1 M borate buffer (pH 8.8) containing 2-mercaptoethanol (20 mM) and 0.4 g Polyclar AT per gram fresh weight of apple peels. The extract was centrifuged at 20000× g for 30 min at 4 C. Proteins were precipitated from the supernatant with ammonium sulfate (70% satu-ration) and pelleted by centrifuging for 15 min as described above. The resulting precipitate was gently resuspended in 5 ml of cold borate buffer and used as the enzyme solution. The assay mixture (3 ml) consisted of 0.1 M borate buffer (pH 8.8), 20 µM L-phenylalanine, and enzyme solution containing 50-100 µg protein. All reactions were equilibrated for 10 min at 40 C. The change in A290 over 60 min was used to determine PAL activity. Linearity by the method of Bradford (1976) using bovine serum albumin as a standard. PAL activity was expressed as nkat mg-1 protein.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Peels แอปเปิ้ล (0.5 กรัมน้ำหนักสด) มีพื้นในการโกร่งกับ 10 ml ของเย็น 0.1 M borate บัฟเฟอร์ (pH 8.8) มี 2-mercaptoethanol (20 mM) และมักหลุดลอก 0.4 g Polyclar AT ต่อกรัมน้ำหนักสดของแอปเปิ้ล การดึงข้อมูลถูก centrifuged ที่ 20000 × g ใน 30 นาทีที่ 4 C โปรตีนตกตะกอนจาก supernatant กับแอมโมเนียซัลเฟต (70% ยาสาทุอาหาร) และ pelleted โดย centrifuging สำหรับ 15 นาทีตามที่อธิบายไว้ข้างต้น Precipitate ได้ถูก resuspended ใน 5 ml ของบัฟเฟอร์ borate เย็นเบา ๆ และใช้เป็นโซลูชั่นเอนไซม์ ผสมทดสอบ (3 มล.) ประกอบด้วย 0.1 M borate บัฟเฟอร์ (pH 8.8), 20 µM L phenylalanine และโซลูชั่นเอนไซม์ที่ประกอบด้วยโปรตีน 50-100 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง ปฏิกิริยาทั้งหมดถูก equilibrated สำหรับ 10 นาทีที่ 40 C การเปลี่ยนแปลงใน A290 กว่า 60 นาทีถูกใช้เพื่อกำหนดกิจกรรม PAL แบบดอกไม้ โดยแบรดฟอร์ด (1976) วิธีการใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน กิจกรรมพาลถูกแสดงเป็น nkat 1 มิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เปลือกแอปเปิ้ล (0.5 กรัมน้ำหนักสด) มาบดในครกและสากที่มี 10 มล. ของเย็น 0.1 M บัฟเฟอร์ borate (pH 8.8) ที่มี 2 mercaptoethanol (20 มิลลิเมตร) และ 0.4 กรัม Polyclar AT ต่อกรัมน้ำหนักสดเปลือกแอปเปิ้ล สารสกัดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 20,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 C โปรตีนที่ได้รับการตกตะกอนจากสารละลายที่มีแอมโมเนียมซัลเฟต (70% satu-ปันส่วน) และเม็ดโดยเหวี่ยงเวลา 15 นาทีตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ตะกอนที่เกิดถูก resuspended เบา ๆ ใน 5 มล. ของบัฟเฟอร์ borate เย็นและใช้เป็นวิธีแก้ปัญหาเอนไซม์ ส่วนผสมที่ทดสอบ (3 มล.) ประกอบด้วย 0.1 M บัฟเฟอร์ borate (pH 8.8) 20 ไมครอน L-phenylalanine และวิธีการแก้ปัญหาที่มีเอนไซม์ 50-100 ไมโครกรัมโปรตีน ปฏิกิริยาทั้งหมดถูก equilibrated เป็นเวลา 10 นาทีที่ 40 C การเปลี่ยนแปลง A290 กว่า 60 นาทีถูกใช้ในการกำหนดกิจกรรม PAL เส้นตรงโดยวิธีการของแบรดฟอ (1976) โดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน กิจกรรม PAL ถูกแสดงเป็น nkat-1 มิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เปลือกแอปเปิ้ล ( 0.5 กรัมน้ำหนักสด ) มาบดในครกและสากกับ 10 ml ของเย็น 0.1 M บอเรตบัฟเฟอร์ ( พีเอช 8.8 ที่มีอย่างเดียว ( 20 มม. ) และ 0.4 กรัม ต่อ polyclar กรัมน้ำหนักสด เปลือกแอปเปิ้ล สารสกัดที่เป็นระดับที่ 20 , 000 × G สำหรับ 30 นาทีที่ 4  Cตกตะกอนโปรตีนได้จากนำด้วยแอมโมเนียม ซัลเฟต ( 70 % a อาหาร ) และเม็ดโดยสาร 15 นาทีตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เกิดตะกอนเบา resuspended 5 ml ของบัฟเฟอร์บอเรตเย็นและใช้เป็นสารละลายเอนไซม์ . วิเคราะห์ส่วนผสม ( 3 ml ) จำนวน 0.1 M บอเรตบัฟเฟอร์ pH 8.8 ) ฟีนิลอะลา 20 µ M ,และ สารละลายเอนไซม์ที่µ 50-100 กรัมโปรตีน ทั้งหมดปฏิกิริยา equilibrated สำหรับ 10 นาทีที่ 40  C เปลี่ยน a290 มากกว่า 60 นาที ศึกษากิจกรรมเพื่อน . เชิงเส้นโดยวิธี Bradford ( 1976 ) ใช้อัลบูมินเป็นมาตรฐาน กิจกรรมเพื่อนจะแสดงเป็น nkat mg-1 โปรตีน