This report has presented the devel

This report has presented the development of a His3-tagbinding
DNA molecule—the H3T aptamer. The biochemical analysis
revealed that (i) the binding/elution of the H3T aptamer/His3-
tag can be controlled by sodium ion concentration and (ii)
imidazole is not necessary to efficiently release the His3-tag
from the H3T aptamer. Further investigations confirmed that
the chromatography system developed here can be used for the
purification of recombinant proteins containing the His3-tag from
an E. coli total protein extract. Comparative analysis demonstrated
that the power of the H3T aptamer-based chromatography
was superior to IMAC when purification of His3-tagged proteins
was tested. Although the presented chromatography system is
free of the disadvantages of IMAC, the H3T aptamer’s molecular
weight, which is 18.7 kDa, as well as its probably complex
three-dimensional structure, may limit the power of this technique
in the case of particular proteins. When the His3-tag is
hidden inside the protein structure, it may make the purification
of the protein difficult. However, it is this very feature that
makes binding highly selective, and hence less likely that there
will be unwanted binding with histidine-rich host protein impurities
as would be the case with the divalent metal ions used in
IMAC

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รายงานนี้ได้นำเสนอการพัฒนาของ His3-tagbindingโมเลกุลดีเอ็นเอซึ่ง H3T aptamer การวิเคราะห์ทางชีวเคมีเปิดเผยว่า (i) ผูก/ชะ H3T aptamer/His3-แท็กสามารถควบคุมได้ โดยความเข้มข้นของไอออนโซเดียมและ (ii)อิมิดาโซลไม่จำเป็นต้องปล่อย His3-แท็กได้อย่างมีประสิทธิภาพจาก H3T aptamer สอบสวนเพิ่มเติมยืนยันว่าระบบ chromatography พัฒนาที่นี่สามารถใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ recombinant โปรตีนที่ประกอบด้วยแท็ก His3 จากสารสกัดจากโปรตีนทั้งหมด E. coli วิเคราะห์เปรียบเทียบที่แสดงให้เห็นที่พลังของ chromatography คะแนน aptamer H3Tแก้ไขดีกว่า IMAC เมื่อทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนแท็ก His3รับการทดสอบ ถึงแม้ว่าระบบนำเสนอ chromatographyฟรีข้อเสียของ IMAC, H3T aptamer ของโมเลกุลน้ำหนัก 18.7 kDa รวมทั้งอาจจะซับซ้อนโครงสร้างสามมิติ อาจจำกัดประสิทธิภาพของเทคนิคนี้ในกรณีเฉพาะโปรตีน เมื่อแท็ก His3 ที่อยู่ซ่อนอยู่ภายในโครงสร้างโปรตีน มันอาจทำให้การทำให้บริสุทธิ์โปรตีนที่ยาก อย่างไรก็ตาม มันจะแสดงมากที่ทำให้ผูกอย่างสูงที่เลือก และดังนั้นจึงมีโอกาสน้อยที่มีจะได้ไม่ต้องผูกกับโฮสต์ histidine ที่อุดมไปด้วยโปรตีนสิ่งสกปรกเป็นจะเป็นกรณีที่ มีไอออนโลหะ divalent ใช้ในIMAC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รายงานฉบับนี้ได้นำเสนอการพัฒนาของ His3-tagbinding
โมเลกุลดีเอ็นเอที่ aptamer H3T การวิเคราะห์ทางชีวเคมี
เปิดเผยว่า (i) ที่มีผลผูกพัน / ชะของ H3T aptamer His3- / การ
แท็กสามารถควบคุมได้โดยความเข้มข้นของโซเดียมไอออนและ (ii)
imidazole ไม่จำเป็นต้องมีประสิทธิภาพปล่อย His3 แท็ก
จาก aptamer H3T สืบสวนต่อไปยืนยันว่า
ระบบที่พัฒนาโครมาโตที่นี่สามารถนำมาใช้สำหรับ
การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนที่มี His3 แท็กจาก
อีโคไลสารสกัดจากโปรตีนรวม การวิเคราะห์เปรียบเทียบแสดงให้เห็น
ว่าอำนาจของโครมาโต H3T aptamer ตาม
ดีกว่า IMAC เมื่อการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน His3 ติดแท็ก
ได้รับการทดสอบ แม้ว่าระบบโครมานำเสนอเป็น
อิสระจากข้อเสียของ IMAC ที่โมเลกุล aptamer H3T ของ
น้ำหนักซึ่งเป็น 18.7 กิโลดาลตันตลอดจนอาจจะซับซ้อน
โครงสร้างสามมิติอาจ จำกัด อำนาจของเทคนิคนี้
ในกรณีของโปรตีนโดยเฉพาะอย่างยิ่ง เมื่อ His3 แท็กจะถูก
ซ่อนอยู่ภายในโครงสร้างโปรตีนก็อาจทำให้บริสุทธิ์
ของโปรตีนที่ยาก แต่ก็เป็นคุณสมบัตินี้มากที่
ทำให้มีผลผูกพันหัวกะทิและด้วยเหตุนี้โอกาสน้อยที่ว่ามี
จะเป็นที่ไม่พึงประสงค์มีผลผูกพันกับฮิสติดีนที่อุดมไปด้วยโปรตีนสิ่งสกปรกโฮสต์
เป็นจะเป็นกรณีที่มีไอออนประจุคู่โลหะที่ใช้ใน
IMAC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รายงานนี้ได้นำเสนอการพัฒนา his3 tagbindingดีเอ็นเอโมเลกุล h3t aptamer . การวิเคราะห์ทางชีวเคมีพบว่า ( 1 ) ใช้ผูก / ของ h3t aptamer / his3 -แท็กสามารถควบคุมความเข้มข้นของโซเดียมไอออน ( II ) และอิมิดาโซล ไม่จําเป็นต้องมีประสิทธิภาพปล่อย his3 แท็กจาก h3t aptamer . การตรวจสอบต่อไป ยืนยันว่าระบบเครื่องที่สร้างขึ้นนี้สามารถใช้สำหรับผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่มีแท็ก his3 จากเป็น E . coli รวมโปรตีนสกัดเข้มข้น การวิเคราะห์เปรียบเทียบแสดงว่าพลังของ h3t aptamer โดยโครมาโตกราฟีคือเหนือกว่า iMac เมื่อฟอก his3 แท็กโปรตีนคือการทดสอบ แม้ว่าเสนอระบบโครมาโตกราฟีฟรีของข้อเสียของ iMac , h3t aptamer ของโมเลกุลน้ำหนักซึ่งเป็น 18.7 kDa ตลอดจนอาจจะซับซ้อนโครงสร้างสามมิติ อาจจะ จำกัด อำนาจของเทคนิคนี้ในกรณีของโปรตีนโดยเฉพาะ เมื่อ his3 แท็กซ่อนอยู่ภายในโครงสร้างโปรตีน อาจทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนที่ยาก อย่างไรก็ตาม , มันเป็นคุณสมบัตินี้มากว่าทำให้การเลือกสูง จึงมีโอกาสน้อยที่มีจะไม่ผูกกับโปรตีนฮิสติดีนรวยยังปลอมเป็นจะเป็นกรณีที่มีขนาดไอออนโลหะที่ใช้ในiMac