The frozen tissues were thawed on i

The frozen tissues were thawed on ice and lysed in buffer (0.05 M Tris–HCl, 0.005 M mgCl2, 0.1 M NaCl, 1% Chaps (w/v), pH 7.0 [32]). The homogenized samples were centrifuged at 16,100g for 2 min at 4 °C. The supernatants were transferred to fresh tubes and used as hPAP stock. HPAP activity in each sample was determined by using a commercial kit (Phospha-Light system). Briefly, the protein concentration in each sample was measured using the BCA assay. One hundred microliters of protein (300 μg) was diluted with an equal volume of 1× assay buffer and incubated at 65 °C for 30 min to inactivate any endogenous alkaline phosphatase activity. The heated samples were then cooled on ice to room temperature and dispensed into 96-well plates (50 μl/well). Fifty microliters of assay buffer (room temperature) was added to each well and incubated for 5 min before addition of reaction buffer (50 μl/well, room temperature). The reaction was incubated for another 20 min and detected for luminescence (0.25 s/well).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื้อเยื่อถูกแช่แข็งละลายน้ำแข็งและ lysed ในบัฟเฟอร์ (0.05 เมตร tris-hcl, 0.005 เมตร MgCl2, 0.1 เมตร nacl, 1% Chaps (w / v) ph 7.0 [32]) ตัวอย่างหดหายถูกหมุนเหวี่ยงที่ 16,100 กรัมเป็นเวลา 2 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส supernatants ถูกถ่ายโอนไปยังหลอดสดและนำมาใช้เป็น hpap หุ้น กิจกรรม hpap ในแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดโดยใช้ชุดการค้า (ระบบ phospha แสง) ชั่วครู่ความเข้มข้นของโปรตีนในแต่ละตัวอย่างถูกวัดโดยใช้การทดสอบเก็บกวาด หนึ่งร้อยสารละลายโปรตีน (300 ไมโครกรัม) ถูกเจือจางด้วยปริมาตรที่เท่ากันของบัฟเฟอร์ 1 ×ทดสอบและบ่มที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อปิดกิจกรรม phosphatase ภายนอกใด ๆ อัลคาไลน์ ตัวอย่างร้อนแล้วระบายความร้อนได้บนน้ำแข็งที่อุณหภูมิห้องและจ่ายเป็นจาน 96 ดี (50 ไมโครลิตร / ดี)ห้าสิบของสารละลายบัฟเฟอร์ทดสอบ (อุณหภูมิห้อง) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะเพิ่มขึ้นของบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (50 ไมโครลิตร / ดีอุณหภูมิห้อง) ปฏิกิริยาถูกบ่มอีก 20 นาทีและตรวจพบการเรืองแสง (0.25 s / ดี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เนื้อเยื่อแช่แข็ง thawed บนน้ำแข็ง และ lysed ในบัฟเฟอร์ (0.05 M Tris–HCl, mgCl2 0.005 M, 0.1 M NaCl, Chaps 1% (w/v), ค่า pH 7.0 [32]) ตัวอย่าง homogenized เป็นกลุ่มถูก centrifuged ที่ 16,100g สำหรับ 2 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatants ถูกโอนย้ายไปหลอดสด และใช้เป็น hPAP หุ้น HPAP กิจกรรมในแต่ละตัวอย่างที่ถูกกำหนดโดยชุดพาณิชย์ (ระบบไฟ Phospha) สั้น ๆ ความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างแต่ละถูกวัดโดยใช้ทดสอบ BCA หนึ่งร้อย microliters โปรตีน (300 μg) ผสม ด้วยปริมาณเท่ากับ 1 ×วิเคราะห์บัฟเฟอร์ และ incubated ที่ 65 ° C สำหรับ 30 นาทีถ้าต้องการยกใด ๆ กิจกรรม endogenous อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส ตัวอย่างว่ายได้แล้วระบายความร้อนด้วยบนน้ำแข็งที่อุณหภูมิห้อง และคำลงในแผ่นดี 96 (50 μl/ดี) Microliters 50 วิเคราะห์บัฟเฟอร์ (อุณหภูมิห้อง) ได้เพิ่มในแต่ละดี และ incubated สำหรับ 5 นาทีก่อนเพิ่มบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (50 μl/ดี อุณหภูมิห้อง) ปฏิกิริยา incubated ในอีก 20 นาที และตรวจพบสำหรับ luminescence (0.25 s/ดี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เนื้อเยื่อแช่แข็งที่ละลายอยู่บนน้ำแข็งและ lysed ในบัฟเฟอร์( 0.05 ม.ทริสเรทติ้ง - HCL / 0.005 นิ้วม. mgcl 2 0.1 ม. NaCl V ( W /ปลาบปลื้ม 1% ) pH 7.0 [ 32 ]) สดพร่องมันเนยเป็นตัวอย่างที่เป็น centrifuged ที่ 16,100 g สำหรับ 2 นาทีที่ 4 ° C supernatants ได้ถูกย้ายไปยังท่อสดและใช้เป็นหลักทรัพย์ hpap กิจกรรม hpap ในตัวอย่างแต่ละครั้งก็ถูกกำหนดโดยการใช้ชุดการค้า(ระบบ phospha-light ) ช่วงระยะเวลาสั้นๆการทำสมาธิโปรตีนที่อยู่ในตัวอย่างของแต่ละวัดได้โดยใช้สอบ/ span >ได้ หนึ่งร้อย microliters ของโปรตีน( 300 ไมโครกรัม)ก็เป็นเจือจางมีปริมาณเท่ากับที่ของ incubated และบัฟเฟอร์ 1 ×สอบที่ C 65 °สำหรับ 30 นาทีเพื่อ inactivate กิจกรรม phosphatase อัลคาไลน์เองในระยะยาวใดๆ ตัวอย่างที่มีความร้อนเย็นบนน้ำแข็งในที่ที่มี อุณหภูมิ ห้องและทำน้ำบริสุทธิ์ใน 96 แผ่นความร้อนได้ดี( 50 μl /ดี)ห้าสิบ microliters ของบัฟเฟอร์สอบ( อุณหภูมิ ห้อง)ได้ถูกเพิ่มลงในการเป็นอย่างดีแต่ละห้องและ incubated สำหรับ 5 นาทีก่อนนอกจากนี้ยังของบัฟเฟอร์สำหรับการตอบสนอง( 50 μl /รวมทั้ง อุณหภูมิ ห้อง) ปฏิกริยาดังกล่าวถูก incubated สำหรับ 20 นาทีอีกครั้งและตรวจพบการ luminescence ( 0.25 S /ดี)