When comparing the amount of protei

When comparing the amount of protein from samples run in different lanes within the same
gel or between gels, it is very important that all the lanes have been loaded with the same total
amount of protein. A two-fold increase in the expression level of a specific protein in one lane
will be completely masked if a comparative lane contains twice the amount of total protein (or
will even appear to be reduced in expression if the comparitor lane contains more than twice
the amount).
Several spectrophotometric methods are routinely used to determine the concentration of
protein in a solution (3). These include measurement of the intrinsic ultraviolet (UV) absorbance
of the protein as well as methods based on a protein-dependent color change, such as the
classic, copper-based Lowry assay (4), the Smith copper/bicinchoninic assay (BCA) (5) and the
Bradford dye assay (6). Although widely used, none of the these procedures are particularly
convenient.
UV absorbance, for example, requires access to a pure protein of a known extinction
coefficient, in a solution free of interfering (UV absorbing) substances. The approximate
concentration of a protein in solution (assuming the use of a cuvette with a path length of 1 cm)
can be estimated by using either of the following equations;

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เมื่อเปรียบเทียบปริมาณโปรตีนจากตัวอย่างที่ใช้ในถนนหนทางต่าง ๆ ภายในเหมือนกันเจลอาบน้ำ หรือระหว่างเจ จำเป็นอย่างยิ่งที่ได้มีการโหลดถนนหนทางทั้งหมดรวมกันจำนวนโปรตีน สองพับเพิ่มขึ้นในระดับโปรตีนเฉพาะในเลนหนึ่งนิพจน์จะทั้งหมดสวมหน้ากากถ้าเลนเปรียบเทียบประกอบด้วยสองจำนวนโปรตีนรวม (หรือแม้จะปรากฏจะลดลงในนิพจน์เลน comparitor ประกอบด้วยมากกว่าสองครั้งยอด)หลายวิธี spectrophotometric เป็นประจำจะใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในการแก้ปัญหา (3) ได้แก่การวัด absorbance (UV) รังสีอัลตราไวโอเลต intrinsicโปรตีนรวมทั้งวิธีใช้การเปลี่ยนสีขึ้นอยู่กับโปรตีน เช่นการคลาสสิก ใช้ทองแดง Lowry วิเคราะห์ (4) การวิเคราะห์ทอง แดง/bicinchoninic สมิธ (BCA) (5) และวิเคราะห์การย้อมแบรดฟอร์ด (6) แม้ว่าใช้ การเหล่านี้ไม่มีขั้นตอนโดยเฉพาะอย่างยิ่งสะดวกUV absorbance ตัวอย่าง ต้องถึงโปรตีนบริสุทธิ์สูญพันธุ์ที่รู้จักกันสัมประสิทธิ์ ในโซลูชั่นฟรีรบกวนสาร (UV ดูดซับ) โดยประมาณการความเข้มข้นของโปรตีนในโซลูชัน (สมมติว่าใช้ cuvette ที่ มีความยาว 1 ซ.ม.เส้นทาง)สามารถประเมินได้ โดยใช้สมการต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เมื่อเปรียบเทียบปริมาณของโปรตีนจากตัวอย่างทำงานในช่องทางที่แตกต่างกันภายในเดียวกัน
เจลหรือระหว่างเจลมันเป็นสิ่งสำคัญมากที่เลนทั้งหมดได้รับการเต็มไปด้วยทั้งหมดเดียวกัน
ปริมาณของโปรตีน เพิ่มขึ้นสองเท่าในระดับการแสดงออกของโปรตีนที่เฉพาะเจาะจงในหนึ่งช่องทางที่
จะได้รับการสวมหน้ากากสมบูรณ์หากเปรียบเทียบเลนมีสองเท่าของโปรตีนทั้งหมด (หรือ
แม้กระทั่งจะปรากฏขึ้นที่จะลดลงในการแสดงออกถ้าเลนและ comparator มีมากขึ้นกว่าสองเท่า
จำนวน).
วิธีสเปกหลายใช้เป็นประจำเพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของ
โปรตีนในสารละลาย (3) เหล่านี้รวมถึงการวัดรังสีอัลตราไวโอเลตที่แท้จริง (UV) การดูดกลืน
โปรตีนเช่นเดียวกับวิธีขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงของสีขึ้นอยู่กับโปรตีนเช่น
คลาสสิก, ทองแดงตามการทดสอบโลว์รีย์ (4), ทองแดงสมิ ธ / ทดสอบ bicinchoninic (BCA) (5) และ
การทดสอบสีย้อม Bradford (6) แม้ว่าจะใช้กันอย่างแพร่หลายไม่มีขั้นตอนเหล่านี้โดยเฉพาะอย่างยิ่งมีความ
สะดวกสบาย.
การดูดกลืนรังสียูวีเช่นต้องเข้าถึงโปรตีนบริสุทธิ์ของการสูญเสียที่รู้จักกัน
ค่าสัมประสิทธิ์ในการแก้ปัญหาฟรีรบกวน (UV ดูดซับ) สาร ประมาณ
ความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย (สมมติว่าใช้ cuvette ที่มีความยาวเส้นทาง 1 ซม)
สามารถประมาณโดยใช้สมการดังต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เมื่อเปรียบเทียบปริมาณโปรตีนจากตัวอย่างวิ่งในเลนต่างๆ ในเจลเหมือนกัน
หรือระหว่างเจล , มันเป็นสิ่งสำคัญมากที่เลนทั้งหมดจะถูกโหลด ด้วยยอดรวม
เดียวกันของโปรตีน เป็นสองเท่าเพิ่มการแสดงออกของโปรตีนที่เฉพาะเจาะจงในระดับหนึ่งเลน
จะปกปิดถ้าเลนเปรียบเทียบมีสองเท่าของโปรตีนรวม ( หรือ
จะปรากฏขึ้นที่จะลดลงในการแสดงออกถ้า comparitor เลนมีมากกว่าสองครั้ง
จํานวน )
) วิธีการตรวจที่ใช้ในการตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย
( 3 ) เหล่านี้รวมถึงการวัดรังสีอัลตราไวโอเลต ( UV ) ภายในค่า
ของโปรตีนรวมทั้งวิธีการขึ้นอยู่กับโปรตีนขึ้นอยู่กับสีเปลี่ยนไป เช่น
คลาสสิกทองแดงโดยวิธีโลว์รีย์ ( 4 ) , Smith ทองแดง / bicinchoninic assay ( BCA ) ( 5 ) และ ( 6 ) 3
แบรดฟอร์ดย้อม . แม้ว่าการใช้กันอย่างแพร่หลาย ไม่มีของเหล่านี้ขั้นตอนโดยเฉพาะอย่างยิ่ง

ค่าการดูดกลืนแสงยูวี สะดวก ตัวอย่าง ต้องการเข้าถึงโปรตีนบริสุทธิ์ที่เรียกว่าการสูญพันธุ์
ระหว่างในโซลูชั่นฟรีรบกวน ( ยูวีดูดซับ ) สาร ประมาณ
ความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย ( สมมติว่าใช้ของคิวเวตต์กับเส้นทางยาว 1 ซม. )
สามารถประเมินโดยใช้อย่างใดอย่างหนึ่งของสมการต่อไปนี้