on and morphological analysis of ap

on and morphological analysis of apoptotic cells. DNA fragmentation assay was carried out as described previously.27) Briefly, HL-60(7.5 × 105/5 mL/6 cm dish) cells were treated with different concentrations of LTE for 24 h. The harvested
cells were suspended in 500 μL of Tail buffer (100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl at pH 8.0, 100 mM EDTA, and 1% SDS) plus 0.5 mg/mL proteinase K. After 3 h of incubation at 55 °C, DNA was precipitated by adding an equal volume of isopropanol. The dried DNA precipitate was dissolved in 50 μL of TE buffer (10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA, pH 8.0) containing
0.1 mg/mL RNase A, and further incubated at 37 °C for 30 min to degrade contaminating mRNA. After incubation,
loading buffer (6× LB Orange G, Wako, Nippon Gene, Tokyo, Japan) was added. The 100 bp DNA Ladder One molecular marker. DNA fragments were separated on 2% agarose gel and digitally imaged after staining with ethidium bromide. Cell morphology was observed under an optical Biozero microscop

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และการวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ apoptotic ดีเอ็นเอทดสอบได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ previously.27) สั้น ๆ , HL-60 (7.5 × 105/5 มิลลิลิตร / 6 ซม. จาน) เซลล์ได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของ LTE เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เก็บเกี่ยว
เซลล์ถูกระงับใน 500 ไมโครลิตรของ buffer หาง (100 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์ 50 มิลลิ Tris-HCl ที่ pH 8.0 100 มิลลิเมตร EDTA, และ 1% SDS) บวก 0.5 mg / ml โปรเคหลังจาก 3 ชั่วโมงของการบ่มที่ 55 ° C, ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยการเพิ่มปริมาตรที่เท่ากันของ isopropanol ตะกอนดีเอ็นเอแห้งถูกละลายใน 50 ไมโครลิตรของ TE บัฟเฟอร์ (10 mM Tris-HCl พีเอช 8.0, 1 mM EDTA, ค่า pH 8.0) ที่มี
0.1 mg / ml RNase A, และบ่มเพิ่มเติมได้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อลดการปนเปื้อน mRNA หลังจากบ่ม
โหลดบัฟเฟอร์ (6 × LB สีส้ม G, Wako นิปปอนยีนกรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ถูกบันทึก 100 bp ดีเอ็นเอบันไดหนึ่งเครื่องหมายโมเลกุล ดีเอ็นเอถูกแยกบน agarose gel ที่ 2% และถ่ายภาพแบบดิจิทัลหลังจากการย้อมสีด้วย ethidium bromide ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์พบว่าภายใต้แสง Biozero กล้องจุลทรรศน์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และการวิเคราะห์ทางสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อ . การใช้ดีเอ็นเอได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ . 27 ) สั้น ๆ , hl-60 ( 7.5 × 105 / 5 จานมิลลิลิตร / 6 ซม. ) เซลล์จะถูกกับระดับความเข้มข้นของ LTE สำหรับ 24 ชั่วโมง เก็บเกี่ยวเซลล์ที่ถูกระงับใน 500 μ L หางของบัฟเฟอร์ ( 100 mM NaCl , 50 มม. โดย HCl ที่ pH 8.0 , 100 mM EDTA และ 1% SDS ) บวก 0.5 mg / ml โปร K . หลังจาก 3 ชั่วโมง บ่มที่ 55 องศา C , ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยการเพิ่มปริมาณเท่ากันของไอโซโพรพานอล . ดีเอ็นเอตกตะกอนแห้งละลายใน 50 μ l TE บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ HCl , pH 8.0 , 1 mM EDTA pH 8.0 ) ที่มี0.1 มก. / มล. ต่อเลส และบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที เพื่อลดการปนเปื้อนของ . หลังจากระยะเวลาโหลดบัฟเฟอร์ ( 6 ×ปอนด์ส้มกรัม Wako , ญี่ปุ่นจีน , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ถูกเพิ่มเข้ามา 100 คู่เบสดีเอ็นเอบันไดหนึ่งโมเลกุลเครื่องหมาย ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่แยกจากกันใน 2% เจลและแบบดิจิทัลอื่นๆ หลังจากย้อมด้วยทิเดียมโบรไมด์ . รูปร่างของเซลล์พบว่าภายใต้แสง biozero microscop