2.2. Sensor surface activation and

2.2. Sensor surface activation and biofunctionalization The oxidized silicon wafers were diced in pieces of 75 (5.0 15) mm2 prior to chemical activation and biofunctionalization. These dies were cleaned/hydrophilized through treatment with Piranha solution (1:1 H2SO4/30% H2O2) for 20 min and then washed extensively with distilled water, dried under nitrogen flow and immersed in a 2% (v/v) aqueous APTES solution for 20 min. Then, they were gently washed with distilled water, dried under a nitrogen stream and cured for 20 min at 120 °C. The functionalized dies were kept in a desiccator under vacuum until use. Bands of antibodies against CRP and D-dimer were created on the chips surface by spotting solutions of 200 μg/mL in carbonate buffer, pH 9.2. Each band was created by applying 15 35 overlapping spots with a pitch of 100 μm using a solid pin with a 375- μm tip diameter (SSP015, Arrayit Corporation, Sunnyvale, USA) employing the BioOdyssey CalligrapherTM microarray spotter (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Thus, the dimensions of each antibody band were 1.7 3.7 mm2 with a between band interval of 1 mm (Supplementary, Fig. S1A). The chips were kept overnight under controlled humidity conditions (average humidity 75%) and then, they were washed with Tris–HCl 10 mM, pH 8.25, 9 g/L NaCl (washing solution) and immersed in blocking solution (50 mg/mL BSA in 0.1 M NaHCO3, pH 8.5) for 2 h at RT. Finally, the biofunctionalized chips were washed with washing solution and distilled water, dried under nitrogen flow, and used for the assay. The biofunctionalized chip was assembled with an open fluidic compartment cut from a 200- mm thick double side adhesive (Tesa Werk Offenburg GmbH, Germany) and a milled 2-mm thick PMMA cover is applied on top to form the fluidic chamber (Fig. 1A). The PMMA cover material (2- mm thick PLEXIGLASs GS, casted sheets with superior optical properties, EVONIK Industries, Germany) quality and thickness was carefully selected to facilitate for the probing of light through the external reflection probe (see Section 2.3) and to provide secure sealing. The fluid inlet and outlet has been also embedded on the PMMA top cover (Fig.1B). Biofunctionalized and packaged chips are mentioned hereafter as biochips.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. เซ็นเซอร์เปิดใช้งานพื้นผิวและ biofunctionalization เวเฟอร์ซิลิกอนออกซิไดซ์ได้เตรียมการในชิ้น 75 (5.0 15) mm2 ก่อนเปิดใช้งานเคมีและ biofunctionalization ตายเหล่านี้ถูกทำความ สะอาด/hydrophilized ผ่านการรักษาด้วยโซลูชันปิรันย่า (1:1 H2SO4/30% H2O2) สำหรับ 20 นาที และจากนั้น ล้าง ด้วยน้ำกลั่น แห้งภายใต้กระแสไนโตรเจน และดื่มด่ำใน 2% (v/v) APTES ละลาย 20 นาทีอย่างกว้างขวาง แล้ว พวกเขาเบา ๆ ล้าง ด้วยน้ำกลั่น แห้งภายใต้กระแสไนโตรเจน และหายขาดสำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิ 120 องศาเซลเซียส ตาย functionalized ถูกเก็บไว้ใน desiccator ภายใต้สุญญากาศจนกว่าจะใช้ วงของแอนติบอดีต่อ CRP และ D-dimer ถูกสร้างขึ้นบนพื้นผิวเกล็ด โดยจำโซลูชั่นของ 200 μ/mL ในบัฟเฟอร์คาร์บอเนต pH 9.2 แต่ละวงถูกสร้างขึ้น โดยใช้ 15 35 ซ้อนจุด ด้วยระยะห่างของ 100 μ m โดยใช้หมุดไม้ มี 375-ไมครอนปลายเส้นผ่าศูนย์กลาง (SSP015, Arrayit Corporation, Sunnyvale สหรัฐอเมริกา) จ้าง BioOdyssey CalligrapherTM microarray spotter (เชื้อ เฮอร์คิวลิส CA) ดังนั้น ขนาดของแต่ละวงแอนติบอดีได้ 1.7 3.7 mm2 ด้วยในระหว่างช่วงวง 1 มม. (ตีนจก มะเดื่อ S1A) เบี้ยถูกเก็บไว้ค้างคืนภายใต้สภาพควบคุมความชื้น (ความชื้นเฉลี่ย 75%) แล้ว พวกเขาล้าง ด้วยทริสเรทติ้ง – HCl 10 มม. pH 8.25, 9 g/L NaCl (ซักผ้าแก้ปัญหา) และแช่อยู่ในบล็อกโซลูชั่น (50 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรบีเอสเอใน 0.1 M NaHCO3, pH 8.5) สำหรับ 2h ที่ rt ในที่สุด ชิ biofunctionalized ถูกล้าง ด้วยล้างโซลูชัน และกลั่นน้ำ แห้งภายใต้กระแสไนโตรเจน และใช้สำหรับการทดสอบ ชิ biofunctionalized ได้ประกอบ ด้วยช่องใส่ fluidic เปิดที่ตัดจากตัวกาวสองด้านหนา 200 มม. (เทศา Werk ออฟเฟนบูร์ก GmbH เยอรมนี) และใช้ข้าวสาร 2 มม.หนา PMMA ฝาปิดอยู่ด้านบนในรูปแบบหอ fluidic (รูปที่ 1A) วัสดุหุ้ม PMMA (2 mm หนาลูกแก้ว GS แผ่นหล่อ มีคุณสมบัติเหนือกว่าออปติคอล อุตสาหกรรม EVONIK เยอรมนี) คุณภาพและความหนาถูกคัดสรรเพื่ออำนวยความสะดวกสำหรับละเอียดแสงสะท้อนภายนอกผ่านโพรบ (ดูหัวข้อ 2.3) และ เพื่อให้ปลอดภัยปิดผนึก ของไหลไหลเข้าและออกได้ถูกฝังอยู่ในฝาบน PMMA (Fig.1B) ยัง Biofunctionalized และบรรจุเศษกล่าวถึงอนาคตเป็น biochips

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 เซนเซอร์เปิดใช้งานพื้นผิวและ biofunctionalization ออกซิไดซ์ซิลิคอนเวเฟอร์ถูกหั่นเป็นชิ้น ๆ 75 (5.0 15) MM2 ก่อนที่จะมีการกระตุ้นทางเคมีและ biofunctionalization ตายเหล่านี้ถูกทำความสะอาด / hydrophilized ผ่านการรักษาด้วยวิธีการแก้ปัญหาปลาปิรันย่า (1: 1 H2SO4 / 30% H2O2) เป็นเวลา 20 นาทีแล้วล้างอย่างกว้างขวางกับน้ำกลั่นแห้งภายใต้การไหลของไนโตรเจนและแช่อยู่ใน 2% (V v /) วิธีการแก้ปัญหา APTES น้ำ สำหรับ 20 นาที จากนั้นพวกเขาถูกล้างเบา ๆ ด้วยน้ำกลั่นแห้งภายใต้กระแสไนโตรเจนและหายเป็นเวลา 20 นาทีที่ 120 ° C ตายฟังก์ชันที่ถูกเก็บไว้ในเดซิภายใต้สูญญากาศจนกว่าจะใช้ วงดนตรีของแอนติบอดีต่อ CRP และ D-dimer ถูกสร้างขึ้นบนพื้นผิวชิปโดยโซลูชั่นจำ 200 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในบัฟเฟอร์คาร์บอเนตค่า pH 9.2 แต่ละวงที่ถูกสร้างขึ้นโดยการใช้ 15 35 จุดที่ทับซ้อนกันกับสนาม 100 ไมโครเมตรโดยใช้เข็มแข็งด้วยปลายเส้นผ่าศูนย์กลาง 375- ไมครอน (SSP015, Arrayit คอร์ปอเรชั่นซันนีเวล, สหรัฐอเมริกา) จ้างนักสืบ microarray BioOdyssey CalligrapherTM (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ, Hercules แคลิฟอร์เนีย) ดังนั้นขนาดของแต่ละวงแอนติบอดี 1.7 3.7 mm2 กับวงระหว่างช่วงเวลาของ 1 มิลลิเมตร (เสริมรูป. S1A) ชิปที่ถูกเก็บไว้ในชั่วข้ามคืนภายใต้เงื่อนไขที่ควบคุมความชื้น (ความชื้นเฉลี่ย 75%) และจากนั้นพวกเขาถูกล้างด้วย Tris-HCl 10 มิลลิค่า pH 8.25, 9 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ (สารละลายซักผ้า) และแช่ในสารละลายปิดกั้น (50 mg / ml บีเอสเอใน 0.1 M NaHCO3 ค่า pH 8.5) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ RT สุดท้ายชิป biofunctionalized ถูกล้างด้วยสารละลายซักผ้าและน้ำกลั่นแห้งภายใต้การไหลของไนโตรเจนและใช้สำหรับการทดสอบ ชิป biofunctionalized ประกอบกับตัดเปิดช่อง fluidic จาก 200 มมหนาสองด้านกาว (Tesa Werk Offenburg GmbH ประเทศเยอรมนี) และข้าวสาร 2 มมปก PMMA หนานำไปใช้กับรูปแบบห้อง fluidic (รูป. 1A ) วัสดุ PMMA ปก (2- มมลูกแก้วหนา GS แผ่นหล่อที่มีคุณสมบัติทางแสงที่เหนือกว่า EVONIK อุตสาหกรรมเยอรมนี) ที่มีคุณภาพและความหนาได้รับเลือกอย่างระมัดระวังเพื่ออำนวยความสะดวกสำหรับการแหย่ของแสงผ่านสอบสวนสะท้อนภายนอก (ดูมาตรา 2.3) และเพื่อให้ ปิดผนึกที่เชื่อถือได้ ทางเข้าและทางออกของเหลวได้รับการฝังตัวยังอยู่ในฝาครอบด้านบน PMMA (Fig.1B) Biofunctionalized และบรรจุชิปจะกล่าวถึงต่อไปนี้จะเป็น biochips

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การ biofunctionalization ที่ออกซิไดซ์และเซ็นเซอร์พื้นผิวซิลิกอนเวเฟอร์ถูกหั่นสี่เหลี่ยมลูกเต๋าชิ้น 75 ( ข้อ 15 ) แน่นก่อนการกระตุ้นทางเคมีและ biofunctionalization . ตายเหล่านี้ทำความสะอาด / hydrophilized ผ่านการรักษากับปลาปิรันย่า โซลูชั่น ( 1 : 1 / 30 % กรดซัลฟิวริก H2O2 ) 20 นาทีจากนั้นล้างอย่างกว้างขวางกับน้ำกลั่นแห้งภายใต้การไหลของไนโตรเจนและแช่ใน 2% ( v / v ) โซลูชั่น aptes น้ำ 20 นาที จากนั้นก็ค่อยๆ ล้างด้วยน้ำกลั่นแห้งภายใต้ กระแสรักษาไนโตรเจน 20 นาทีที่ 120 ° C ที่มีหมู่ฟังก์ชันที่ตายถูกเก็บไว้ในเดซิกเคเตอร์ภายใต้สุญญากาศ จนใช้ วงดนตรีของแอนติบอดีต่อซีรีแอกทีฟโปรตีน d-dimer และถูกสร้างขึ้นบนชิปพื้นผิว โดยเฉพาะโซลูชั่น 200 μ g / ml ในบัฟเฟอร์ pH 9.2 คาร์บอเนต . แต่ละวงถูกสร้างขึ้นโดยการใช้ 15 35 จุดซ้อนกันด้วยระยะห่าง 100 μใช้เข็มแข็งกับ 375 - μ M ปลายเส้นผ่าศูนย์กลาง ( ssp015 , บริษัท , arrayit วอชิงตันสหรัฐอเมริกา ) การ bioodyssey calligraphertm microarray นักสืบ ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ , Hercules , CA ) ดังนั้น ขนาดของแต่ละวงมีแอนติบอดี 1.7 3.7 แน่นกับระหว่างวงดนตรีช่วง 1 มม. ( เพิ่มเติมรูปที่ s1a ) ชิปถูกเก็บไว้ค้างคืนภายใต้สภาพควบคุมความชื้น ( ความชื้นเฉลี่ยร้อยละ 75 ) และจากนั้นก็ล้างด้วยกรดไฮโดรคลอริก pH โดย– 10 มิลลิเมตร , 8.25 , 9 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ ( ล้างและแช่ในสารละลาย ) บล็อก ( 50 mg / ml สารละลาย BSA ใน 0.1 โมลาร์โซเดียมไบคาร์บอเนต , pH 8.5 ) 2 H ที่ RT . ในที่สุด biofunctionalized ชิปล้างกับล้างโซลูชั่นและน้ำกลั่น แห้งภายใต้การไหลของไนโตรเจน และใช้สำหรับการทดสอบ การ biofunctionalized ชิป ประกอบกับการเปิดช่องตัด fluidic จาก 200 มม. หนาสองด้านกาว ( เทซ่าเวิร์ก Offenburg GmbH , Germany ) และสาร 2-mm หนา PMMA ปกใช้ด้านบนเป็นรูปห้อง fluidic ( รูปที่ 1A ) PMMA ปกวัสดุ ( 2 - มม. หนาลูกแก้ว GS , หล่อแผ่น ด้วยคุณสมบัติของแสงที่เหนือกว่า evonik อุตสาหกรรม , เยอรมนี ) ที่มีคุณภาพและความหนาถูกเลือกอย่างระมัดระวังเพื่ออำนวยความสะดวกสำหรับการแสงสะท้อนผ่านโพรบภายนอก ( ดูมาตรา 2.3 ) และเพื่อให้มีการปิดผนึก ทางเข้าของของเหลวและเต้าเสียบได้ยังฝังใน PMMA ปกหน้า ( fig.1b ) biofunctionalized และแพคเกจชิปจะกล่าวถึงต่อจากนี้เป็น biochips