3.3. Effects of enzymes on the amou

3.3. Effects of enzymes on the amount of extracted DNA
Processed foods contain many components, such as protein and
sugar. Since these components could interfere with PCR, it is
necessary to extract high purity DNA by removing the interfering
components. a-Amylase hydrolyzes the a-bonds of a-linked polysaccharides,
such as starch and glycogen, yielding oligosaccharides
with varying lengths (Sales, Souza, Simeoni, & Silveira, 2012). Cellulase
is an enzyme which hydrolyzes b-1,4-glucosidically linked
cellulose chains, which form the cell walls of plants (Pang et al.,
2009). Proteinase K is a non-specific, subtilisin-related serine protease,
widely used to remove contaminants from the liquid formulations
of nucleic acids by hydrolyzing the protein (Siezen &
Leunissen, 1997). By adding proteinase K, it is possible to inactivate
nucleases that quickly degrade nucleic acids. Since a-amylase
and proteinase K are relatively expensive enzymes, we evaluated
the effects of the added amounts of these enzymes on the yield and
purity of DNA extracted from dried papaya (Fig. 2A). When no
enzymes were added except for RNase a DNA concentration of
55  3 ng/mL was obtained. When a-amylase or cellulose were
added to the first incubation at 50 C for 1 h, the obtained DNA
concentrations were 29  16 ng/mL and 45 11 ng/mL, respectively.
The concentration of extracted DNA was significantly higher when
proteinase K was added to the second incubation at 50 C for 1 h
(702  17 ng/mL). The highest DNA concentration was obtained
when proteinase K, a-amylase and cellulase were added simultaneously
(716  27 ng/mL) (Fig. 2A). In terms of the purity of the
extracted DNA, no significant differences were found in the A260/
A230 and A260/A280 ratios of the DNA sample solutions (Fig. 2B).
Therefore, these results suggest that proteinase K is necessary for
a higher yield of DNA from dried papaya. On the other hand, we
considered that a-amylase is not required for the extraction and
purification of DNA from dried papaya. By the addition of cellulase,
the concentration of the extracted DNA in the sample solution did
not change; however, the clogging of the IER-100G column during
DNA purification, especially in the case of dried papaya, was prevented.
We thus consider that a cellulase digestion step is necessary
for the extraction of papaya DNA.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3 ผลของเอนไซม์ในปริมาณของดีเอ็นเอที่สกัดอาหารแปรรูปประกอบด้วยคอมโพเนนต์หลาย เช่นโปรตีน และน้ำตาล ตั้งแต่ส่วนประกอบเหล่านี้อาจรบกวน PCR มันเป็นจำเป็นในการแยกดีเอ็นเอมีความบริสุทธิ์สูง โดยเอาการรบกวนคอมโพเนนต์ มีอะไมเลสไฮโดรไลซ์เป็นหุ้นกู้ของลิงค์ที่ไรด์เช่นแป้งและไกลโคเจน oligosaccharides ที่ให้ผลผลิตมีความยาวแตกต่างกัน (ขาย ซัวซ่า Simeoni, & Silveira, 2012) Cellulaseเอนไซม์ที่ไฮโดรไลซ์ b-1, 4-glucosidically เชื่อมโยงห่วงโซ่เซลลูโลส ซึ่งผนังเซลล์ของพืช (ปาง et al.,2009) . proteinase K เป็นโปรติเอสเจาะจง subtilisin เกี่ยวรอบเส้นใยประสาทใช้เพื่อกำจัดสิ่งปนเปื้อนจากสูตรของเหลวของกรดนิวคลีอิกโดย hydrolyzing โปรตีน (Siezen &Leunissen, 1997) โดยการเพิ่ม proteinase K จำเป็นต้องปิดการทำงานnucleases ที่กรดนิวคลีอิกที่ลดลงอย่างรวดเร็ว ตั้งแต่มีอะไมเลสและ proteinase K มีราคาค่อนข้างแพงเอนไซม์ เราประเมินผลกระทบของเงินเพิ่มของเอนไซม์เหล่านี้ผลผลิต และความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอที่สกัดมาจากมะละกออบแห้ง (รูป 2A) เมื่อไม่มีเอนไซม์เพิ่มยกเว้น RNase เข้มข้นดีเอ็นเอ55 มา 3 ng/mL เมื่อต่ออะไมเลสหรือเซลลูโลสได้เพิ่มการบ่มแรก 50 c เป็นเวลา 1 h ดีเอ็นเอได้รับความเข้มข้นได้ 29 16 ng/mL และ 45 11 ng/mL ตามลำดับความเข้มข้นของดีเอ็นเอที่สกัดได้สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อproteinase K ถูกบ่มสอง 50 c เป็นเวลา 1 ชม(702 17 ng/mL) ความเข้มข้นของดีเอ็นเอสูงสุดได้รับเมื่อ proteinase K, a-amylase และ cellulase เพิ่มพร้อมกัน(716 27 ng/mL) (รูป 2A) ในแง่ของความบริสุทธิ์ของการสกัดดีเอ็นเอ ไม่มีความแตกต่างกันที่พบในการ A260 /A230 และ A260/A280 อัตราส่วนของดีเอ็นเอตัวอย่างโซลูชั่น (รูปที่ 2B)ดังนั้น ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำว่า proteinase K ที่จำเป็นสำหรับผลผลิตสูงกว่าของดีเอ็นเอจากมะละกออบแห้ง บนมืออื่น ๆ เราพิจารณาที่ a-อะไมเลสไม่จำเป็นสำหรับการสกัด และบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอจากมะละกออบแห้ง ด้านนอกของ cellulaseความเข้มข้นของดีเอ็นเอที่สกัดในสารละลายตัวอย่างได้ไม่เปลี่ยนแปลง อย่างไรก็ตาม การอุดตันของคอลัมน์ IER - 100 กรัมในช่วงรับการป้องกันดีเอ็นเอบริสุทธิ์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของมะละกออบแห้งเราจึงพิจารณา cellulase ขั้นตอนย่อยที่จำเป็นการสกัดดีเอ็นเอของมะละกอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 ผลของเอนไซม์กับปริมาณของการสกัดดีเอ็นเอ
อาหารแปรรูปมีองค์ประกอบหลายอย่างเช่นโปรตีนและ
น้ำตาล เนื่องจากองค์ประกอบเหล่านี้อาจรบกวนการ PCR มันเป็น
สิ่งที่จำเป็นในการสกัดดีเอ็นเอมีความบริสุทธิ์สูงโดยการลบรบกวน
ส่วนประกอบ A-อะไมเลสไฮโดรไลซ์เป็นพันธบัตรของประเทศที่มีการเชื่อมโยง polysaccharides,
เช่นแป้งและไกลโคเจนยอม oligosaccharides
มีแตกต่างกันความยาว (ขาย Souza, Simeoni และ Silveira 2012) เซลลูเลส
เป็นเอนไซม์ที่ไฮโดรไลซ์ B-1,4-glucosidically ที่เชื่อมโยง
โซ่เซลลูโลสซึ่งรูปแบบผนังเซลล์ของพืช (ปาง et al.,
2009) Proteinase K ไม่ใช่เฉพาะ subtilisin ที่เกี่ยวข้องกับซีรีนโปรติเอส,
ใช้กันอย่างแพร่หลายในการลบสิ่งปนเปื้อนจากสูตรของเหลว
ของกรดนิวคลีอิกโดยไฮโดรไลซ์โปรตีน (Siezen &
Leunissen, 1997) โดยการเพิ่มโปร K มันเป็นไปได้ที่จะยับยั้ง
nucleases ที่ได้อย่างรวดเร็วลดกรดนิวคลีอิก ตั้งแต่อะไมเลส
และโปร K เอนไซม์ราคาแพงเราประเมิน
ผลกระทบของการเพิ่มปริมาณของเอนไซม์เหล่านี้ในอัตราผลตอบแทนและ
ความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอที่สกัดจากมะละกออบแห้ง (รูป. 2A) เมื่อไม่มี
เอนไซม์ที่ถูกเพิ่มยกเว้น RNase ความเข้มข้นดีเอ็นเอ
55? 3 ng / ได้รับ เมื่ออะไมเลสหรือเซลลูโลสถูก
เพิ่มลงในการบ่มแรกที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ได้รับดีเอ็นเอ
ความเข้มข้น 29? 16 นาโนกรัม / มิลลิลิตรและ 45? 11 นาโนกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับ
ความเข้มข้นของ DNA ที่สกัดสูงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อ
โปร K ถูกบันทึกอยู่ในการบ่มที่สองที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
(702? 17 นาโนกรัม / มิลลิลิตร) ความเข้มข้นสูงสุดดีเอ็นเอที่ได้รับ
เมื่อ Proteinase K, A-อะไมเลสและเซลลูเลสที่ถูกเพิ่มพร้อมกัน
(716? 27 นาโนกรัม / มิลลิลิตร) (รูป. 2A) ในแง่ของความบริสุทธิ์ของ
DNA ที่สกัดไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่พบใน A260 /
A230 และ A260 / A280 อัตราส่วนของการแก้ปัญหาตัวอย่างดีเอ็นเอ (รูป. 2B)
ดังนั้นผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าโปร K เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับ
อัตราผลตอบแทนที่สูงขึ้นของดีเอ็นเอจากมะละกออบแห้ง บนมืออื่น ๆ ที่เรา
พิจารณาว่าอะไมเลสไม่จำเป็นสำหรับการสกัดและ
การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอจากมะละกออบแห้ง โดยนอกเหนือจากเซลลูเลส,
ความเข้มข้นของดีเอ็นเอที่สกัดในสารละลายตัวอย่างการไม่
ได้เปลี่ยน; แต่การอุดตันของคอลัมน์ IER-100G ช่วง
บริสุทธิ์ดีเอ็นเอโดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของมะละกออบแห้งที่ได้รับการป้องกัน
เราจึงพิจารณาว่าเป็นขั้นตอนที่เซลลูย่อยอาหารเป็นสิ่งที่จำเป็น
สำหรับการสกัดดีเอ็นเอมะละกอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 . ผลของเอนไซม์ในจํานวนสกัดดีเอ็นเออาหารแปรรูปที่ประกอบด้วยหลายองค์ประกอบ เช่น โปรตีน และน้ำตาล เนื่องจากองค์ประกอบเหล่านี้อาจรบกวนกับ PCR มันที่จำเป็นเพื่อสกัดดีเอ็นเอบริสุทธิ์สูง โดยเอารบกวนส่วนประกอบ a-amylase hydrolyzes ที่ a-bonds ของ a-linked polysaccharidesเช่นแป้งและไกลโคเจน ( glycogen ) , ให้ผลผลิตโอลิโกแซคคาไรด์กับความยาวที่แตกต่างกัน ( ขาย ซูซ่า simeoni & Silveira , 2012 ) เซลลูเลสเป็นเอนไซม์ที่ hydrolyzes b-1,4-glucosidically เชื่อมโยงโซ่เซลลูโลส ซึ่งรูปแบบผนังเซลล์ของพืช ( ปาง et al . ,2009 ) โปรตีนเป็นชนิด K , ที่เกี่ยวข้องกับซับทีลิซินเซอรีนโปรติเอสใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อลบสิ่งปนเปื้อนจากสูตรของเหลวกรดนิวคลีอิกโดยการย่อยโปรตีน ( siezen &leunissen , 1997 ) โดยการเพิ่มโปรตีน K , มันเป็นไปได้ที่จะยับยั้งnucleases ที่ลดลงอย่างรวดเร็ว กรดนิวคลีอิก ตั้งแต่ a-amylaseโปรตีนและเอนไซม์ K จะค่อนข้างแพง เราประเมินผลของการเพิ่มปริมาณของเอนไซม์เหล่านี้ต่อผลผลิต และความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอที่สกัดจากมะละกออบแห้ง ( รูปที่ 2A ) เมื่อไม่มีเอนไซม์เพิ่มปริมาณดีเอ็นเอยกเว้นเลส55 3 ng / ml . เมื่อ a-amylase หรือเซลลูโลสคือเพิ่ม 4 ครั้งแรกที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง นำดีเอ็นเอเท่ากับ 29 16 ng / ml และ 45 11 นาโนกรัม / มิลลิลิตร ตามลำดับความเข้มข้นของการสกัดดีเอ็นเอสูงกว่าเมื่อโปรตีนเคถูกเพิ่มเพื่อบ่มเพาะวินาทีที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง( 702 17 ng / ml ) ความเข้มข้นสูงสุดได้ ดีเอ็นเอเมื่อโปรตีน K , a-amylase และ cellulase เพิ่มไปพร้อมกัน( ฉบับ 27 ng / ml ) ( รูปที่ 2A ) ในแง่ของความบริสุทธิ์ของสกัดดีเอ็นเอ พบว่า ใน a260 /a230 a260 / a280 และอัตราส่วนของตัวอย่างดีเอ็นเอ โซลูชั่น ( รูปที่ 2B )ดังนั้น ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า โปรตีนเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับเคผลผลิตสูงของดีเอ็นเอจากมะละกออบแห้ง บนมืออื่น ๆที่เราถือว่า a-amylase ไม่จําเป็นสําหรับการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอจากมะละกออบแห้ง โดยนอกเหนือจาก เซลลูเลสความเข้มข้นของสารละลายสกัดดีเอ็นเอในตัวอย่างทำไม่มีการเปลี่ยนแปลง อย่างไรก็ตาม การอุดตันของ ier-100g ระหว่างคอลัมน์บริสุทธิ์ดีเอ็นเอ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของมะละกออบแห้งให้เราจึงพิจารณาว่า เซลลูเลส ย่อยขั้นตอนที่จําเป็นสำหรับการสกัดดีเอ็นเอของมะละกอ