Clinical Laboratory Analyses and LG

Clinical Laboratory Analyses and LGLs

Peripheral blood leukocyte morphology was analyzed from May–Grünwald–Giemsa-stained smears. During the dasatinib therapy, lymphocytes with typical LGL morphology were increased to 10% or more among PB leukocytes (normal range for LGL cells is 2%-6% among leukocytes29) in some cases. In other reports, LGL lymphocytosis was defined as an absolute increase in lymphocyte count (eg, > 3.6 × 109/L, or institutional upper normal limit, with LGL morphology).19 In our study, there were cases in which the recovery of white blood cell count was insufficient after allo-SCT; therefore, “increased LGL” was defined as an increase of LGL to more than 10% of the absolute PB leukocyte count. Immunophenotyping was done with flow cytometry using antibodies against the following antigens: CD3, CD4, CD8, CD16, CD45, CD56, CD57, human leukocyte antigen-DR, CD62L, CD45RA, CD45RO, T-cell receptor (TCR)-α/β and TCR-γ/δ with isotype controls. Examination of granzyme B and TCR gene rearrangement was not performed.

Minimal Residual Disease and Mutation Analysis

Bone marrow (BM) samples were collected at the time of initial diagnosis. mRNA from those cells was analyzed for the presence of major and minor BCR-ABL. BM samples were collected at several points before, during, and after dasatinib therapy. Total RNA was extracted using the QIAamp RNA Blood Mini Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Germany) according to the manufacturer's instructions. Reverse transcription was performed with random hexamers, and PCR was performed with TaqMan primer/probes for the e1a2, e13a2 (b2a2), and e14a2 (b3a2) BCR-ABL transcripts in a single tube with normalization to total ABL transcripts. 30 Mutation analysis was performed on relapse samples. Total RNA was extracted from mononuclear cells and reverse transcribed. Scanning of the ABL kinase domain for the presence of mutations was performed as previously reported. 31 and 32

Definitions and Evaluation of Response and Toxicity Monitoring

Complete hematological remission was defined as the reconstitution of normal BM cellularity with < 5% leukemic blasts, absence of blasts in the PB, and no extramedullary involvement from leukemia together with an absolute neutrophil count of > 1.5 × 109/L and a platelet count of > 100 × 109/L. Cytogenetic response was judged using standard cytogenetic analysis in 20 metaphases performed on BM aspirates. CCR was defined as 0% Philadelphia-positive metaphases. Molecular CR was defined as undetectable levels of BCR-ABL transcript. In this study, relapse was defined according to the recurrent BCR-ABL transcript or histological findings. Dasatinib monotherapy was initiated if patients had molecular, cytogenetic, and hematologic relapse. Adverse events (AEs) were graded according to the National Cancer Institute Common Toxicity Criteria grading system, version 4.0. In patients with Grade ≤ 1 toxicity the dosage was planned to be increased up to 100 mg daily. In patients with a Grade 2 AE, the dosage was temporarily reduced. In patients with a Grade 3 AE, the drug was withheld and subsequently resumed at reduced dosage if the Grade decreased to ≤ 1. Treatment was also interrupted in patients who presented with a Grade 4 AE.

Statistical Analysis

The AEs and treatment results of the relapsed Ph+ALL patients with increased LGL after dasatinib treatment were compared with those without increased LGL (Table 2). Comparisons of the 2 groups were made with Fisher exact test. EZR (version 2.14.1) was used for statistical analyses. ‘EZR” (Easy R), which is based on R and R commander. EZR is freely available on website (http://www.jichi.ac.jp/saitama-sct/SaitamaHP.files/statmed.html) and runs on both Windows (Microsoft Corporation, USA) and Mac OS X (Apple, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ปฏิบัติการทางคลินิกและ LGLsสัณฐานวิทยา leukocyte เลือดต่อพ่วงถูกวิเคราะห์จาก smears พฤษภาคม – Grünwald – Giemsa-สี ในระหว่างการรักษา dasatinib, lymphocytes มีสัณฐานวิทยาสุด LGL ทั่วไปได้เพิ่มขึ้น 10% หรือมากกว่าระหว่าง PB leukocytes (ช่วงเซลล์สุด LGL ปกติคือ 2% - 6% จาก leukocytes29) ในบางกรณี ในรายงานอื่น สุด LGL lymphocytosis ถูกกำหนดเป็นการเพิ่มจำนวน lymphocyte (เช่น > 3.6 × 109/L หรือสถาบันปกติขีด มีสัณฐานวิทยาสุด LGL) สัมบูรณ์.19 ในการศึกษาของเรา มีกรณีที่การฟื้นตัวของการตรวจนับเม็ดเลือดขาวไม่เพียงพอหลังจาก allo-บริษัทเอสซีที ดังนั้น "เพิ่มสุด LGL" ถูกกำหนดเป็นการเพิ่มขึ้นของสุด LGL มากกว่า 10% ของ leukocyte จำนวนสัมบูรณ์ของ PB Immunophenotyping ทำกับเซลล์กระแสที่ใช้แอนตี้กับ antigens ดังต่อไปนี้: CD3, CD4, CD8, CD16, CD45, CD56, CD57 มนุษย์ leukocyte ตรวจหา-DR, CD62L, CD45RA, CD45RO, T เซลล์ตัวรับ (TCR) -ด้วยกองทัพ/β และ TCR-γ/δ isotype ควบคุม ไม่มีการตรวจสอบ granzyme B และ rearrangement ยีน TCRโรคเหลือน้อยที่สุดและการวิเคราะห์การกลายพันธุ์ตัวอย่างไขกระดูก (BM) ถูกเก็บรวบรวมในเวลาของการวินิจฉัยเบื้องต้น mRNA จากเซลล์เหล่านั้นถูกวิเคราะห์สำหรับสถานะของหลัก และรอง BM BCR ABL. ตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมหลายจุดก่อน ระหว่าง และหลัง จากรักษาด้วย dasatinib อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้การ QIAamp อาร์เอ็นเอเลือดมินิชุด (QIAGEN GmbH, Hilden เยอรมนี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ทำ transcription ย้อนกับ hexamers สุ่ม และทำ PCR กับ TaqMan รองพื้น/คลิปปากตะเข้สำหรับ e1a2, e13a2 (b2a2), และ e14a2 (b3a2) ใบแสดงผล BCR ABL ในหลอดเดียวมีฟื้นฟูการรวม ABL ใบแสดงผลการ การวิเคราะห์การกลายพันธุ์ 30 ที่ดำเนินการบนตัวอย่างกลับไปเสพ อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากเซลล์ mononuclear และกลับทับศัพท์ การสแกนโดเมน kinase ABL สำหรับของกลายพันธุ์ที่ดำเนินการก่อนหน้านี้ที่ รายงาน 31 และ 32ข้อกำหนดและการประเมินผลของการตอบสนองและการตรวจสอบความเป็นพิษปลดสมบูรณ์ hematological ถูกกำหนดเป็น reconstitution ของปกติ BM cellularity มี blasts leukemic < 5% การขาดงานของ blasts ใน PB และไม่เกี่ยวข้อง extramedullary จากมะเร็งเม็ดเลือดขาวร่วมกับการตรวจนับ neutrophil สัมบูรณ์ของ > 1.5 × 109/L และเกล็ดเลือดการตรวจนับของ > 100 × 109/L. Cytogenetic ตอบถูกตัดสินโดยใช้วิเคราะห์มาตรฐาน cytogenetic ที่ 20 metaphases ทำกับ BM aspirates CCR ถูกกำหนดเป็น 0% ฟิลาเดลเฟียบวก metaphases CR ที่โมเลกุลถูกกำหนดเป็นระดับของเสียงบรรยาย BCR ABL สามค การกลับไปเสพถูกกำหนดในการศึกษานี้ BCR ABL เสียงบรรยายที่เกิดซ้ำหรือสรีรวิทยาพบ Dasatinib monotherapy เป็นจุดเริ่มต้นถ้าผู้ป่วยมีโมเลกุล cytogenetic และ hematologic กลับไปเสพ เหตุการณ์ (AEs) ได้แบ่งแยกตามชาติมะเร็งสถาบันทั่วไป Toxicity เงื่อนไขจัดเกรดระบบ เวอร์ชัน 4.0 ในผู้ป่วยที่มีเกรด≤ 1 ปริมาณมีการวางแผนเพื่อให้ความเป็นพิษเพิ่มขึ้นถึง 100 มิลลิกรัมทุกวัน ในผู้ป่วยที่มี AE 2 ชั้นประถมศึกษาปี ขนาดได้ชั่วคราวลดลง ในผู้ป่วยที่มีเป็นเกรด 3 AE ยาถูกหัก แล้วมาดำเนินต่อในปริมาณที่ลดลงถ้าเกรดลดลงการ≤ 1 ยังถูกรบกวนการรักษาในผู้ป่วยที่แสดงเป็นเกรด 4 AEวิเคราะห์ทางสถิติAEs และผลการรักษาของผู้ป่วย Ph + ทั้งหมด relapsed กับสุด LGL เพิ่มขึ้นหลังการรักษา dasatinib มีเทียบกับไม่สุด LGL เพิ่มขึ้น (ตารางที่ 2) การเปรียบเทียบ 2 กลุ่มที่ทำกับฟิชเชอร์ทดสอบแน่นอน EZR (รุ่น 2.14.1) ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ " EZR " (ง่าย R), ซึ่งขึ้นอยู่กับผู้บัญชาการของ R และ R EZR อิสระมีอยู่บนเว็บไซต์ (ส่วน http://www.jichi.ac.jp/saitama-sct/SaitamaHP.files/statmed.html) และทำงานบน Windows (Microsoft Corporation, USA) และ Mac OS X (Apple สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกและการ LGLs สัณฐานวิทยาของเม็ดเลือดขาวในเลือดส่วนปลายได้รับการวิเคราะห์จาก พ.ค. Grünwald-Giemsa เปื้อนรอยเปื้อน ในระหว่างการรักษาด้วย dasatinib ที่เซลล์เม็ดเลือดขาวที่มีลักษณะทางสัณฐานวิทยา LGL ทั่วไปเพิ่มขึ้นถึง 10% หรือมากขึ้นในหมู่เม็ดเลือดขาว PB (ช่วงปกติสำหรับเซลล์ LGL เป็น 2% -6% ในหมู่ leukocytes29) ในบางกรณี ในรายงานอื่น ๆ , LGL lymphocytosis ถูกกำหนดเป็นเพิ่มขึ้นแน่นอนในการนับเม็ดเลือดขาว (เช่น> 3.6 × 109 / L หรือสถาบันวงเงินปกติบนมีลักษณะทางสัณฐานวิทยา LGL) 0.19 ในการศึกษาของเรามีกรณีที่การฟื้นตัวของสีขาว จำนวนเซลล์เม็ดเลือดไม่เพียงพอหลังจาก allo-SCT; ดังนั้น "เพิ่มขึ้น LGL" ถูกกำหนดเป็นเพิ่มขึ้น LGL ให้มากขึ้นกว่า 10% ของจำนวนเม็ดเลือดขาว PB แน่นอน immunophenotyping ได้ทำกับการไหลภูมิคุ้มกันโดยใช้แอนติบอดีต่อแอนติเจนต่อไปนี้: CD3, CD4, CD8, CD16, CD45, CD56, CD57, เม็ดเลือดขาวของมนุษย์แอนติเจน DR, CD62L, CD45RA, CD45RO, รับ T-cell (TCR) -α / β และ TCR-γ / δกับการควบคุม isotype การตรวจสอบของ granzyme บีและปรับปรุงใหม่ยีน TCR ไม่ได้ดำเนิน. โรคที่เหลือน้อยที่สุดและการกลายพันธุ์วิเคราะห์ไขกระดูก (BM) เก็บตัวอย่างเวลาของการวินิจฉัยเบื้องต้น mRNA จากเซลล์เหล่านั้นได้รับการวิเคราะห์การปรากฏตัวของหลักและรอง BCR-ABL ตัวอย่าง BM ถูกเก็บรวบรวมหลายจุดก่อนระหว่างและหลังการรักษา dasatinib รวม RNA ถูกสกัดโดยใช้อาร์เอ็นเอ QIAamp เลือด Mini Kit (QIAGEN GmbH, ฮิลเดน, เยอรมนี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ถอดความย้อนกลับได้ดำเนินการกับ hexamers สุ่มและ PCR ได้ดำเนินการกับไพรเมอร์ TaqMan / โพรบสำหรับ e1a2 ที่ e13a2 (b2a2) และ e14a2 (b3a2) ใบรับรองผลการเรียน BCR-ABL ในหลอดเดียวกับการฟื้นฟูรวมจิตบำบัด ABL 30 การวิเคราะห์การกลายพันธุ์ได้รับการดำเนินการกับตัวอย่างการกำเริบของโรค รวม RNA ถูกสกัดจากเซลล์โมโนนิวเคลียร์และย้อนกลับคัดลอก การสแกนของโดเมนไคเนส ABL การปรากฏตัวของการกลายพันธุ์ที่ได้ดำเนินการตามที่รายงานก่อนหน้านี้ วันที่ 31 และ 32 ความหมายและการประเมินผลการตอบสนองและความเป็นพิษการตรวจสอบการให้อภัยทางโลหิตวิทยาที่สมบูรณ์ถูกกำหนดเป็นปฏิสังขรณ์ของ cellularity ปกติ BM ด้วย <5% ลั่น leukemic ที่ขาดหายไปของระเบิดใน PB และไม่มีส่วนร่วม extramedullary จากโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวพร้อมกับนับ neutrophil แน่นอนของ > 1.5 × 109 / L และเกล็ดเลือดของ> 100 × 109 / L การตอบสนองทาง cytogenetic ถูกตัดสินโดยใช้การวิเคราะห์ทาง cytogenetic 20 มาตรฐานในการดำเนินการเกี่ยวกับ metaphases BM aspirates CCR ถูกกำหนดเป็น 0% metaphases ฟิลาเดลบวก โมเลกุล CR ถูกกำหนดเป็นระดับที่ตรวจสอบไม่พบหลักฐานของ BCR-ABL ในการศึกษานี้การกำเริบของโรคถูกกำหนดให้เป็นไปตามหลักฐานที่เกิดขึ้นอีก BCR-ABL หรือการค้นพบเนื้อเยื่อ ยา Dasatinib ได้ริเริ่มขึ้นถ้าผู้ป่วยมีโมเลกุลเซลล์พันธุศาสตร์และการกำเริบของโรคทางโลหิตวิทยา เหตุการณ์ไม่พึงประสงค์ (AES) ได้รับการจัดลำดับตามที่สถาบันมะเร็งแห่งชาติเกณฑ์ความเป็นพิษที่พบโดยทั่วไประบบการให้คะแนน, รุ่น 4.0 ในผู้ป่วยที่มีเกรด≤ 1 พิษปริมาณกำลังวางแผนที่จะเพิ่มขึ้นถึง 100 มิลลิกรัมต่อวัน ในผู้ป่วยที่มีเกรด 2 AE ปริมาณลดลงชั่วคราว ในผู้ป่วยที่มีเกรด 3 AE, ยาเสพติดที่ถูกระงับและกลับในเวลาต่อมาปริมาณลดลงถ้าเกรดลดลง≤ 1. การรักษายังถูกขัดจังหวะในผู้ป่วยที่นำเสนอด้วยชั้นประถมศึกษาปีที่ 4 AE. การวิเคราะห์ทางสถิติเออีและผลการรักษาอาการกำเริบPh + ผู้ป่วยทั้งหมดที่มี LGL เพิ่มขึ้นหลังการรักษา dasatinib ถูกเมื่อเทียบกับคนที่ไม่เพิ่มขึ้น LGL (ตารางที่ 2) การเปรียบเทียบของ 2 กลุ่มที่ทำกับการทดสอบฟิชเชอร์ที่แน่นอน EZR (เวอร์ชั่น 2.14.1) ที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ 'EZR "(ง่าย R) ซึ่งจะขึ้นอยู่กับ R และ R บัญชาการ EZR เป็นอิสระที่มีอยู่บนเว็บไซต์ (http://www.jichi.ac.jp/saitama-sct/SaitamaHP.files/statmed.html) และทำงานได้ทั้งบน Windows (Microsoft Corporation สหรัฐอเมริกา) และ Mac OS X (แอปเปิ้ล, สหรัฐอเมริกา )

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คลินิกห้องปฏิบัติการวิเคราะห์และ LGLS

เลือดส่วนปลายทำให้สัณฐานวิทยาวิเคราะห์จากพฤษภาคม– GR ü nwald –จิมซาเปรอะเปื้อน ในช่วง dasatinib บำบัด , เม็ดเลือดขาวกับสัณฐาน LGL ทั่วไปเพิ่มเป็น 10% หรือมากกว่าของ PB เม็ดเลือดขาว ( ช่วงปกติของ LGL เซลล์ 2 - 6 % ของ leukocytes29 ) ในบางกรณี ในรายงานอื่น ๆlymphocytosis LGL เป็นหมายถึงเพิ่มแน่นอนในการนับเม็ดเลือดขาว ( เช่น > 3.6 × 109 / L หรือสถาบันบนปกติจำกัด , LGL ที่ 19 ในการศึกษาของเรา มีกรณี ซึ่งการฟื้นตัวของเม็ดเลือดขาวไม่เพียงพอหลังจากฮัลโหล SCT ; ดังนั้น , " เพิ่มขึ้น LGL " ถูกกำหนดเป็น การเพิ่มขึ้นของ LGL มากกว่า 10% ของสัมบูรณ์ PB 2 นับimmunophenotyping ทำกับการใช้แอนติบอดีต่อแอนติเจน ( ต่อไปนี้ : ทันที , CD4 , CD8 cd16 cd45 ปรากฏ , , , , cd57 แอนติเจน ทำให้มนุษย์ cd62l cd45ra cd45ro ดร , , , , จากตัวรับ ( ประวัติ ) - บีตา - γและα / ประวัติ / δกับและควบคุม การตรวจสอบของแกรนไซม์บีและระดับยีนใหม่ไม่ได้ทำ



และการวิเคราะห์โรคที่เหลือน้อยที่สุด การกลายพันธุ์ไขกระดูก ( BM ) โดยเก็บตัวอย่างในเวลาของการเริ่มต้นการวินิจฉัย ยีนจากเซลล์เหล่านั้นเป็นข้อมูลสำหรับการปรากฏตัวของรายใหญ่ และรายย่อย bcr-abl . ตัวอย่าง BM จำนวนหลายจุด ในช่วงก่อน ระหว่าง และหลัง dasatinib บำบัด อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้ qiaamp RNA เลือด Mini Kit ( QIAGEN GmbH , ฮิลเดน , เยอรมนี ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตถอดความย้อนกลับได้ด้วย hexamers สุ่มและ PCR คือการ taqman รองพื้น / ฟิวส์สำหรับ e1a2 e13a2 , ( b2a2 ) และ e14a2 ( b3a2 ) bcr-abl transcripts ในหลอดเดียวกับบรรทัดฐานที่จะรวม ABL รายงาน 30 ของการวิเคราะห์ตัวอย่างทรุด อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์ปกติและกลับการทับศัพท์การสแกนของเมนไคเนส ABL สำหรับการแสดงตนของการกลายพันธุ์ ได้ดำเนินการตามที่รายงานก่อนหน้านี้ 31 และ 32

ความหมายและการประเมินผลและการตรวจสอบความเป็นพิษต่อ

( การให้อภัยคือสมบูรณ์ที่กำหนดไว้ได้เองปกติ BM องค์การเภสัชกรรมด้วย < 5 % ของ blasts ขาด blasts ใน PB ,และไม่มี extramedullary เกี่ยวข้องจากลูคีเมียพร้อมกับนับนิวโทรฟิลสัมบูรณ์ของ > 1.5 × 109 / l และเกล็ดเลือด > 100 × 109 / ลิตร การตอบสนองก็ตัดสินโดยใช้การวิเคราะห์การมาตรฐานใน 20 metaphases ใช้ BM aspirates . CCR ได้นิยามเป็น 0% ฟิลาเดลเฟียบวก metaphases . โมเลกุลโครเมียมถูกกำหนดไว้เป็น undetectable ระดับ bcr-abl ใบรับรองผลการศึกษาในการศึกษานี้ได้กำหนดดำเนินการซ้ำตาม bcr-abl ผลการเรียน หรือผลการค้นพบ โดยได้มีการริเริ่ม dasatinib ถ้าผู้ป่วยมีโมเลกุล เซลล์พันธุศาสตร์และวิทยาการป่วยซ้ำ เหตุการณ์ไม่พึงประสงค์ ( AES ) ให้คะแนนตามสถาบันมะเร็งแห่งชาติพบความเป็นพิษเกณฑ์การให้คะแนนระบบ , รุ่น 4.0ในผู้ป่วยที่มีเกรด≤ 1 พิษยาที่ถูกคาดว่าจะเพิ่มขึ้นถึง 100 มก. ทุกวัน ในผู้ป่วยที่มีเกรด 2 เอ ปริมาณก็ลดลงชั่วคราว . ในผู้ป่วยที่มีเกรด 3 เอ ยาระงับและต่อมากลับมาที่ลดปริมาณ ถ้าเกรดลดลง≤ 1 การรักษาก็ขัดจังหวะในผู้ป่วยที่นำเสนอกับเกรด 4 เอ



สถิติการวิเคราะห์AES และรักษาผลกลับมาอ ผู้ป่วยหลังการรักษาเพิ่มขึ้น LGL dasatinib เปรียบเทียบกับผู้ที่ไม่มีเพิ่มขึ้น LGL ( ตารางที่ 2 ) การเปรียบเทียบของ 2 กลุ่มด้วย fisher exact test EZR ( รุ่น 2.14.1 ) สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ทางสถิติ ' EZR " ง่าย ( R ) ซึ่งจะขึ้นอยู่กับ R และ R ผู้บัญชาการ EZR เป็นอิสระที่มีอยู่บนเว็บไซต์ ( http://www.jichi.ac .JP / ไซตามะ SCT / saitamahp ไฟล์ / statmed . html ) และทำงานบน Windows ( Microsoft Corporation , USA ) และ Mac OS X ( แอปเปิ้ล , USA )