2.6. a-Glucosidase inhibitory assay

2.6. a-Glucosidase inhibitory assay
This assay was carried out to investigate the in vitro
inhibitory activity of EESS on sucrase and maltase (aglucosidases).
Although a-glucosidase isolated from yeast is
extensively used as a screening material for a-glucosidase
inhibitors, the results did not always agree with those obtained
in mammals. Therefore, we used a small intestine
homogenate of a mouse as a-glucosidase solution because
we speculated that it would better reflect the in vivo state.
The inhibitory effect was measured by slightly modifying
the method used by “Dahlqvist” [24]. After 20 hours of
fasting, part of the animals’ small intestine immediately
below the duodenum and immediately above the cecum
was cut, rinsed with ice-cold saline, and homogenized with
12 mL of maleate buffer (100 mM, pH 6). The homogenate
was used as a-glucosidase solution. The assay mixture
consisted of 100 mM maleate buffer (pH 6), 2% (w/v) of
each sugar substrate solution (100 ml), and the sample
extract (20e640 mg/mL). The mixture was preincubated for
5 minutes at 37C, and the reaction was initiated by adding
crude a-glucosidase solution (50 ml), followed by incubating
the mixture again for 10 minutes at 37C. The amount of
glucose released in this reaction was determined by
a commercially available glucose estimation kit (Span
Diagnostic Ltd., Mumbai, India). The rate of carbohydrate
decomposition was calculated as a percentage ratio to the
amount of glucose obtained when the carbohydrate was
completely digested. The rate of prevention was calculated
by the following formula:
Inhibition rate (%)Z[{(amount of glucose produced by the
positive control) e (amount of glucose produced by the
addition of EESS) e (glucose production value in blank)/
(amount of glucose produced by the positive control)}]100.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การทดสอบลิปกลอสไขได้ Glucosidaseทดสอบนี้ได้รับการดำเนินการตรวจสอบการเพาะเลี้ยงลิปกลอสไขกิจกรรมของ EESS sucrase และ maltase (aglucosidases)แม้ว่าเป็น glucosidase ที่แยกต่างหากจาก ยีสต์เป็นใช้เป็นวัสดุคัดกรองสำหรับเป็น glucosidase อย่างกว้างขวางinhibitors ผลลัพธ์ได้ไม่เสมอเห็นด้วยกับผู้รับในการเลี้ยงลูกด้วยนม ดังนั้น เราใช้ลำไส้เล็กhomogenate ของเมาส์เป็นโซลูชันที่ glucosidase เนื่องจากเราคาดว่า มันจะดีขึ้นถึงสถานะในสัตว์ทดลองลิปกลอสไขผลถูกวัด โดยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยวิธีการใช้ "Dahlqvist" [24] หลังจาก 20 ชั่วโมงถือศีลอด ส่วนของลำไส้เล็กของสัตว์ทันทีด้าน ล่าง duodenum และทันที เหนือ cecumถูกตัด rinsed ด้วยน้ำเกลือฉ่ำ และ homogenized เป็นกลุ่มด้วยmL 12 maleate บัฟเฟอร์ (100 มม. pH 6) Homogenateใช้เป็นโซลูชันที่ glucosidase วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 100 มม. maleate บัฟเฟอร์ (pH 6), 2% (w/v)แก้ปัญหาแต่ละพื้นผิวน้ำตาล (100 มล.), และตัวอย่างแยก (20e640 mg/mL) ส่วนผสมคือ preincubated สำหรับ5 นาทีที่ 37 C และปฏิกิริยาเป็นจุดเริ่มต้น โดยการเพิ่มดิบที่-glucosidase โซลูชั่น (50 มล.), ตาม ด้วย incubatingส่วนผสมอีกครั้งในนาทีที่ 37 เซลเซียส จำนวนกลูโคสออกในปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดโดยชุดใช้ได้ในเชิงพาณิชย์กลูโคสประมาณ (ระยะการวินิจฉัยจำกัด มุมไบ อินเดีย) อัตราของคาร์โบไฮเดรตคำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์อัตราส่วนการแยกส่วนประกอบจำนวนรับเมื่อคาร์โบไฮเดรตมีน้ำตาลกลูโคสย่อยทั้งหมด คำนวณอัตราการป้องกันโดยใช้สูตรต่อไปนี้:อัตราการยับยั้ง (%) Z [{ (จำนวนกลูโคสผลิตโดยการอีควบคุมบวก) (จำนวนกลูโคสผลิตโดยการแห่ง EESS) อี (กลูโคสผลิตค่าว่างเปล่า) /(จำนวนกลูโคสผลิต โดยควบคุมบวก) }] 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 -glucosidase ทดสอบการยับยั้ง
การทดสอบนี้ได้รับการดำเนินการในการตรวจสอบในหลอดทดลอง
ยับยั้งของ EESS ใน sucrase และ maltase (aglucosidases).
แม้ว่า-glucosidase ที่แยกได้จากยีสต์
ใช้อย่างกว้างขวางเป็นวัสดุสำหรับการตรวจคัดกรอง-glucosidase
ยับยั้งผลที่ได้ ไม่เคยเห็นด้วยกับผู้ที่ได้รับ
ในการเลี้ยงลูกด้วยนม ดังนั้นเราจึงใช้ลำไส้เล็ก
homogenate เมาส์เป็นวิธีแก้ปัญหา-glucosidase เพราะ
เราคาดการณ์ว่าจะดีขึ้นสะท้อนให้เห็นถึงรัฐในร่างกาย.
ผลยับยั้งโดยวัดจากการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
วิธีการที่ใช้โดย "Dahlqvist" [24] หลังจาก 20 ชั่วโมงของการ
อดอาหารเป็นส่วนหนึ่งของลำไส้เล็กสัตว์ทันที
ด้านล่างลำไส้เล็กส่วนต้นและทันทีที่ลำไส้ใหญ่ส่วนต้นข้างต้น
ถูกตัดล้างด้วยน้ำเกลือเย็นและปั่นกับ
12 มิลลิลิตรของ buffer maleate (100 มิลลิพีเอช 6) homogenate
ถูกใช้เป็นวิธีการแก้ปัญหา-glucosidase ส่วนผสมทดสอบ
ประกอบด้วย 100 มิลลิ maleate บัฟเฟอร์ (pH 6), 2% (w / v) ของ
แต่ละวิธีการแก้ปัญหาน้ำตาลพื้นผิว (100 มล.) และตัวอย่าง
สารสกัด (20e640 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ส่วนผสมที่ถูก preincubated สำหรับ
5 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียสและเกิดปฏิกิริยาได้ริเริ่มขึ้นโดยการเพิ่ม
วิธีการแก้ปัญหาน้ำมันดิบ-glucosidase (50 มล.) ตามด้วยการบ่ม
ส่วนผสมอีกครั้งเป็นเวลา 10 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส ปริมาณของ
น้ำตาลกลูโคสการปล่อยตัวในปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดโดย
ชุดการประมาณค่าระดับน้ำตาลในเชิงพาณิชย์ (ช่วง
วินิจฉัย จำกัด มุมไบประเทศอินเดีย) อัตราคาร์โบไฮเดรต
สลายตัวที่คำนวณเป็นอัตราส่วนร้อยละของ
ปริมาณของน้ำตาลกลูโคสคาร์โบไฮเดรตได้รับเมื่อถูก
ย่อยสลายอย่างสมบูรณ์ อัตราของการป้องกันที่คำนวณได้
จากสูตรดังต่อไปนี้:
อัตราการยับยั้ง (%) Z [{(จำนวนของน้ำตาลกลูโคสที่ผลิตโดย
ควบคุมบวก) จ (จำนวนของน้ำตาลกลูโคสที่ผลิตโดย
นอกเหนือจาก EESS) จ (มูลค่าการผลิตกลูโคสในว่างเปล่า) /
(จำนวนของน้ำตาลกลูโคสที่ผลิตโดยการควบคุมบวก)}] 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 a-glucosidase ยับยั้ง (
) นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาประสิทธิภาพในการยับยั้งกิจกรรมของ eess
บนซูเครส และมอลเตส ( aglucosidases ) .
ถึงแม้ว่า a-glucosidase สกัดจากยีสต์
อย่างกว้างขวางใช้เป็นวัสดุสำหรับการคัดกรอง a-glucosidase
inhibitors ผลลัพธ์ไม่ได้มักจะเห็นด้วยกับการวิเคราะห์
ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังนั้นเราจึงใช้
ลําไส้เล็กอนของเมาส์เป็น a-glucosidase โซลูชั่นเพราะ
เราสันนิษฐานว่ามันควรจะสะท้อนให้เห็นถึงฤทธิ์ในการยับยั้งต่อรัฐ

วัดโดยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยใช้วิธี " dahlqvist " [ 24 ] หลังจาก 20 ชั่วโมง
อดอาหาร ส่วนหนึ่งของสัตว์ ลำไส้เล็ก ลำไส้เล็ก และทันทีด้านล่างทันที

ข้างบน ลำไส้ใหญ่ส่วนต้นถูกตัด , ล้างด้วยน้ำเกลือ น้ำแข็งเย็นและการบดกับ
12 มิลลิลิตร มาลีเบัฟเฟอร์ ( 100 มม. , pH 6 ) การแยก a-glucosidase
ถูกใช้เป็นวิธีการแก้ปัญหา วิเคราะห์ส่วนผสม
ประกอบด้วยบัฟเฟอร์มาลีเ 100 มิลลิเมตร ( pH 6 ) , 2% ( w / v )
แต่ละพื้นผิว โซลูชั่น น้ำตาล ( 100 มล. ) และตัวอย่าง
สกัด ( 20e640 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ส่วนผสม preincubated สำหรับ
5 นาทีที่ 37  C และปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยโซลูชั่นการเพิ่ม
a-glucosidase ดิบ ( 50 ml )ตามด้วยการแช่
ผสมอีก 10 นาทีที่ 37  C ปริมาณ
กลูโคสออกในปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดโดยการใช้ในเชิงพาณิชย์กลูโคสประมาณ Kit ( ช่วง
วินิจฉัยจำกัด , มุมไบ , อินเดีย ) อัตราการสลายคาร์โบไฮเดรต
คำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์ อัตราส่วนของปริมาณกลูโคสที่ได้

อย่างสมบูรณ์เมื่อคาร์โบไฮเดรตถูกย่อยอัตราการป้องกันได้คำนวณตามสูตรต่อไปนี้ :

การยับยั้ง ( % ) Z [ { ( ปริมาณกลูโคสที่ผลิตโดย
ควบคุมบวก ) E ( ปริมาณกลูโคสที่ผลิตโดย
เพิ่ม eess ) E ( ค่าการผลิตกลูโคสในที่ว่างเปล่า ) /
( ปริมาณกลูโคสที่ผลิตโดยการควบคุมของบวก ) } ]  100