Transformation[edit]Main article: T

Transformation[edit]
Main article: Transformation (genetics)

A. tumefaciens attaching itself to a carrot cell
Only about 1% of bacteria are naturally capable of taking up foreign DNA. However, this ability can be induced in other bacteria via stress (e.g. thermal or electric shock), thereby increasing the cell membrane's permeability to DNA; up-taken DNA can either integrate with the genome or exist as extrachromosomal DNA. DNA is generally inserted into animal cells using microinjection, where it can be injected through the cell's nuclear envelope directly into the nucleus or through the use of viral vectors.[62] In plants the DNA is generally inserted using Agrobacterium-mediated recombination or biolistics.[63]

In Agrobacterium-mediated recombination, the plasmid construct contains T-DNA, DNA which is responsible for insertion of the DNA into the host plants genome. This plasmid is transformed into Agrobacterium containing no plasmids prior to infecting the plant cells. The Agrobacterium will then naturally insert the genetic material into the plant cells.[64] In biolistics transformation particles of gold or tungsten are coated with DNA and then shot into young plant cells or plant embryos. Some genetic material will enter the cells and transform them. This method can be used on plants that are not susceptible to Agrobacterium infection and also allows transformation of plant plastids. Another transformation method for plant and animal cells is electroporation. Electroporation involves subjecting the plant or animal cell to an electric shock, which can make the cell membrane permeable to plasmid DNA. In some cases the electroporated cells will incorporate the DNA into their genome. Due to the damage caused to the cells and DNA the transformation efficiency of biolistics and electroporation is lower than agrobacterial mediated transformation and microinjection.[65]

As often only a single cell is transformed with genetic material the organism must be regenerated from that single cell. As bacteria consist of a single cell and reproduce clonally regeneration is not necessary. In plants this is accomplished through the use of tissue culture. Each plant species has different requirements for successful regeneration through tissue culture. If successful an adult plant is produced that contains the transgene in every cell. In animals it is necessary to ensure that the inserted DNA is present in the embryonic stem cells. Selectable markers are used to easily differentiate transformed from untransformed cells. These markers are usually present in the transgenic organism, although a number of strategies have been developed that can remove the selectable marker from the mature transgenic plant.[66] When the offspring is produced they can be screened for the presence of the gene. All offspring from the first generation will be heterozygous for the inserted gene and must be mated together to produce a homozygous animal.

Further testing uses PCR, Southern hybridization, and DNA sequencing is conducted to confirm that an organism contains the new gene. These tests can also confirm the chromosomal location and copy number of the inserted gene. The presence of the gene does not guarantee it will be expressed at appropriate levels in the target tissue so methods that look for and measure the gene products (RNA and protein) are also used. These include northern hybridization, quantitative RT-PCR, Western blot, immunofluorescence, ELISA and phenotypic analysis. For stable transformation the gene should be passed to the offspring in a Mendelian inheritance pattern, so the organism's offspring are also studied.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

[แก้ไข] การแปลงบทความหลัก: การเปลี่ยนแปลง (พันธุศาสตร์)A. tumefaciens แนบตัวเองไปยังเซลล์แครอทเพียงประมาณ 1% ของแบคทีเรียตามธรรมชาติสามารถกินดีเอ็นเอต่างประเทศได้ อย่างไรก็ตาม สามารถเกิดความสามารถนี้ในแบคทีเรียอื่น ๆ ผ่านความเครียด (เช่นความร้อน หรือไฟฟ้าช็อต), จึงช่วยเพิ่ม permeability ของเยื่อเซลล์ให้ดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอขึ้นมาสามารถทำงานร่วมกับกลุ่ม หรืออยู่เป็น extrachromosomal DNA โดยทั่วไปมีแทรกดีเอ็นเอในเซลล์สัตว์ที่ใช้ microinjection ที่มันสามารถถูกฉีดผ่านของเซลล์นิวเคลียร์ซอง เข้านิวเคลียสโดยตรง หรือโดย ใช้เวกเตอร์ไวรัส[62] ในพืช ดีเอ็นเอโดยทั่วไปใส่ใช้ recombination mediated อโกรแบคทีเรียมหรือ biolistics[63]ใน recombination mediated อโกรแบคทีเรียม สร้าง plasmid ประกอบด้วย T-ดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอซึ่งรับผิดชอบแทรกดีเอ็นเอที่เป็นกลุ่มพืชโฮสต์ Plasmid นี้จะเปลี่ยนเป็นประกอบด้วยไม่ plasmids ก่อนติดเซลล์พืชอโกรแบคทีเรียม อโกรแบคทีเรียมจะธรรมชาติแทรกวัสดุทางพันธุกรรมในเซลล์พืช[64] ในการแปลง biolistics อนุภาคของทองคำหรือทังสเตนเคลือบ ด้วยดีเอ็นเอแล้ว ยิงเข้าไปในเซลล์กล้า หรือพืชโคลนนั้น วัสดุบางอย่างทางพันธุกรรมจะป้อนเซลล์ และออก วิธีนี้สามารถใช้ได้กับพืชที่ไม่ไวต่อการติดเชื้ออโกรแบคทีเรียม และยัง ช่วยให้การเปลี่ยนแปลงของพืช plastids วิธีการแปลงอื่นสำหรับพืชและเซลล์สัตว์คือ electroporation Electroporation เกี่ยวข้องแล้วก็กดชัตเตอร์พืชหรือเซลล์สัตว์การช็อค ซึ่งสามารถทำให้เยื่อเซลล์ permeable ให้ plasmid DNA ในบางกรณี เซลล์ electroporated จะรวมดีเอ็นเอที่เป็นกลุ่มของพวกเขา เนื่องจากความเสียหายที่เกิดกับเซลล์และดีเอ็นเอมีประสิทธิภาพการแปลง biolistics และ electroporation เป็นต่ำกว่า agrobacterial mediated แปลงและ microinjection[65]เป็นบ่อยเพียงเซลล์เดียวคือแปลง ด้วยวัสดุทางพันธุกรรม สิ่งมีชีวิตที่ต้องสร้างใหม่จากเซลล์เดียว เป็นแบคทีเรียประกอบด้วยเซลล์เพียงเซลล์เดียว และสร้าง clonally ฟื้นฟูไม่จำเป็น ในพืช นี้สามารถทำโดยใช้เนื้อเยื่อ แต่ละชนิดพืชมีความต้องการฟื้นฟูประสบความสำเร็จผ่านเยื่อ ถ้าสำเร็จ โรงงานมีผู้ใหญ่เป็นผลิตที่ประกอบด้วย transgene ในทุกเซลล์ สัตว์ จำเป็นเพื่อให้แน่ใจว่าดีเอ็นเอแทรกอยู่ในเซลล์ต้นกำเนิดตัวอ่อน เครื่องหมายเลือกใช้ง่ายแปรรูปจากเซลล์ untransformed เครื่องหมายเหล่านี้มีอยู่ปกติในสิ่งมีชีวิตที่ถั่วเหลือง แม้ว่าจำนวนกลยุทธ์ได้รับการพัฒนาที่สามารถเอาเครื่องหมายเลือกจากพืชถั่วเหลืองเติบโตได้[66] เมื่อผลิตลูกหลานพวกเขาสามารถจะฉายสำหรับสถานะของยีน ลูกหลานทั้งหมดจากรุ่นแรกจะเป็น heterozygous สำหรับยีนแทรก และต้อง mated กันในการผลิตสัตว์ homozygousทดสอบเพิ่มเติม ใช้ PCR, hybridization ใต้ และดำเนินการจัดลำดับของดีเอ็นเอเพื่อยืนยันว่า สิ่งมีชีวิตที่ประกอบด้วยยีนใหม่ ทดสอบเหล่านี้ยังสามารถยืนยันตำแหน่งของโครโมโซม และคัดลอกจำนวนยีนแทรก ของยีนไม่รับประกันว่า มันจะสามารถแสดงในระดับที่เหมาะสมในเนื้อเยื่อเป้าหมายดังนั้นยังใช้วิธีการที่ค้นหา และวัดด้านยีน (อาร์เอ็นเอและโปรตีน) ซึ่งรวมถึงเหนือ hybridization เชิงปริมาณ RT-PCR คืนในตาตะวันตก immunofluorescence, ELISA และวิเคราะห์ไทป์ สำหรับการแปลงที่มีเสถียรภาพยีนควรส่งผ่านไปยังลูกหลานในรูปแบบของเมนเดล ดังนั้นลูกหลานของสิ่งมีชีวิตยังเรียน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเปลี่ยนแปลง [แก้ไข]
บทความหลัก: การเปลี่ยนแปลง (พันธุศาสตร์) A. tumefaciens แนบตัวเองไปยังเซลล์แครอทเพียง 1% ของแบคทีเรียที่เป็นธรรมชาติมีความสามารถในการขึ้นดีเอ็นเอต่างประเทศ อย่างไรก็ตามความสามารถนี้สามารถเหนี่ยวนำให้เกิดเชื้อแบคทีเรียอื่น ๆ ผ่านความเครียด (เช่นความร้อนหรือช็อตไฟฟ้า) จึงเพิ่มการซึมผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ของดีเอ็นเอ ขึ้นนำดีเอ็นเอทั้งสามารถทำงานร่วมกับจีโนมหรืออยู่ดีเอ็นเอ extrachromosomal เป็น ดีเอ็นเอถูกแทรกโดยทั่วไปในเซลล์สัตว์โดยใช้ microinjection ที่ที่มันสามารถฉีดผ่านเปลือกนิวเคลียร์ของเซลล์โดยตรงในนิวเคลียสหรือผ่านการใช้พาหะไวรัส. [62] ในพืชดีเอ็นเอจะถูกแทรกโดยทั่วไปใช้การรวมตัว Agrobacterium พึ่งหรือ biolistics [63] ในการรวมตัวกันอีก Agrobacterium พึ่ง, สร้างพลาสมิดมีเสื้อดีเอ็นเอดีเอ็นเอซึ่งเป็นผู้รับผิดชอบสำหรับการแทรกของดีเอ็นเอในพืชจีโนม พลาสมิดนี้จะกลายเป็นแบคทีเรียที่มีพลาสมิดไม่ก่อนที่จะมีการติดเชื้อเซลล์พืช Agrobacterium จะแล้วธรรมชาติแทรกสารพันธุกรรมเข้าไปในเซลล์พืช. [64] ใน biolistics การเปลี่ยนแปลงของอนุภาคทองหรือทังสเตนเคลือบด้วยดีเอ็นเอแล้วยิงเข้าไปในเซลล์พืชหนุ่มสาวหรือตัวอ่อนของพืช บางสารพันธุกรรมจะเข้าสู่เซลล์และเปลี่ยนพวกเขา วิธีการนี้สามารถใช้กับพืชที่ไม่ไวต่อการติดเชื้อแบคทีเรียและยังช่วยให้การเปลี่ยนแปลงของพืช plastids วิธีการเปลี่ยนแปลงอีกประการหนึ่งสำหรับพืชและสัตว์เซลล์เป็น Electroporation Electroporation เกี่ยวข้องกับหนอนบ่อนไส้พืชหรือสัตว์เซลล์ไฟฟ้าช็อตซึ่งสามารถทำให้เยื่อหุ้มเซลล์ดูดซึมไปพลาสมิดดีเอ็นเอ ในบางกรณีเซลล์ electroporated จะรวมดีเอ็นเอในจีโนมของพวกเขา เนื่องจากความเสียหายที่เกิดกับเซลล์และดีเอ็นเอที่มีประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงของ biolistics และ Electroporation ต่ำกว่า agrobacterial การเปลี่ยนแปลงสื่อกลางและ microinjection. [65] ในฐานะที่เป็นมักจะเป็นเพียงเซลล์เดียวจะเปลี่ยนกับสารพันธุกรรมสิ่งมีชีวิตจะต้องถูกสร้างใหม่จากเซลล์เดียวที่ เป็นแบคทีเรียที่ประกอบด้วยเซลล์เดียวและทำซ้ำ clonally ฟื้นฟูไม่จำเป็น ในพืชนี้สามารถทำได้โดยการใช้การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ แต่ละสายพันธุ์พืชที่มีความต้องการแตกต่างกันสำหรับการฟื้นฟูที่ประสบความสำเร็จผ่านการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ หากประสบความสำเร็จพืชผู้ใหญ่มีการผลิตที่มียีนในทุกเซลล์ ในสัตว์ที่มีความจำเป็นเพื่อให้แน่ใจว่าดีเอ็นเอแทรกอยู่ในเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อน เครื่องหมายที่เลือกจะใช้ในการแยกความแตกต่างได้อย่างง่ายดายเปลี่ยนจากเซลล์ untransformed เครื่องหมายเหล่านี้มักจะอยู่ในสิ่งมีชีวิตดัดแปรพันธุกรรมแม้ว่าจำนวนของกลยุทธ์ได้รับการพัฒนาที่สามารถลบเครื่องหมายเลือกจากพืชดัดแปรพันธุกรรมผู้ใหญ่. [66] เมื่อลูกหลานที่ผลิตพวกเขาสามารถได้รับการคัดเลือกสำหรับการปรากฏตัวของยีน ลูกหลานทั้งหมดจากรุ่นแรกจะเป็น heterozygous สำหรับแทรกยีนและจะต้องแต่งงานกันในการผลิตสัตว์ homozygous การทดสอบเพิ่มเติมใช้วิธี PCR พันธุ์ใต้และลำดับดีเอ็นเอจะดำเนินการเพื่อยืนยันว่าสิ่งมีชีวิตที่มียีนใหม่ การทดสอบเหล่านี้ยังสามารถยืนยันสถานที่ของโครโมโซมและคัดลอกหมายเลขของยีนแทรก การปรากฏตัวของยีนไม่ได้รับประกันว่าจะได้รับการแสดงในระดับที่เหมาะสมในเนื้อเยื่อเป้าหมายเพื่อให้วิธีการที่มองหาและวัดผลิตภัณฑ์ยีน (อาร์เอ็นเอและโปรตีน) นอกจากนี้ยังใช้ เหล่านี้รวมถึงการผสมข้ามพันธุ์เหนือปริมาณ RT-PCR ดวงตะวัน, immunofluorescence, ELISA และฟีโนไทป์การวิเคราะห์ สำหรับการเปลี่ยนแปลงที่มีเสถียรภาพของยีนที่ควรจะส่งผ่านไปยังลูกหลานในรูปแบบการถ่ายทอดทางพันธุกรรมของเมนเดลดังนั้นลูกหลานมีชีวิตที่ยังมีการศึกษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเปลี่ยนแปลง [ แก้ไข ]
บทความหลัก : การเปลี่ยนแปลง ( พันธุศาสตร์ )

A . tumefaciens แนบตัวเองกับแครอทเซลล์
เพียงประมาณ 1% ของแบคทีเรียตามธรรมชาติสามารถเอาขึ้นจากดีเอ็นเอ อย่างไรก็ตาม ความสามารถนี้สามารถนำแบคทีเรียอื่น ๆผ่านความเครียด ( เช่นความร้อนหรือไฟฟ้าช็อต ) จึงช่วยเพิ่มการซึมผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ของดีเอ็นเอ ;ขึ้นนำดีเอ็นเอสามารถรวมเข้ากับจีโนม หรืออยู่ที่ตัดทอน . ดีเอ็นเอโดยทั่วไปจะแทรกลงในเซลล์สัตว์โดยใช้ไมโครอินเจคชัน ที่สามารถฉีดผ่านมือถือนิวเคลียร์ซองโดยตรงลงในนิวเคลียส หรือใช้เป็นพาหะไวรัส [ 62 ] ในพืชโดยทั่วไปคือ การใช้ดีเอ็นเอ Agrobacterium การแทรก ( หรือ biolistics [ 63 ]

ในระดับการจําลอง , พลาสมิดที่สร้างประกอบด้วย t-dna ดีเอ็นเอ ซึ่งเป็นผู้รับผิดชอบในการแทรกของดีเอ็นเอในจีโนมพืชเป็นเจ้าภาพ . พลาสมิดนี้กลายเป็น Agrobacterium ประกอบด้วยไม่พลาสก่อนการติดเชื้อในเซลล์พืช การจําลองแล้วจะเป็นธรรมชาติแทรกสารพันธุกรรมในเซลล์พืช[ 64 ] ใน biolistics การแปลงอนุภาคของทองหรือทังสเตนเคลือบด้วยดีเอ็นเอ และยิงเข้าไปในเซลล์พืชหนุ่มสาวหรือเอ็มบริโอพืช บางทางพันธุกรรมจะเข้าสู่เซลล์และเปลี่ยนพวกเขา วิธีนี้สามารถใช้กับพืชที่ไม่ไวต่อการติดเชื้อและยังช่วยให้การแปลงของ Agrobacterium พลาสติดพืชอีกวิธีสำหรับการแปลงเซลล์พืชและเซลล์สัตว์มี electroporation . electroporation เกี่ยวกับ subjecting โรงงานหรือเซลล์สัตว์ให้ไฟฟ้าช็อต ซึ่งสามารถทำให้เซลล์เยื่อซึมผ่านการพลาสมิดดีเอ็นเอ ในบางกรณีที่เซลล์ electroporated จะรวมดีเอ็นเอในจีโนมของเนื่องจากความเสียหายที่เกิดกับเซลล์และ DNA การเปลี่ยนแปลงประสิทธิภาพของ biolistics electroporation และกว่าจะผ่านการเปลี่ยนแปลงและ agrobacterial จังหวัดสุพรรณบุรี [ 65 ]

มักจะเป็นเพียงเซลล์เดียวคือ แปลง ด้วยสารพันธุกรรมสิ่งมีชีวิตต้องได้จากที่เดียว เซลล์ เป็นแบคทีเรียประกอบด้วยเซลล์เดียว และเกิด clonally งอกไม่จําเป็นในโรงงานนี้ได้ผ่านการใช้เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ พืชแต่ละชนิดมีความต้องการที่แตกต่างกัน ความงอกด้วยวิธีเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ถ้าสำเร็จผู้ใหญ่โรงงานผลิตที่มียีนในเซลล์ ในสัตว์ มันเป็นสิ่งที่จำเป็นเพื่อให้แน่ใจว่าใส่ดีเอ็นเออยู่ในเซลล์ต้นกำเนิดตัวอ่อน .เลือกเครื่องหมายถูกใช้เพื่อแยกแยะได้อย่างง่ายดายแปลงจาก untransformed เซลล์ เครื่องหมายเหล่านี้มักจะปรากฏในสิ่งมีชีวิตดัดแปรพันธุกรรม แม้ว่าจำนวนของกลยุทธ์ที่ได้รับการพัฒนาที่สามารถลบเครื่องหมายที่เลือกจากผู้ใหญ่ต้นพืช [ 66 ] เมื่อลูกหลานที่พวกเขาสามารถเพิ่มการแสดงตนของยีนลูกหลานจากรุ่นแรกจะเป็น homozygous สำหรับแทรกยีน และต้องแต่งงานกันในการผลิตสัตว์แบบ

เพิ่มเติม การทดสอบการใช้ PCR วิธี Southern hybridization และการจัดลำดับดีเอ็นเอมีวัตถุประสงค์เพื่อยืนยันว่า สิ่งมีชีวิตที่มียีนใหม่ การทดสอบเหล่านี้ยังสามารถยืนยันสถานที่ และจำนวนชุดของโครโมโซมแทรกยีนการปรากฏตัวของยีนไม่รับประกัน จะแสดงในระดับที่เหมาะสมในเนื้อเยื่อเป้าหมายดังนั้นวิธีการค้นหาและวัดผลิตภัณฑ์ยีน ( RNA และโปรตีน ) ยังใช้ เหล่านี้รวมถึงภาคเหนือวิธี Western blot hybridization , เชิงปริมาณ , วิธี , ELISA และการวิเคราะห์คุณสมบัติ .สำหรับเสถียรภาพการเปลี่ยนแปลงยีนควรจะส่งผ่านไปยังลูกหลานในชนิดรูปแบบมรดก ดังนั้นสิ่งมีชีวิตลูกหลานยังศึกษา