(RT-qPCR)-based detection to identi

(RT-qPCR)-based detection to identify affected individuals. Viral
load assays can quantify ZIKV RNA extracted directly from patient
specimens (e.g., blood) and utilize ZIKV-specific amplification
primers that target conserved regions of the viral genome.4,5
Another viral characterization strategy utilized by researchers
involves infection of cells that are permissive to ZIKV infection
before detection. Studies have shown that human dermal
fibroblasts and placental macrophages can be directly infected
by ZIKV.6,7 By utilizing these in vitro diagnostic methods, it is
possible to characterize the systemic infection to better inform
vaccine or drug development. The objective of the current work
was to determine whether uterine fibroblasts (UF), the primary
histo-architectural cell of the uterus and endometrium, are
susceptible to ZIKV infection in vitro.
Cryopreserved UF were revived as recommended by the
American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA)
and the cells cultured to confluency using methods reported
previously.8 Individual flasks of UF were then infected with either
VR-84 or VR-1843 (ATCC). The inoculum was prepared in 1:100
and 1:1000 dilutions for each strain in low serum UF medium.
Primary infection was conducted by removing growth media and
then adding the diluted inoculum to each cell preparation. Cells
were allowed to equilibrate with the virus for 3 h. Each flask of UF
was then washed with phosphate buffered saline three times to
ensure efficient removal of inoculum. Fresh media were added and
the cells were cultured for 5 days, with aliquots of media removed
at day 3 and day 5 to determine whether there was an incremental
increase in viral load. At day 5, UF were trypsinized, pelleted, and
frozen for RNA extraction on the QIAcube (Qiagen Inc., Valencia,
CA, USA). To detect viral presence in these cultures, RT-qPCR with
primer–probe sets thattarget the envelope region of the virus were
utilized. The relative expression of viral load was analyzed using
the threshold detection cycle (Ct) of each test sample normalized
to NATTROL Zika Virus Ct (see Appendix 1), an inactivated, noninfectious
molecular testing control material (ZeptoMetrix Corporation,
Buffalo, NY, USA).
The results indicated that UF are susceptible to ZIKV infection
(Figure 1). At day 3 and day 5, the conditioned medium exhibited a
higher relative viral load compared to the inoculum for both strains
of ZIKV, with the greatest relative increase observed for the 1:100
dilution of MR766 African strain at both time points. The relative

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

(RT qPCR) -จากการตรวจสอบเพื่อระบุบุคคลที่ได้รับผลกระทบ ไวรัสโหลด assays สามารถกำหนดปริมาณ ZIKV RNA ที่สกัดมาโดยตรงจากผู้ป่วยตัวอย่าง (เช่น เลือด) และใช้เฉพาะ ZIKV ขยายไพรเมอร์ที่กำหนดเป้าหมายพื้นที่อนุรักษ์ของ genome.4,5 ไวรัสกลยุทธ์ไวรัสลักษณะอื่นที่ใช้ โดยนักวิจัยเกี่ยวข้องกับการติดเชื้อของเซลล์ที่จะอนุญาตการติดเชื้อ ZIKVก่อนที่จะตรวจจับ การศึกษาได้แสดงให้เห็นว่ามนุษย์แท้fibroblasts และแมโครฟาจรกจะสามารถติดเชื้อโดยตรงโดย ZIKV.6,7 โดยใช้วิธีการวินิจฉัยเหล่านี้ในหลอดทดลองไปลักษณะการติดเชื้อที่ระบบแจ้งดีกว่าการพัฒนาวัคซีนหรือยาเสพติด วัตถุประสงค์ของการทำงานปัจจุบันเพื่อตรวจสอบว่ามดลูก fibroblasts (UF), หลักมีสถาปัตยกรรมอดีตขเซลล์ของมดลูกและเยื่อบุโพรงมดลูกไวต่อการติดเชื้อ ZIKV ในหลอดทดลองCryopreserved UF ถูกฟื้นขึ้นมาแนะนำโดยคอลเลกชันของวัฒนธรรมอเมริกันชนิด (ATCC มานาสซาส VA สหรัฐอเมริกา)และเซลล์ล้างไป confluency โดยใช้วิธีรายงานpreviously.8 แต่ละขวดของ UF ถูกแล้วติดเชื้ออย่างใดอย่างหนึ่งVR-84 หรือ VR-1843 (ATCC) จัดเตรียมการ inoculum ใน 1: 100และการเจือจาง 1: 1000 สำหรับแต่ละสายพันธุ์ในซีรั่มต่ำปานกลาง UFการติดเชื้อหลักดำเนินการ โดยการเอาสื่อเจริญเติบโต และแล้ว เพิ่ม inoculum เจือจางการเตรียมแต่ละเซลล์ เซลล์ได้รับอนุญาตการ equilibrate ไวรัสสำหรับ 3 ชม แต่ละขวดของ UFถูกแล้วล้าง ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือถึงสามครั้งทำให้การกำจัดที่มีประสิทธิภาพของ inoculum เพิ่มสื่อใหม่ และเซลล์ถูกล้าง 5 วัน กับ aliquots ของสื่อที่ถูกเอาออกวันที่ 3 และวันที่ 5 การตรวจสอบว่า มีการเพิ่มเพิ่มในโหลดไวรัส วันที่ 5, UF ถูก trypsinized สัตว์ และแช่แข็งสำหรับสกัด RNA บน QIAcube (Qiagen Inc. วาเลนเซียCA, USA) การตรวจสอบไวรัสปรากฏในวัฒนธรรมเหล่านี้ qPCR RT ด้วยสีรองพื้น – สอบสวนชุด thattarget ภูมิภาคซองของไวรัสได้ใช้ประโยชน์ นิพจน์แบบสัมพัทธ์ของโหลดไวรัสถูกวิเคราะห์โดยใช้วงจรตรวจจับเกณฑ์ (Ct) ของแต่ละตัวอย่างทดสอบตามปกติNATTROL ทาบ Ct (ดูภาคผนวก 1), การใช้งาน noninfectiousโมเลกุลการทดสอบควบคุมวัสดุ (ZeptoMetrix Corporationบัฟฟาโล นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา)ผลระบุว่า UF มีความไวต่อการติดเชื้อ ZIKV(รูปที่ 1) วันที่ 3 และวันที่ 5 กลางห้องจัดแสดงโหลดไวรัสสูงสัมพัทธ์เมื่อเทียบกับ inoculum สำหรับทั้งสองสายพันธุ์ของ ZIKV เพิ่มญาติสุดปฏิบัติการ 1: 100เจือจางของแอฟริกัน MR766 ความเครียดที่จุดทั้งสองเวลา ญาติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

(RT-qPCR) -based การตรวจสอบเพื่อระบุตัวบุคคลได้รับผลกระทบ Viral
ตรวจโหลดสามารถวัดปริมาณ ZIKV RNA สกัดโดยตรงจากผู้ป่วย
ตัวอย่าง (เช่นเลือด) และใช้ ZIKV เฉพาะการขยาย
ไพรเมอร์ที่กำหนดเป้าหมายภูมิภาคอนุรักษ์ของ genome.4,5 ไวรัส
กลยุทธ์ของตัวละครอีกไวรัสใช้โดยนักวิจัย
ที่เกี่ยวข้องกับการติดเชื้อของเซลล์ที่มีบุตร เพื่อ ZIKV การติดเชื้อ
ก่อนการตรวจสอบ มีการศึกษาแสดงให้เห็นว่าผิวหนังของมนุษย์
รบราและ macrophages รกสามารถติดเชื้อได้โดยตรง
โดย ZIKV.6,7 โดยใช้ในหลอดทดลองวิธีการวินิจฉัยเหล่านี้ก็เป็น
ไปได้ที่จะแสดงลักษณะของการติดเชื้อในระบบที่ดีกว่าการแจ้ง
วัคซีนหรือยาเสพติดการพัฒนา วัตถุประสงค์ของการทำงานในปัจจุบัน
คือการตรวจสอบว่าเซลล์มดลูก (UF) หลัก
เซลล์ HISTO สถาปัตยกรรมของมดลูกและเยื่อบุโพรงมดลูกมีความ
ไวต่อการติดเชื้อ ZIKV ในหลอดทดลอง.
แช่แข็ง UF ฟื้นขึ้นมาตามคำแนะนำของ
อเมริกันเก็บประเภทวัฒนธรรม (ATCC ซาส, VA, USA)
และเซลล์เพาะเลี้ยงที่จะใช้วิธีการ confluency รายงาน
ขวดบุคคล previously.8 ของ UF มีการติดเชื้อแล้วกับทั้ง
VR-84 หรือ VR-1843 (ATCC) เชื้อถูกจัดทำขึ้นใน 1: 100
และ 1: 1,000 เจือจางสำหรับแต่ละสายพันธุ์ในซีรั่มต่ำ UF กลาง.
การติดเชื้อประถมศึกษาได้ดำเนินการโดยการเอาสื่อการเจริญเติบโตและ
แล้วเพิ่มหัวเชื้อเจือจางกับการเตรียมเซลล์แต่ละเซลล์ เซลล์
ได้รับอนุญาตให้สมดุลกับไวรัสเวลา 3 ชั่วโมง กระติกน้ำ UF แต่ละ
ถูกล้างแล้วกับฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือสามครั้งเพื่อ
ให้แน่ใจว่าการกำจัดที่มีประสิทธิภาพของเชื้อ สื่อสดและมีการเพิ่ม
เซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 5 วันด้วย aliquots ของสื่อเอาออก
มาในวันที่ 3 และวันที่ 5 เพื่อตรวจสอบว่ามีการเพิ่มขึ้น
เพิ่มขึ้นในการโหลดไวรัส ในวันที่ 5, UF ถูก trypsinized, เม็ดและ
แช่แข็งสำหรับการสกัด RNA ใน QIAcube (Qiagen อิงค์วาเลนเซีย,
CA, USA) การตรวจสอบสถานะของไวรัสในวัฒนธรรมเหล่านี้ RT-qPCR กับ
ชุดสีรองพื้นสอบสวน thattarget ภูมิภาคซองจดหมายของไวรัสที่ถูก
นำมาใช้ การแสดงออกของญาติของโหลดไวรัสได้รับการวิเคราะห์โดยใช้
วงจรการตรวจสอบเกณฑ์ (CT) ของตัวอย่างทดสอบแต่ละปกติ
จะ NATTROL Zika ไวรัสกะรัต (ดูภาคผนวก 1) การใช้งาน, noninfectious
วัสดุควบคุมการทดสอบโมเลกุล (ZeptoMetrix คอร์ปอเรชั่น
บัฟฟาโล, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) .
ผลการวิจัยพบว่า UF มีความไวต่อการติดเชื้อ ZIKV
(รูปที่ 1) ในวันที่ 3 และวันที่ 5, กลางปรับอากาศแสดง
ปริมาณไวรัสญาติที่สูงขึ้นเมื่อเทียบกับหัวเชื้อสำหรับทั้งสองสายพันธุ์
ของ ZIKV กับการเพิ่มขึ้นของญาติที่ยิ่งใหญ่ที่สุดสำหรับการสังเกต 1: 100
ลดสัดส่วนของสายพันธุ์แอฟริกัน MR766 ทั้งจุดเวลา ญาติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

( RT qpcr ) ซึ่งการตรวจสอบเพื่อระบุผลกระทบบุคคล ไวรัสโหลด zikv ) สามารถวัดปริมาณ RNA ที่สกัดโดยตรงจากคนไข้ตัวอย่าง ( เลือดเช่น ) และใช้ขยายเฉพาะ zikvไพรเมอร์ที่เป้าหมายบริเวณอนุรักษ์ของจีโนมไวรัส 4 , 5 .ลักษณะกลยุทธ์ที่ใช้โดยนักวิจัยไวรัสอื่นเกี่ยวข้องกับการติดเชื้อของเซลล์ที่อนุญาตให้ zikv การติดเชื้อก่อนการตรวจสอบ มีการศึกษาแสดงให้เห็นว่ามนุษย์เนื้อจากคนไทยและ macrophages สามารถติดเชื้อได้โดยตรงโดย zikv . 6 , 7 โดยการใช้วิธีการเหล่านี้ในการวินิจฉัย มันคือเป็นไปได้ในลักษณะการติดเชื้อทั่วร่างกายดีขึ้น แจ้งให้ทราบการพัฒนาวัคซีน หรือ ยา วัตถุประสงค์ของงานปัจจุบันคือ การตรวจสอบว่า มดลูก fibroblasts ( UF ) , หลักhisto สถาปัตยกรรมเซลล์ของมดลูกและมดลูก ,เสี่ยงต่อการติดเชื้อใน zikv หลอดแก้วตรวจสอบคุณภาพของ UF คืนชีพแล้วแนะนําโดยพิมพ์คอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกันและซาส , VA , USA )และเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อ confluency โดยใช้วิธีการรายงานก่อนหน้านี้ 8 แต่ละขวดของ UF แล้วติดเชื้อเหมือนกันvr-84 หรือ vr-1843 ( ATCC ) เชื้อที่เตรียมไว้ในการศึกษา000 และวิธีการสำหรับแต่ละสายพันธุ์ในสื่อ UF ระดับต่ำการติดเชื้อปฐมภูมิ ทำการศึกษาโดยการเอาสื่อการเจริญเติบโตและแล้วเพิ่มจำนวนเชื้อในเซลล์แต่ละขั้นตอนการเตรียมการ เซลล์ได้รับอนุญาต ให้สมดุลกันกับไวรัส 3 ชั่วโมง แต่ละขวดของ UFจากนั้นล้างด้วยเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 3 ครั้งให้ประสิทธิภาพของการกำจัดเชื้อ . สื่อสดเพิ่มเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 5 วัน กับเฉยๆสื่อเอาออกในวันที่ 3 และ 5 วัน พบว่ามีการเพิ่มขึ้นเพิ่มขึ้นในการโหลดไวรัส ในวันที่ 5 , UF เป็น trypsinized เม็ด , และแช่แข็งสำหรับการสกัด RNA ใน qiacube ( QIAGEN อิงค์ , บาเลนเซียแคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) เพื่อตรวจหาไวรัสอยู่ในวัฒนธรรมเหล่านี้ qpcr RT ด้วยไพรเมอร์และสอบสวนชุด thattarget ซองจดหมายภูมิภาคของไวรัสคือใช้ การแสดงออกของญาติของไวรัสถูกวิเคราะห์โดยใช้โหลดเกณฑ์การตรวจสอบวงจร ( CT ) ของแต่ละตัวอย่างการทดสอบมาตรฐานเพื่อ nattrol zika ไวรัส CT ( ดูภาคผนวกที่ 1 ) , noninfectious inactivated ,วัสดุควบคุมคุณภาพการทดสอบโมเลกุล ( zeptometrix คอร์ปอเรชั่นบัฟฟาโล , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา )ผลการศึกษา พบว่า มีความไวต่อการติดเชื้อ zikv UF( รูปที่ 1 ) ในวันที่ 3 และวันที่ 5 , ปรับอากาศมีขนาดกลางเมื่อเทียบกับไวรัสโหลดสูงเชื้อทั้งสองสายพันธุ์ของ zikv กับญาติมากที่สุดพบในการศึกษาเพิ่มการเจือจางของสายพันธุ์ mr766 แอฟริกัน ที่เวลาจุด สัมพัทธ์