[0072] In some รูปลักษณะ, แลคโตเฟอร์ริน may also be provided in the nutritional composition. แลคโตเฟอร์รินs are single chain polypeptides of about 80 kD containing 1 — 4 glycans, depending on the species. The 3-D structures of แลคโตเฟอร์ริน of different
species are similar, but not identical. Each แลคโตเฟอร์ริน ประกอบรวมด้วย two homologous
lobes, called the N- and C-lobes, referring to the N-terminal and C-terminal part of the molecule, respectively. Each lobe further consists of two sub-lobes or domains, which form a cleft where the ferric ion (Fe3+) is tightly bound in synergistic cooperation with a
(bi)carbonate anion. These domains are called N1, N2, C1 and C2, respectively. The N-terminus of แลคโตเฟอร์ริน has strong cationic peptide regions that are responsible for a number of important binding characteristics. แลคโตเฟอร์ริน has a very high isoelectric point (—pl 9) and its cationic nature plays a major role in its ability to defend against bacterial, viral, and fungal pathogens. There are several clusters of cationic amino acids residues within the N-terminal region of แลคโตเฟอร์ริน mediating the biological
activities of แลคโตเฟอร์ริน against a wide range of microorganisms.
[0073] แลคโตเฟอร์ริน for use in the การเปิดเผยนี้ may be, for example, isolated from the milk of a non-human animal or produced by a genetically modified organism. More specifically, the แลคโตเฟอร์ริน for use herein can, in some รูปลักษณะ ประกอบรวมด้วย น็อน-ฮิวเมน แลคโตเฟอร์ริน, น็อน-ฮิวเมน แลคโตเฟอร์ริน produced by a genetically modified organism and/or human แลคโตเฟอร์ริน produced by a genetically modified organism.
[0074] Suitable น็อน-ฮิวเมน แลคโตเฟอร์รินs for use in the การเปิดเผยนี้ include, but are not limited to, those having at least 48% homology with the amino acid
sequence of human แลคโตเฟอร์ริน. For instance, โบไวน์ แลคโตเฟอร์ริน ("bLF") has an amino acid composition which has about 70% sequence homology to that of human
แลคโตเฟอร์ริน. In some รูปลักษณะ, the น็อน-ฮิวเมน แลคโตเฟอร์ริน has at least 65%
homology with human แลคโตเฟอร์ริน and in some รูปลักษณะ, at least 75% homology. น็อน-ฮิวเมน แลคโตเฟอร์รินs acceptable for use in the การเปิดเผยนี้ include, without limitation, bLF, porcine แลคโตเฟอร์ริน, equine แลคโตเฟอร์ริน, buffalo แลคโตเฟอร์ริน, goat แลคโตเฟอร์ริน, murine แลคโตเฟอร์ริน, camel แลคโตเฟอร์ริน and combinations thereof.
[0075] bLF suitable for the การเปิดเผยนี้ may be produced by any method known in the art. For example, in U.S. Patent No. 4,791,193, incorporated by reference herein in its entirety, Okonogi et al. discloses a process for producing โบไวน์ แลคโตเฟอร์ริน in high purity. Generally, the process as disclosed includes three steps. Raw milk
material is first contacted with a weakly acidic cationic exchanger to absorb แลคโตเฟอร์ริน followed by the second step where washing takes place to remove nonabsorbed
substances. A desorbing step follows where แลคโตเฟอร์ริน is removed to produce purified โบไวน์ แลคโตเฟอร์ริน. Other methods may include steps as described in U.S. Patent Nos. 7,368,141, 5,849,885, 5,919,913 and 5,861,491, the disclosures of which are all
incorporated by reference in their entirety.
[0076] In certain รูปลักษณะ, แลคโตเฟอร์ริน utilized in the การเปิดเผยนี้ may be provided by an expanded bed absorption ("EBA") process for isolating proteins from milk sources. EBA, also sometimes called stabilized fluid bed adsorption, is a process for isolating a milk protein, such as แลคโตเฟอร์ริน, from a milk source ประกอบรวมด้วย
establishing an expanded bed adsorption column ซึ่งประกอบรวมด้วย a particulate matrix,
applying a milk source to the matrix, and eluting the แลคโตเฟอร์ริน from the matrix with an elution buffer ซึ่งประกอบรวมด้วย about 0.3 ถึงประมาณ 2.0 M sodium chloride. Any mammalian milk source may be used in the present processes, although in particular รูปลักษณะ, the milk source is a โบไวน์ milk source. The milk source ประกอบรวมด้วย, in some
14
รูปลักษณะ, whole milk, reduced fat milk, skim milk, whey, casein, or ของผสมของมัน.
[0077] In particular รูปลักษณะ, the target protein is แลคโตเฟอร์ริน, though other milk proteins, such as lactoperoxidases or lactalbumins, also may be isolated. In some รูปลักษณะ, the process ประกอบรวมด้วย the steps of establishing an expanded bed
adsorption column ซึ่งประกอบรวมด้วย a particulate matrix, applying a milk source to the matrix, and eluting the แลคโตเฟอร์ริน from the matrix with about 0.3 ถึงประมาณ 2.0M sodium chloride. In other รูปลักษณะ, the แลคโตเฟอร์ริน is eluted with about 0.5 ถึงประมาณ 1.0 M sodium chloride, while in further รูปลักษณะ, the แลคโตเฟอร์ริน is eluted with about 0.7 ถึงประมาณ
0.9 M sodium chloride.
[0078] The expanded bed adsorption column can be any known in the art, such as those described in U.S. Patent Nos. 7,812,138, 6,620,326, and 6,977,046, the
disclosures of which are hereby incorporated by reference herein. In some
รูปลักษณะ, a milk source is applied to the column in an expanded mode, and the elution is performed in either expanded or packed mode. In particular รูปลักษณะ, the elution is performed in an expanded mode. For example, the expansion ratio in the expanded mode may be about 1 ถึงประมาณ 3, or about 1.3 ถึงประมาณ 1.7. EBA technology is further described in international published application nos. WO 92/00799, WO
02/18237, WO 97/17132, which are hereby incorporated by reference in their entireties.
[0079] The isoelectric point of แลคโตเฟอร์ริน is approximately 8.9. Prior EBA
methods of isolating แลคโตเฟอร์ริน use 200 mM sodium hydroxide as an elution buffer.
Thus, the pH of the system rises to over 12, and the structure and bioactivity of
แลคโตเฟอร์ริน may be ประกอบรวมด้วยd, by irreversible structural changes. It has now been
discovered that a sodium chloride solution can be used as an elution buffer in the
isolation of แลคโตเฟอร์ริน from the EBA matrix. In certain รูปลักษณะ, the sodium
chloride has a concentration of about 0.3 M ถึงประมาณ 2.0 M. In other รูปลักษณะ, the แลคโตเฟอร์ริน elution buffer has a sodium chloride concentration of about 0.3 M ถึงประมาณ
1.5 M, or about 0.5 m ถึงประมาณ 1.0 M.
[0080] The แลคโตเฟอร์ริน that is employed herein may, in some รูปลักษณะ, be
แลคโตเฟอร์ริน isolated from whole milk and/or milk having a low somatic cell count, โดยที่ "low somatic cell count" refers to a somatic cell count less than 200,000 cells/mL. By way of example, suitable แลคโตเฟอร์ริน is available from Tatua Co-operative Dairy Co. Ltd.,
15
in Morrinsville, New Zealand, from FrieslandCampina Domo in Amersfoort, Netherlands or from Fonterra Co-Operative Group Limited in Auckland, New Zealand.
[ 0072 ] ในบางรูปลักษณะแลคโตเฟอร์ริน , อาจจะให้ในองค์ประกอบทางโภชนาการ แลคโตเฟอร์ริน s are single chain polypeptides ของ 80 ของ containing 1 จะ 4 glycans , ผม the species . โครงสร้างของแลคโตเฟอร์ริน 3-D ของสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน
จะคล้ายกัน แต่ไม่เหมือนกันแต่ละแลคโตเฟอร์รินประกอบรวมด้วยสองฟังก์ชัน
แฉกเรียกว่า - และ c-lobes หมายถึงส่วนของโมเลกุลของกรดอะมิโน และซึ่ง ตามลำดับ แต่ละกลีบต่อไปประกอบด้วยสองกลีบย่อยหรือโดเมนซึ่งเป็นรอยแยกที่ไอออนเหล็ก ( fe3 ) จะถูกมัดไว้ในความร่วมมือร่วมกันกับ
( บี ) ไอออนคาร์บอเนต กระทิงแดงใหม่ are called n1 , อาโออิ .C1 และ C2 ตามลำดับ ของยีนแลคโตเฟอร์รินมีประจุบวก ภูมิภาค เปปไทด์ที่รับผิดชอบสำหรับจำนวนของลักษณะการผูกสำคัญ แลคโตเฟอร์รินและสิ่งที่ isoelectric ถาวรจะ pl 9 ) ( จม cationic its การ role major in จะไม่ได้ที่นินเฉพาะ bacterial , อีก คํา . pathogens .มีหลายกลุ่มของกรดอะมิโนประจุบวกที่ตกค้างภายในภูมิภาคได้ถูกส่งผ่านแลคโตเฟอร์รินชีวภาพ
แลคโตเฟอร์รินกับหลากหลายกิจกรรมของจุลินทรีย์ 0073
[ ] แลคโตเฟอร์รินเพื่อใช้ในการเปิดเผยนี้อาจจะ ตัวอย่างที่แยกได้จากน้ำนมของมนุษย์หรือสัตว์ที่ผลิตโดยสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรม . มากขึ้นโดยเฉพาะ แลคโตเฟอร์รินสําหรับใช้ในที่นี้ได้ ในบางรูปลักษณะประกอบรวมด้วยน็อน - แลคโตเฟอร์รินฮิวเมน ,น็อน - ฮิวเมนแลคโตเฟอร์รินที่ผลิตโดยสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรมและ / หรือแลคโตเฟอร์รินมนุษย์ที่ผลิตโดยสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรม .
[ 0074 ] เหมาะน็อน - ฮิวเมนแลคโตเฟอร์รินสำหรับใช้ในการเปิดเผยนี้รวมถึง แต่ไม่ จำกัด ให้ผู้ที่มีอย่างน้อย 48 % ซึ่งกับ
กรดอะมิโนลำดับของแลคโตเฟอร์รินมนุษย์ ตัวอย่าง โบไวน์แลคโตเฟอร์ริน ( " blf " ) มีองค์ประกอบของกรดอะมิโน ซึ่งมีประมาณ 70% เป็นลำดับที่แลคโตเฟอร์รินมนุษย์
in some รูปลักษณะ , the น็อนจะฮิวเมนแลคโตเฟอร์ริน has at least 65 %
with human แลคโตเฟอร์ริน some 1975 เมร ( รูปลักษณะ ,อย่างน้อย 75 % ซึ่ง . น็อน - ฮิวเมนแลคโตเฟอร์ริน s ที่ยอมรับได้สำหรับใช้ในการเปิดเผยนี้รวมถึง , โดยไม่มีข้อ จำกัด blf แลคโตเฟอร์รินสุกร , ม้า , แลคโตเฟอร์ริน ควายแลคโตเฟอร์ริน ~ , แลคโตเฟอร์รินแลคโตเฟอร์ริน , แพะ , แลคโตเฟอร์รินอูฐและชุด
"[ 0075 ] blf เหมาะสำหรับการเปิดเผยนี้อาจผลิตโดยวิธีใด ๆที่รู้จักกันในศิลปะ , ราชบุรี in u.s. patent no. 4791193 , incorporated by reference herein in its entirety , okonogi et al . เปิดเผยกระบวนการผลิตโบไวน์แลคโตเฟอร์รินความบริสุทธิ์สูงใน โดยทั่วไปกระบวนการเป็นที่เปิดเผย ประกอบด้วย 3 ขั้นตอน
นมดิบวัสดุก่อนติดต่อกับแลกเปลี่ยนประจุบวกที่เป็นกรดอย่างอ่อนเพื่อดูดซับแลคโตเฟอร์รินตามด้วยขั้นตอนที่สองที่ซักผ้าใช้สถานที่เพื่อลบ nonabsorbed
สาร เป็น desorbing ขั้นตอนดังต่อไปนี้ที่แลคโตเฟอร์รินจะถูกลบออกเพื่อผลิตโบไวน์แลคโตเฟอร์รินบริสุทธิ์ วิธีการอื่น ๆอาจรวมถึงขั้นตอนที่อธิบายไว้ในสิทธิบัตรสหรัฐ 7368141 NOS ,5849885 5919913 5861491 , และ , การเปิดเผยข้อมูลที่มีทั้งหมดรวมอยู่ในทั้งหมดของพวกเขาโดยอ้างอิง
.
[ 0076 ] ในบางรูปลักษณะแลคโตเฟอร์ริน , ใช้ในการเปิดเผยนี้อาจจะให้โดยการขยายเตียงการดูดซึม ( " ระบบ " ) สำหรับกระบวนการแยกโปรตีนจากแหล่งที่มาของนม EBA ยังบางครั้งเรียกว่าคงที่เตียงดูดซับของเหลวเป็นกระบวนการแยกนม โปรตีน เช่น แลคโตเฟอร์รินจากแหล่งนมประกอบรวมด้วย
การขยายเตียงคอลัมน์ดูดซับฝุ่นละอองซึ่งประกอบรวมด้วยเมทริกซ์
ใช้นมที่มาเมทริกซ์และ hexane ซึ่งแลคโตเฟอร์รินจากเมทริกซ์ที่ใช้บัฟเฟอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยเกี่ยวกับ 03 ถึงประมาณ 2.0 เมตร โซเดียม คลอไรด์ แหล่งที่มาของนม ) ใด ๆอาจจะใช้ในกระบวนการปัจจุบัน แม้ว่าโดยเฉพาะรูปลักษณะ นมเป็นนมโบไวน์แหล่งที่มา . แหล่งนมประกอบรวมด้วย ในบาง
14
รูปลักษณะ ทั้งนม ลดไขมันนม , หางนมผง , เวย์โปรตีน , หรือของผสมของมัน .
[ 0077 ] โดยเฉพาะรูปลักษณะ , โปรตีนเป้าหมายคือแลคโตเฟอร์ริน แม้ว่าโปรตีนนมอื่น ๆเช่น lactoperoxidases หรือ lactalbumins ยังอาจจะแยก ในบางรูปลักษณะ กระบวนการประกอบรวมด้วยขั้นตอนของการขยายเตียง
คอลัมน์ดูดซับฝุ่นละอองซึ่งประกอบรวมด้วยเมทริกซ์การใช้นมที่มาเมทริกซ์และ hexane ซึ่งแลคโตเฟอร์รินจากเมทริกซ์มีประมาณ 0.3 ถึงประมาณ 2.0m โซเดียมคลอไรด์ in รูปลักษณะท่า the แลคโตเฟอร์ริน is eluted , เซทถึงประมาณลิบ m sodium chloride , กับรูปลักษณะน้อยลง , the แลคโตเฟอร์ริน is eluted ฉัน 0.7 ถึงประมาณ
0 .9 M โซเดียมคลอไรด์ .
[ 0078 ] ขยายเตียงดูดซับคอลัมน์สามารถใด ๆที่รู้จักกันในศิลปะเช่นที่อธิบายไว้ในสหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรเลขที่ 7812138 6620326 , และ 6977046 ,
เปิดเผยของที่ขอจดทะเบียน โดยอ้างอิง ณที่นี้ ในบาง
รูปลักษณะ , นมที่มาใช้กับคอลัมน์ในโหมดขยายและใช้แสดงในการขยายหรือบรรจุโหมดโดยเฉพาะรูปลักษณะ , เจ๊สัวจะดําเนินการในการขยายโหมด เช่น อัตราส่วนการขยายตัวในการขยายโหมดอาจจะประมาณ 1 ถึงประมาณ 3 หรือประมาณ 1.3 ถึงประมาณ 1.7 . ระบบเทคโนโลยีจะอธิบายต่อไปในต่างประเทศเผยแพร่การประยุกต์ใช้เลขที่ 92 / 00799 wo wo
02 / 18237 wo 97 / 17132 ซึ่งขอจดทะเบียนโดยอ้างอิงใน entireties .
[ 0079 ] จุดไอโซอิเล็กทริกของแลคโตเฟอร์รินประมาณ 8.9 . วิธีการระบบ
แยกแลคโตเฟอร์รินใช้ 200 มิลลิเมตร โซดาไฟเป็นสารประกอบบัฟเฟอร์ก่อน
ดังนั้นพีเอชของระบบเพิ่มขึ้นกว่า 12 , และโครงสร้างและฤทธิ์ของ
แลคโตเฟอร์รินอาจจะประกอบรวมด้วย D โดยการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างได้ ตอนนี้มันได้
พบว่าสารละลายโซเดียมคลอไรด์สามารถใช้เป็นสารประกอบบัฟเฟอร์ใน
แยกแลคโตเฟอร์รินจากระบบเมทริกซ์ ในบางรูปลักษณะ , โซเดียมคลอไรด์ที่มีความเข้มข้น
ประมาณ 0.3 เมตรถึงประมาณ 2.0 เมตรรูปลักษณะอื่นๆ แลคโตเฟอร์รินใช้บัฟเฟอร์ที่มีโซเดียมคลอไรด์ความเข้มข้นประมาณ 03 m ถึงประมาณ
1.5 m , or about เซท m ถึงประมาณลิบ m.
[ 0080 ] the แลคโตเฟอร์ริน that is employed herein น่าสนใจ in some รูปลักษณะ , :
แลคโตเฟอร์ริน isolated from milk บริษัทธุรกิจ or milk having a count ผ่านไป somatic low , โดยที่มือ somatic ผ่านไปรอ refers to a ผ่านไป somatic count less than 200000 เซลล์ / มิลลิลิตร โดยวิธีการเช่นเหมาะแลคโตเฟอร์รินสามารถใช้ได้จาก tatua สหกรณ์โคนม จำกัด
15
ใน morrinsville นิวซีแลนด์ จาก frieslandcampina Domo ใน Amersfoort , เนเธอร์แลนด์ หรือ จากสหกรณ์กลุ่มฟอนเทียร่า จำกัด ใน โอ๊คแลนด์ ประเทศนิวซีแลนด์
การแปล กรุณารอสักครู่..