500 g/mL M. luteus to achieve 1/2 m

500 g/mL M. luteus to achieve 1/2 max velocity. Thus, the engineered variants retained high levels of inherent activity, although they all required relatively high bacterial concen- trations to achieve maximum reaction velocity.
In the presence of Ivyc, the enhanced performance of the engineered variants was striking. Ivyc is known to inhibit C- type lysozymes via a slow-tight binding mechanism, and its Ki for HEWL has been reported previously as 1 nM.22 We observed similar potency toward both HEWL (Ki = 10 nM) and hLYZ (Ki = 17 nM). Compared to hLYZ, variant 1D exhibited a 15-fold reduction in susceptibility to Ivyc, and 1F was an even more e ective escape variant with a 77-fold reduction in Ki (Table 1). Variant 2A retained 60% of its inherent activity at 2000 nM Ivyc, and the enzyme s resistance to Ivyc inhibition was so great that the slow-tight binding model could not be t to the data (i.e., a Ki could not be calculated). Thus, all three engineered enzymes retained high levels of lytic activity at Ivyc concentrations far beyond those that completely inactivated wild type hLYZ.
As a corollary to our studies, we sought to evaluate the performance of our lysozymes with an Ivyc homologue from the Gram-negative pathogen P. aeruginosa. This homologue, Ivyp, has been shown to be a reasonably potent HEWL inhibitor.26 Our own analysis showed that, similar to the literature, Ivyp inhibited HEWL with a Ki = 10 nM. We anticipated that Ivyp would likewise prove an e ective inhibitor of hLYZ, but surprisingly it had a 24-fold higher Ki value compared to Ivyc (Table 1). Prior analysis demonstrated that although the Ivyc homodimer and Ivyp monomer share only 30% sequence identity, their tertiary structures are strikingly similar.26 Co-crystal structures of both inhibitors with HEWL revealed that each manifests a similar number of intermolecular salt bridges and hydrogen bonds, but each complex leverages interactions between di erent HEWL residues. In fact, only three strongly interacting HEWL residues are strictly conserved between the Ivyc and Ivyp complexes.26 Thus, while the inhibitory mechanisms of Ivyc and Ivyp are strongly conserved (i.e., insertion of the CKPHDC loop into the lysozyme active site), di erent Ivy inhibitors appear to leverage distinct molecular determinants when binding to C-type lysozymes. For example, it appears that Ivyc determinants of HEWL and hLYZ inhibition have considerable overlap, leading to similar inhibitory activity. In contrast, the Ivyp determinants for the same two lysozymes must be substantially di erent, as they exhibit a nearly 50-fold di erence in Ivyp Ki values.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

luteus ม. 500 g/mL เพื่อให้ได้ความเร็วสูงสุด 1/2 ดังนั้น ตัวแปรออกแบบรักษาระดับสูงของกิจกรรมโดยธรรมชาติ แม้ว่าพวกเขาทั้งหมดต้อง trations แบคทีเรีย concen ค่อนข้างสูงเพื่อให้ได้ความเร็วของปฏิกิริยาสูงสุดเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานของตัวแปรออกแบบโดดเด่นในต่อหน้าของ Ivyc Ivyc รู้จักยับยั้ง lysozymes ประเภท C ผ่านกลไกผูกช้าแน่น และของ Ki สำหรับ HEWL มีการรายงานก่อนหน้านี้เป็น 1 nM.22 เราสังเกตรู้จักคล้ายไปทาง HEWL ทั้งสอง (Ki = 10 nM) และ hLYZ (Ki = 17 nM) เมื่อเทียบกับ hLYZ ตัวแปร D ที่ 1 จัดแสดงลด 15-fold ในง่าย Ivyc และ 1F ยิ่งอี ective หนีแปรลด 77-fold ในกี่ (ตาราง 1) นั้น 2A แปรเก็บ 60% ของของกิจกรรมโดยธรรมชาติที่ 2000 nM Ivyc และทนต่อ s เอนไซม์ที่ยับยั้ง Ivyc ดีว่า แบบผูกช้าแน่นไม่สามารถ t ข้อมูล (เช่น กี่ไม่สามารถคำนวณ) ได้ ดังนั้น ทั้งหมดสามออกแบบเอนไซม์สะสมระดับสูง lytic กิจกรรมที่ความเข้มข้น Ivyc ไกลเกินที่ยกเลิก hLYZ ชนิดป่าสมบูรณ์เป็น corollary การศึกษาของเรา เราพยายามที่จะประเมินประสิทธิภาพของ lysozymes ของเราด้วยการ homologue Ivyc จากการศึกษาแบคทีเรียแกรมลบ P. aeruginosa นี้ homologue, Ivyp ได้รับการแสดงเป็น inhibitor.26 HEWL สมมีศักยภาพการวิเคราะห์ของเราเองพบว่า คล้ายกับวรรณคดี Ivyp ห้าม HEWL มีกี่ตัว = 10 nM เราคาดว่า Ivyp จะพิสูจน์ผลการ ective อีของ hLYZ ในทำนองเดียวกัน แต่จู่ ๆ มันมี 24-fold กี่ค่าเปรียบเทียบกับ Ivyc (ตารางที่ 1) วิเคราะห์ก่อนแสดงให้เห็นว่าแม้ว่า Ivyc homodimer และน้ำยา Ivyp ใช้เพียง 30% ลำดับรหัสประจำตัว โครงสร้างระดับตติยภูมิของพวกเขากว่าโครงสร้างผลึกร่วม similar.26 ของทั้ง inhibitors มี HEWL เปิดเผยว่า แต่ละปรากฏจำนวน intermolecular สะพานเกลือและพันธบัตรไฮโดรเจนคล้ายกัน แต่ซับซ้อนแต่ละใช้ระหว่าง di erent HEWL ตก ในความเป็นจริง เพียงสามขอโต้ตอบ HEWL ตกอยู่เคร่งครัดอยู่ระหว่าง complexes.26 Ivyc และ Ivyp ดังนี้ ในขณะที่ลิปกลอสไขกลไกของ Ivyc และ Ivyp จะขออาศัย (เช่น แทรกวน CKPHDC เข้าใช้งานไซต์ lysozyme), erent ดิไอวี่ inhibitors ปรากฏกับดีเทอร์มิแนนต์โมเลกุลแตกต่างกันเมื่อผูกกับ lysozymes ประเภท C ตัวอย่าง มันปรากฏว่า ดีเทอร์มิแนนต์ Ivyc ของ HEWL และ hLYZ ยับยั้งมีทับซ้อนมาก นำไปสู่กิจกรรมคล้ายลิปกลอสไข ในทางตรงกันข้าม ดีเทอร์มิแนนต์ Ivyp สำหรับ lysozymes สองเดียวต้องเป็นมากดิ erent พวกเขาแสดง erence ดิเกือบ 50-fold Ivyp Ki ค่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

500 กรัม / มิลลิลิตร M. luteus เพื่อให้บรรลุความเร็วสูงสุด 1/2 ดังนั้นสายพันธุ์วิศวกรรมสะสมในระดับสูงของกิจกรรมโดยธรรมชาติแม้ว่าพวกเขาทั้งหมดที่จำเป็นค่อนข้างสูงเข้มข้นของแบคทีเรียเพื่อให้บรรลุความเร็วปฏิกิริยาสูงสุด.
ในการปรากฏตัวของ Ivyc, ประสิทธิภาพที่เพิ่มขึ้นของตัวแปรการออกแบบได้รับการที่โดดเด่น Ivyc เป็นที่รู้จักกันในการยับยั้งชนิด C- lysozymes ผ่านทางกลไกที่มีผลผูกพันช้าแน่นและ Ki สำหรับ HEWL ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้เป็น 1 nM.22 เราสังเกตเห็นความแรงของที่คล้ายกันที่มีต่อทั้ง HEWL (Ki = 10 นาโนเมตร) และ hLYZ (Ki = 17 นาโนเมตร) เมื่อเทียบกับ hLYZ ตัวแปร 1D แสดง 15 เท่าในการลดความไวต่อการ Ivyc และ 1F เป็นตัวแปรที่หลบหนีอีมากยิ่งขึ้น ective กับการลดลง 77 เท่าใน Ki (ตารางที่ 1) ตัวแปร 2A เก็บไว้ 60% ของกิจกรรมโดยธรรมชาติของมันที่ 2000 นาโนเมตร Ivyc และความต้านทานเอนไซม์นั้นจะยับยั้ง Ivyc เป็นอย่างดีว่ารูปแบบที่มีผลผูกพันช้าแน่นไม่สามารถทีข้อมูล (เช่น Ki ไม่สามารถคำนวณ) ดังนั้นทั้งสามเอนไซม์วิศวกรรมสะสมในระดับสูงของกิจกรรม lytic ที่ความเข้มข้น Ivyc ไกลเกินกว่าที่ชนิดยกเลิกสมบูรณ์ป่า hLYZ.
ในฐานะที่เป็นควันหลงจากการศึกษาของเราเราพยายามที่จะประเมินผลการทำงานของ lysozymes ของเราที่มีความคล้ายคลึงกัน Ivyc จากแกรมลบ เชื้อ P. aeruginosa ที่คล้ายคลึงกันนี้ Ivyp ได้รับการแสดงให้เห็นว่ามีศักยภาพพอสมควร HEWL inhibitor.26 การวิเคราะห์ของเราเองพบว่าคล้ายกับวรรณคดี Ivyp ยับยั้ง HEWL กับ Ki = 10 นาโนเมตร เราคาดว่า Ivyp เช่นเดียวกันจะพิสูจน์ยับยั้งอี ective ของ hLYZ แต่น่าแปลกใจที่มันได้ 24 เท่าค่า Ki สูงขึ้นเมื่อเทียบกับ Ivyc (ตารางที่ 1) วิเคราะห์ก่อนแสดงให้เห็นว่าถึงแม้จะ homodimer Ivyc และส่วนแบ่งโมโนเมอร์ Ivyp เพียง 30% ลำดับบัตรโครงสร้างในระดับอุดมศึกษาของพวกเขาเป็นอย่างยอดเยี่ยม similar.26 โครงสร้างร่วมผลึกของสารยับยั้งทั้ง HEWL เปิดเผยว่าแต่ละปรากฏจำนวนใกล้เคียงกันของสะพานเกลือและพันธบัตรระหว่างโมเลกุลไฮโดรเจน แต่แต่ละที่ซับซ้อนใช้ประโยชน์จากการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างดิ erent ตกค้าง HEWL ในความเป็นจริงเพียงสามอย่างยิ่งการมีปฏิสัมพันธ์ตกค้าง HEWL ป่าสงวนอย่างเคร่งครัดระหว่าง Ivyc และ Ivyp complexes.26 ดังนั้นในขณะที่กลไกการยับยั้งของ Ivyc และ Ivyp มีการอนุรักษ์อย่างยิ่ง (เช่นการใส่ห่วง CKPHDC เข้าไปใช้งานเว็บไซต์ lysozyme), ดิ erent ยับยั้ง Ivy ปรากฏการใช้ประโยชน์จากปัจจัยโมเลกุลที่แตกต่างเมื่อผูกพันกับ lysozymes ประเภท C ยกตัวอย่างเช่นมันปรากฏว่าปัจจัย Ivyc ของ HEWL และยับยั้ง hLYZ มีการทับซ้อนกันมากนำไปสู่การยับยั้งที่คล้ายกัน ในทางตรงกันข้ามสำหรับปัจจัย Ivyp เดียวกันสอง lysozymes จะต้องเป็นอย่างมากดิ erent เช่นที่พวกเขาแสดงเกือบ 50 เท่าในการตั้งค่ารหัส Ki Ivyp

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

500 กรัม / มล. ม. luteus บรรลุความเร็วสูงสุด 1 / 2 . ดังนั้น การสร้างสายพันธุ์ระดับสูงของกิจกรรมซ่อนเร้น ถึงแม้ว่าพวกเขาจะต้องค่อนข้างสูงแบคทีเรีย concen - trations บรรลุความเร็วปฏิกิริยาสูงสุด
ต่อหน้า ivyc , ปรับปรุงประสิทธิภาพของตัวแปรนั้นโดดเด่น ivyc เป็นที่รู้จักกันเพื่อยับยั้ง C - lysozymes ประเภทผ่านช้าแน่นผูกกลไกและคิของ hewl ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ที่ 1 nm.22 เราสังเกตความแรงกันต่อทั้ง hewl ( Ki = 10 nm ) และ hlyz ( Ki = 17 nm ) เมื่อเทียบกับ hlyz ตัวแปร , 1D มี 15 เท่า ลดโอกาสเสี่ยงต่อการ ivyc และชั้น 1 เป็นมากขึ้นและ ective หนีแตกต่างกับ 77 พับลดกิ ( ตารางที่ 1 ) ตัวแปร 2A ไว้ 60% ของกิจกรรมอยู่ที่ ivyc 2000 nm ,และความต้านทานต่อการยับยั้งเอนไซม์ของ ivyc มากว่าช้าแน่นผูกแบบไม่อาจจะต้องการข้อมูล ( I , กิไม่อาจจะคำนวณ ) ดังนั้น ทั้งหมดสามระดับของกิจกรรมการสร้างเอนไซม์ไลติค ivyc ความเข้มข้นที่ไกลเกินกว่าที่สมบูรณ์ซึ่งป่าชนิด hlyz .
เป็นข้อพิสูจน์การศึกษาของเราเราพยายามที่จะประเมินประสิทธิภาพของ lysozymes ของเรากับผิว ivyc จากเชื้อกรัมลบ P . aeruginosa นี้ผิว ivyp , ได้รับการแสดงที่จะเป็นเหตุร้ายแรง hewl inhibitor.26 การวิเคราะห์ของเราแสดงให้เห็นว่าคล้ายคลึงกับวรรณกรรม ivyp ยับยั้ง hewl กับคิ = 10 นาโนเมตร เราคาดการณ์ว่า ivyp ก็เช่นเดียวกันยับยั้งของ hlyz ective พิสูจน์ e ,แต่จู่ ๆมี 24 เท่าสูงกว่าคิค่าเมื่อเทียบกับ ivyc ( ตารางที่ 1 ) การวิเคราะห์ก่อนแสดงให้เห็นว่าแม้ว่า ivyc โฮโมไดเมอร์ ivyp มอนอเมอร์และหุ้นเพียง 30% ลำดับเอกลักษณ์โครงสร้างตติยภูมิอา similar.26 Co โครงสร้างผลึกของทั้งสองสารยับยั้งกับ hewl เปิดเผยว่า แต่ละรายจำนวนที่คล้ายกันของสะพานเกลือ์และไฮโดรเจนพันธบัตร